多发性骨髓瘤表面靶向治疗蛋白的检测试剂及检测方法技术

本发明专利技术涉及免疫检测技术领域，尤其涉及多发性骨髓瘤表面靶向治疗蛋白的检测试剂及检测方法。本发明专利技术提供的检测试剂中包括包被CD38抗体的磁微粒悬液、包被BCMA抗体的磁微粒悬液和稀释液；所述稀释液为含有甘油的PBS溶液。以本发明专利技术提供的试剂对待测样品进行检测，能够实现细胞表面CD38和BCMA蛋白表达的快速、准确检测。测。

【技术实现步骤摘要】
多发性骨髓瘤表面靶向治疗蛋白的检测试剂及检测方法


[0001]本专利技术涉及免疫检测
，尤其涉及多发性骨髓瘤表面靶向治疗蛋白的检测试剂及检测方法。

技术介绍

[0002]多发性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)是一种浆细胞癌，其治疗方案选择取决于癌症的分期、患者的年龄、肾功能以及患者的基本健康状况。随着生物技术的进步，免疫靶向治疗越来越成为研究的热门。尤其是在血液肿瘤领域，由于血液肿瘤药物容易接触的特点，免疫靶向治疗药物呈现了非常好的效果。其中，CD38和BCMA作为两个非常重要的生物靶点，在多发性骨髓瘤的治疗上有了显著的进展。
[0003]目前免疫靶向治疗主要分为两种：第一种是过继性细胞移植，也称为嵌合抗原受体的工程化T细胞治疗，即CAR
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T疗法。CAR
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T疗法已被证明在白血病患者中成功诱导具有高度特异性的有效抗肿瘤效应。另一种是单克隆抗体，其通过直接细胞毒作用、抗体依赖性细胞毒作用、抗体依赖性细胞吞噬作用、补体依赖性细胞毒作用和细胞间相互作用的干扰，利用自然免疫系统功能来抗癌。单克隆抗体已用于治疗淋巴瘤和白血病。Daratumumab是一种靶向CD38的人源化IgG
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kappa抗体。它通过多种作用增强整体免疫应答，并导致记忆T细胞数量增加和幼稚T细胞数量减少。
[0004]然而，因为多发性骨髓瘤分型繁杂多样的特点，目前的靶向免疫治疗并不能完全治愈多发性骨髓瘤。据报道，部分的抗BCMA CAR T细胞治疗在临床试验中失败，因为MM在治疗后6
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12个月复发。此外，CD38甚至不存在于所有原发性MM细胞中，这说明并不是所有的多发性骨髓瘤患者都适用于同样的靶向免疫治疗手段，如果能有在治疗前检测出该患者适用的治疗方法，将极大的提高医疗资源的利用和提高治疗成功率。
[0005]目前，表面CD38和BCMA蛋白表达的检测在临床中没有报道的方法，在科研中常常通过流式细胞仪技术实现(Li et al.,2021；Salazar
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Camarena et al.,2016)。但是因为仪器设备要求较高、价格较贵的原因，采用流式细胞仪技术不太容易实现。本专利技术提出了一种简便的检测方式，利用小型且检验室常见的检测仪器(血细胞分离机、分光光度计)，快速的估测出表面CD38和BCMA蛋白的相对浓度，有较大的用药方案指导意义。

技术实现思路

[0006]有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供多发性骨髓瘤表面靶向治疗蛋白的检测试剂及检测方法。
[0007]首先本专利技术提供了一种检测试剂，其包括：包被CD38抗体的磁微粒悬液、包被BCMA抗体的磁微粒悬液和稀释液；所述稀释液为含有甘油的PBS溶液。
[0008]本专利技术提供的检测试剂中，所述包被CD38抗体的磁微粒悬液中，包被CD38抗体的磁微粒的浓度为0.1～1mg/mL；一些具体实施例中，包被CD38抗体的磁微粒悬液中，包被CD38抗体的磁微粒的浓度为0.5mg/mL。
[0009]本专利技术提供的检测试剂中，所述包被BCMA抗体的磁微粒悬液中，包被BCMA抗体的磁微粒的浓度为0.1～1mg/mL。一些具体实施例中，包被BCMA抗体的磁微粒悬液中，包被BCMA抗体的磁微粒的浓度为0.5mg/mL。
[0010]本专利技术中，所述包被CD38抗体的磁微粒的粒径为5～100nm；所述包被BCMA抗体的磁微粒的粒径为5～100nm。
[0011]因为在比色皿中，磁微粒的行程比较小，会很快吸附到一侧的电磁铁上，所以要加入的甘油或石蜡油增加溶液的黏度。作为优选，所述稀释液中包含甘油，所述稀释液中甘油的质量分数为5％～20％。一些具体实施例中，所述稀释液中，甘油的质量分数为10％，PBS的浓度为0.1M/L，pH值为7.2。
[0012]本专利技术所述的检测试剂在制备细胞表面CD38抗原和/或BCMA抗原的检测试剂盒中的应用。
[0013]进一步的，本专利技术还提供了一种细胞表面CD38抗原和/或BCMA抗原的检测试剂盒，其包括本专利技术所述的检测试剂。
[0014]一些实施例中，本专利技术所述的检测试剂盒中还包括待测样品处理液，所述待测样品处理液为含有10vol％胎牛血清的RPMI 1640培养基。
[0015]本专利技术中，所述待测样品为骨髓活检样本。
[0016]本专利技术还提供了一种检测装置，其包括设置有电磁铁的试样池，所述试样池的两侧分别设置聚光透镜a和聚光透镜b，所述聚光透镜a远离试样池的一侧设置有光源，所述聚光透镜b远离试样池的一侧设置有狭缝、衍射光栅和CCD图像传感器；所述电磁铁和所述CCD图像传感器与计算机连接；
[0017]所述光源发出的可见光依次通过聚光透镜a、样品池、聚光透镜b和狭缝后衍射至反射光栅上，然后被反射光栅出射至CCD图像传感器上。
[0018]更进一步的，本专利技术还提供了一种细胞表面CD38抗原和/或BCMA抗原的检测方法，其包括将待测样品中分离的细胞分别与所述的检测试剂中的包被CD38抗体的磁微粒悬液和包被BCMA抗体的磁微粒悬液混合、富裕后，分别加入稀释液，然后上样于样品池中，启动电磁铁，2s后检测透光率，标准曲线法计算表面CD38抗原和/或BCMA抗原的含量。
[0019]本专利技术通过不同浓度的标准品的连续数值来看，在第二秒的差异更大，更早或者更晚的数据没有差异。因此，检测第2s的透光率来计算抗原含量。
[0020]本专利技术中，所述试样池上电磁铁的磁场强度为10～1000mT，本专利技术实施例中，所述磁场的强度为200mT。
[0021]本专利技术使用血细胞计数仪提取出等量的多发性骨髓瘤细胞样本分为两个部分，分别加入连接磁微粒的CD38抗体和BCMA抗体进行孵育，这一步为了使连接磁微粒的抗体与细胞表面的靶向治疗靶点蛋白充分结合。之后利用细胞表面包裹不同数量的磁微粒在磁场中运动快慢不同的特性，具体来讲，针对于体积、密度都相似的多发性骨髓瘤细胞，因为其表面上表达的靶向蛋白数量不同，孵育后细胞表面上连接的磁微粒数量也不同。此时施加侧边磁场，靶向蛋白表达相对较多的细胞因为连接的磁微粒数量多，在磁场中运动的速度也较快；与此相对的是，如果该多发性骨髓瘤细胞细胞表面靶向蛋白表达数量少，则该细胞因为连接的磁微粒数量少，在该磁场中运动的速度也较慢。在这些细胞运动的一个特定时刻，即开始施加磁场后2秒时，使用分光光度计计算透光率，便可以通过计算反映出该多发性骨
髓瘤细胞上磁微粒的相对密度，进一步计算出多发性骨髓瘤细胞上靶向蛋白的相对表达含量。
[0022]本专利技术提供的检测试剂中包括包被CD38抗体的磁微粒悬液、包被BCMA抗体的磁微粒悬液和稀释液；所述稀释液为含有甘油的PBS溶液。以本专利技术提供的试剂对待测样品进行检测，能够实现细胞表面CD38和BCMA蛋白表达的快速、准确检测。
附图说明
[0023]图1示磁分光光度计结构，其中，10示光源，20示聚光透镜a，30示试本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测试剂，其包括：包被CD38抗体的磁微粒悬液、包被BCMA抗体的磁微粒悬液和稀释液；所述稀释液为含有甘油的PBS溶液。2.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述包被CD38抗体的磁微粒悬液中，包被CD38抗体的磁微粒的浓度为0.1～1mg/mL；所述包被BCMA抗体的磁微粒悬液中，包被BCMA抗体的磁微粒的浓度为0.1～1mg/mL。3.根据权利要求1或2所述的检测试剂，其特征在于，所述包被CD38抗体的磁微粒的粒径为5～100nm；所述包被BCMA抗体的磁微粒的粒径为5～100nm。4.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述稀释液中甘油的质量分数为5％～20％。5.权利要求1～4任一项所述的检测试剂在制备细胞表面CD38抗原和/或BCMA抗原的检测试剂盒中的应用。6.一种细胞表面CD38抗原和/或BCMA抗原的检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1～4任一项所述的检测试剂。7.根据权利要求6所述的检测试剂盒，其特征在于，还包括待测样品处理液，所述待测样...

【专利技术属性】
技术研发人员：付常铸，王湘雨，常富江，郑业焕，渠海，赵钟灵，付光宇，
申请(专利权)人：郑州安图生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：