一种二苯并噻唑类酪氨酸酶荧光探针制造技术

本发明专利技术公开了一种二苯并噻唑类酪氨酸酶荧光探针，具体化学结构式如下所示：本发明专利技术的荧光探针可用快速定量检测食品中酪氨酸酶酶活度。可用快速定量检测食品中酪氨酸酶酶活度。

【技术实现步骤摘要】
一种二苯并噻唑类酪氨酸酶荧光探针


[0001]本专利技术涉及一种二苯并噻唑类酪氨酸酶荧光探针以及其在检测酪氨酸酶中的应用。

技术介绍

[0002]酪氨酸酶(tyrosinase，Tyr，EC 1.14.18.1)，也称为多酚氧化酶、儿茶酚氧化酶等，广泛存在于动植物、微生物以及人体中。它是一种含铜的氧化还原酶，具有复杂的结构和许多亚单位，能够催化单酚和双酚氧化生成苯醌。Tyr具备多种生物学性能。在生物体内可催化氧化酪氨酸或多巴胺合成黑色素，并与其他关键酶结合产生色斑。植物中的Tyr主要参与酚类代谢、果蔬褐变、植物抗病性，还可诱导植物发生抗营养防御反馈，降低草食动物获取营养。此外，它还能抑制细菌并防止其传播。
[0003]目前，Tyr在医药、精细化工、食品、环境等领域具有重要作用。例如，在食品工业中，由于Tyr氧化酚类物质生成黑色素，降低食品的营养价值，影响食品的风味。而在红茶生产、葡萄干和大枣干燥、啤酒生产等过程中，适当添加酪氨酸酶，可以增加产品的色调。目前，常用来检测Tyr的方法包括，电泳法，比色法，电化学法和辐射测量法。
[0004]有机荧光探针因其高稳定性、高选择性和低成本而备受关注，开发一种荧光探针，用于测定食品中酪氨酸酶的含量，具有重要的研究意义。

技术实现思路

[0005]本专利技术目的是提供一种二苯并噻唑类酪氨酸酶荧光探针，它适于食品中酪氨酸酶的检测。
[0006]更具体的是，本专利技术涉及一种二苯并噻唑类酪氨酸酶荧光探针，它通过下式表示：
[0007]附图说明
[0008]图1是在二甲基亚砜/pH 7.4缓冲溶液(v/v＝3∶1)中，随着不同酶活度酪氨酸酶的加入，本专利技术的荧光探针(10μM)的荧光强度变化。嵌入图：酪氨酸酶的酶活度。
[0009]图2是在二甲基亚砜/pH 7.4缓冲溶液(v/v＝3∶1)中，本专利技术的荧光探针(10μM)荧光强度随着酪氨酸酶的酶活度变化的标准曲线。
[0010]图3在365nm紫外灯下，本专利技术的荧光探针溶液加入不同酶活度酪氨酸酶(0，2，4，6，8，10U/mL)后溶液颜色变化情况。
[0011]图4是本专利技术的荧光探针溶液颜色照片的RGB值中R值随着酪氨酸酶的酶活度变化的标准曲线。
[0012]图5是本专利技术的荧光探针溶液颜色照片的RGB值中G值随着酪氨酸酶的酶活度变化的标准曲线。
具体实施方式
[0013]实施例1.二苯并噻唑类酪氨酸酶荧光探针的制备
[0014]合成路线如下式所示：
[0015][0016]于100mL三口烧瓶中，将化合物1(0.43g，1.20mmol)和K2CO3(0.50g，3.60mmol)溶解于N，N
‑
二甲基甲酰胺(40mL)，将间羟基苄基溴(化合物2，0.45g，2.40mmol)溶解于N，N
‑
二甲基甲酰胺(10mL)中，并逐滴滴加到反应体系中，60℃回流6h，用0.12M HCl调节pH至5
‑
6，乙酸乙酯萃取，无水Na2SO4干燥，旋蒸，二氯甲烷重结晶，抽滤，烘干，得0.13g淡黄色固体目标物化合物3，收率23.08％。
[0017]产物经过核磁氢谱、核磁碳谱、高分辨质谱表征。
[0018]1H NMR(300MHz，DMSO)，δ(ppm)：δ9.54(s，1H)，9.22(d，J＝2.4Hz，1H)，8.15(ddd，J＝22.4，10.6，5.4Hz，5H)，7.63
‑
7.43(m，5H)，7.24(t，J＝7.9Hz，1H)，7.05
‑
6.97(m，2H)，6.77(dd，J＝7.3，1.6Hz，1H)，5.52(s，2H).
13
C NMR(75MHz，DMSO)，δ(ppm)：166.77，161.65，158.26，158.03，154.09，151.91，137.63，136.03，134.85，131.35，130.14，127.80，127.17，126.98，126.53，125.87，125.74，123.19，122.81，122.61，122.38，118.96，115.74，115.22，115.10，71.12.
[0019]高分辨：C
27
H
19
N2O2S2[M+H]+
：理论数值：467.088199；实际数值：467.088247。
[0020]实施例2.二苯并噻唑类酪氨酸酶荧光探针定量检测柚子酒、马铃薯中酪氨酸酶活度
[0021]本专利技术的荧光探针的荧光强度随着酪氨酸酶酶活度的变化如图1所示，依据该变化可作出该荧光探针(10μM)荧光强度随着酪氨酸酶酶活度变化的标准曲线，标准曲线如图2所示，通过该标准曲线的建立，本专利技术的荧光探针可用于酪氨酸酶酶活度的定量检测。
[0022]向探针溶液中添加过滤后的1mL柚子酒和马铃薯溶液，测得荧光强度，依据图2标准曲线计算出所测柚子酒、马铃薯中酪氨酸酶活度分别为3.1203
±
0.0195u/mL、4.6281
±
0.0453u/mL。
[0023]将不同酶活度酪氨酸酶滴加到探针溶液中，溶液颜色变化情况如图3所示。随着酪氨酸酶酶活度的增加，本专利技术的荧光探针溶液逐渐由浅黄色变为亮黄色。通过手机取色器
APP，读取探针与不同活度Tyr荧光强度照片的RGB值。发现随着Tyr酶活度的增加，荧光探针的发光强度R值(图4)、G值(图5)分别具有良好的线性关系，G值：y＝6.665x+95.983，相关系数R2＝0.965；R值：y＝7.235x+75.861，相关系数R2＝0.977，可用于检测实际样品中Tyr酶活度。由于柚子酒、马铃薯提取液样品存在背景颜色对G值产生干扰，因此结合R值线性计算得柚子酒中Tyr酶活度为3.0446
±
0.3200u/mL，马铃薯提取液为4.2348
±
0.1905u/mL。
[0024]依据实施例2可证明本专利技术的二苯并噻唑类酪氨酸酶荧光探针是一种快速定量检测食品中Tyr酶活度的良好工具。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种二苯并噻唑类酪氨酸酶荧光探针，...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨绍祥，田红玉，梁森，孙宝国，李雅楠，邓兵，端宁，
申请(专利权)人：北京工商大学，
类型：发明
国别省市：