一种尿液游离DNA保存剂以及一种尿液保存管制造技术

本发明专利技术涉及一种尿液游离DNA保存剂以及一种含有该保存剂的尿液保存管，尿液游离DNA保存剂，为包含以下质量浓度的物质的Tris

【技术实现步骤摘要】
一种尿液游离DNA保存剂以及一种尿液保存管


[0001]本专利技术涉及医学检验
，具体涉及一种尿液游离DNA保存剂以一种及尿液保存管。

技术介绍

[0002]近年来，国内外相继报道了从各种类型的尿液样本中提取游离DNA的研究。研究人员已从肺结核患者尿液中提取出结核杆菌的DNA、怀有男胎孕妇的尿液样本中提取到Y染色体，同时在大量泌尿系统疾病患者尿液中也检测到了相关突变基因，使得尿液中的DNA作为一种生物标记物来研究基因突变引起的各类疾病成为一种需求。尿液样本易获取，方便操作，且属于非介入采集样本方式。尿液是经膀胱排出的含有大量代谢终产物的液体，因人体自身差异导致其盐浓度、酸碱度、比重指标差异较大，因此DNA所处的环境复杂，极易发生降解，同时尿液中含有大量细菌，离体后很容易造成细菌滋生，所以用于提取DNA的尿液样本需在采集后2小时内进行分离提取DNA。
[0003]但现实样本量大或者检测条件不允许，并不能保证所有样本均能够于2小时内进行处理，为了方便采集、运输和保存尿液，同时给尿液中的脱落细胞及游离DNA提供一个稳定的环境，需要研发一种能于常温保存尿液的保存剂。

技术实现思路

[0004]为解决上述技术中存在的问题，本专利技术提供一种尿液游离DNA保存剂，为包含以下质量浓度的物质的Tris
‑
HCl缓冲液：8％～11％的抗细胞凝结剂、1.5％～25％的细胞固定剂、7.5％～11％的核酸酶抑制剂、0.5％～1.5％的细胞代谢抑制剂、1％～5％自由基清除剂。
[0005]其中，各物质质量浓度为：8％的抗细胞凝结剂、15％的细胞固定剂、9.25％的核酸酶抑制剂、1.5％的细胞代谢抑制剂、5％自由基清除剂。
[0006]其中，所述细胞抗凝剂为右旋糖酐。
[0007]其中，所述细胞固定剂为咪唑烷基脲、重氮咪唑烷基脲中的一种或多种。
[0008]其中，所述细胞固定剂为咪唑烷基脲、重氮咪唑烷基脲，其比例为2:1。
[0009]其中，所述核酸酶抑制剂为乙二胺四乙酸二钾。
[0010]其中，所述细胞代谢抑制剂为氟化钠。
[0011]其中，所述自由基清除剂为谷胱甘肽。
[0012]一种内含上述尿液游离NDA保存剂的尿液保存管。
[0013]其中，所述保存剂体积为A,所述保存管加入尿液后液体总体积为B，则(A/B)*100％≥2％。
[0014]本专利技术的有益效果为：本专利技术提供的一种尿液保存剂其能够将尿液样本于常温(25℃)保存至少7天，并且保存剂相较于尿液样本用量少。
附图说明
[0015]下面结合附图和具体实施方式对本专利技术作进一步详细的说明。
[0016]图1是本专利技术验证试验一尿液样本组DNA电泳图；
[0017]图2是本专利技术验证试验二尿液样本组DNA电泳图。
具体实施方式
[0018]下面结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本专利技术，但是本专利技术还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本专利技术内涵的情况下做类似推广，因此本专利技术不受下面公开的具体实施例的限制。
[0019]本专利技术提供一种尿液游离DNA保存剂以及内含该保存剂的尿液保存管。
[0020]上述保存剂包含如下质量浓度的各成分：
[0021]8％～11％的抗细胞凝结剂、1.5％～25％的细胞固定剂、7.5％～11％的核酸酶抑制剂、0.5％～1.5％的细胞代谢抑制剂、1％～5％自由基清除剂。
[0022]其余成分1.25mol/L的Tris
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HCl缓冲液。
[0023]本保存剂的pH为7.5，使用HCL调节pH。
[0024]其制备方法为，将Tris溶于纯化水中，用HCl调节pH到7.5，制得Tris
‑
HCl溶液；分别将上述各成分加入缓冲液中，最终调节pH至7.5，过滤即得。
[0025]本专利技术提供的尿液保存管内保存剂的用量遵循以下原则：
[0026]保存剂体积为A,保存管加入尿液后液体总体积为B，则(A/B)*100％≥2％。
[0027]实施例一
[0028]保存剂成分：
[0029]抗细胞凝结剂：右旋糖酐(质量浓度8％)；
[0030]细胞固定剂：咪唑烷基脲(质量浓度10％)、重氮咪唑烷基脲(质量浓度5％)；
[0031]细胞代谢抑制剂：氟化钠(质量浓度1.5％)；
[0032]自由基清除剂：谷胱甘肽(质量浓度5％)；
[0033]核酸酶抑制剂：乙二胺四乙酸二钾(质量浓度9.25％)；
[0034]其余成分为：1.25mol/L的Tris
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HCl缓冲液。
[0035]保护剂pH7.5。
[0036]实施例二
[0037]保存剂成分：
[0038]抗细胞凝结剂：右旋糖酐(质量浓度9％)；
[0039]细胞固定剂：咪唑烷基脲(质量浓度1.5％)；
[0040]细胞代谢抑制剂：氟化钠(质量浓度0.5％)；
[0041]自由基清除剂：谷胱甘肽(质量浓度1％)；
[0042]核酸酶抑制剂：乙二胺四乙酸二钾(质量浓度7％)；
[0043]其余成分为：1.25mol/L的Tris
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HCl缓冲液。
[0044]保护剂pH7.5。
[0045]实施例三
[0046]保存剂成分：
[0047]抗细胞凝结剂：右旋糖酐(质量浓度11％)；
[0048]细胞固定剂：咪唑烷基脲(质量浓度25％)；
[0049]细胞代谢抑制剂：氟化钠(1％)；
[0050]自由基清除剂：谷胱甘肽(质量浓度2.5％)；
[0051]核酸酶抑制剂：乙二胺四乙酸二钾(质量浓度11％)；
[0052]其余成分为：1.25mol/L的Tris
‑
HCl缓冲液。
[0053]保护剂pH7.5。
[0054]验证试验一
[0055]1.细胞保存效果测试：
[0056]将上述实施例1至3中的保护剂(0.2ml)加入采集管中，并抽真空至抽吸体积9.8ml，采集志愿者A和B的晨尿样本，每个志愿者的样本分别装入实施例1
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3对应的采集管中，每个实施例为6管。
[0057]上述内含样本的采集管(共计36只)均于室温(25℃)保存0天、4天、7天，每个对应时间点对样本提取DNA进行测试，并对核酸浓度进行测试，取两个平行试验。
[0058]样本处理：1800g、4℃离心10min，分离尿液细胞，使用核酸提取纯化试剂盒按要求进行DNA提取，Quawell Q5000超微量紫外分光光度计测定核酸浓度，并进行凝胶电泳分析。
[0059]结果见图1至图4以及表1；
[0060本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种尿液游离DNA保存剂，其特征在于，为包含以下质量浓度的物质的Tris
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HCl缓冲液：8%～11%的抗细胞凝结剂、1.5%～25%的细胞固定剂、7.5%～11%的核酸酶抑制剂、0.5%～1.5%的细胞代谢抑制剂、1%～5%自由基清除剂。2.根据权利要求1所述的一种尿液游离DNA保存剂，其特征在于，各物质质量浓度为：8%的抗细胞凝结剂、15%的细胞固定剂、9.25%的核酸酶抑制剂、1.5%的细胞代谢抑制剂、5%自由基清除剂。3.根据权利要求1或2所述的一种尿液游离DNA保存剂，其特征在于，所述细胞抗凝剂为右旋糖酐。4.根据权利要求1或2所述的一种尿液游离DNA保存剂，其特征在于，所述细胞固定剂为咪唑烷基脲、重氮咪唑烷基脲中的一种或多种。5...

【专利技术属性】
技术研发人员：高慧，夏中博，郭映辉，
申请(专利权)人：河北鑫乐医疗器械科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：