一种链霉亲和素磁珠及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种链霉亲和素磁珠及其制备方法和应用。所述链霉亲和素磁珠的制备方法包括：利用甲苯磺酰基磁珠与链霉亲和素进行偶联，得到所述链霉亲和素磁珠，所述链霉亲和素磁珠的制备方法不使用交联剂。本发明专利技术采用甲苯磺酰基磁珠制备链霉亲和素磁珠，制备得到的链霉亲和素磁珠偶联效率高，活性强，且无需额外添加交联剂，有效简化工艺、降低成本，此外采用独特的老化缓冲液进行老化，控制老化时间，进一步提高产品的稳定性，在化学发光平台的使用过程中具有优异的性能，并且该工艺易于放大、利于控制。利于控制。利于控制。

【技术实现步骤摘要】
一种链霉亲和素磁珠及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物
，涉及一种链霉亲和素磁珠及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]链霉亲和素磁珠是生物检测领域应用最广泛的磁珠类型之一，链霉亲和素和生物素的特异性结合对于放大发光信号有很好的效果，因此在体外诊断市场中使用率极高，相比于直连抗体的羧基磁珠等需要针对不同项目分别优化试剂体系的产品，链霉亲和素磁珠省去了磁珠偶联抗体这一繁琐的优化步骤，直接作为检测试剂的组分之一使用，有效缩短了不同产品体系的开发周期。目前，制备出性能稳定、批间差异小、成本可控的量产型链霉亲和素磁珠是实现国产链霉亲和素磁珠广泛应用的重要手段。
[0003]链霉亲和素磁珠因与生物素标记配体，如生物素标记核酸、抗体或细胞表面蛋白等有高效地结合力，被广泛应用于生物研发及应用领域，然而链霉亲和素在与磁珠偶联时时常发生附着式地物理连接，不能稳定地与磁珠结合，特别是在后期应用时，经对磁珠反复冲洗，时常发生链霉亲和素从磁珠上剥离的现象。同时，链霉亲和素由于是一种活性物质，偶联磁珠时极易发生失活现象，导致后期链霉亲和素磁珠的低结合效率。因此，一种高效稳定地将链霉亲和素偶联到磁珠的方法亟待研发。
[0004]CN113214403A公开了一种高效链霉亲和素磁珠及其制备方法。所述制备方法包括以下步骤：步骤一、羧基磁珠的活化；步骤二、羧基磁珠与链霉亲和素的共价偶联；步骤三、物理式附着结合的链霉亲和素的剥离及检测；步骤四，链霉亲和素磁珠的淬灭及保存。该专利技术方法制得的链霉亲和素磁珠稳定性好，活性强，偶联效率高，与传统方法相比，偶联效率由58.2%提高到92.7%。该方法适用于羧基磁珠的偶联，但需要使用额外的交联剂，虽工艺合理但不易于放大生产。CN111560368A公开一种链霉亲和素修饰γ
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Fe2O3磁珠的制备方法，其包括以下步骤：步骤一、制备纳米γ
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Fe2O3磁珠；步骤二、用AEAPS修饰纳米粒子表面；步骤三、在纳米γ
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Fe2O3磁珠表面连接链霉亲和素，其同样需使用交联剂。
[0005]综上所述，提供一种高效、稳定易于放大的制备链霉亲和素磁珠的方法，对于生物检测领域具有重要意义。

技术实现思路

[0006]针对现有技术的不足和实际需求，本专利技术提供一种链霉亲和素磁珠及其制备方法和应用，本专利技术采用甲苯磺酰基磁珠与链霉亲和素进行偶联以制备链霉亲和素磁珠，同时结合特定工艺过程，制备得到的链霉亲和素磁珠偶联效率高、活性强、稳定性高，且无需额外添加交联剂，有利于工艺控制。
[0007]为达上述目的，本专利技术采用以下技术方案：第一方面，本专利技术提供一种链霉亲和素磁珠的制备方法，所述链霉亲和素磁珠的制备方法包括：利用甲苯磺酰基磁珠与链霉亲和素进行偶联，得到所述链霉亲和素磁珠，所述链
霉亲和素磁珠的制备方法不使用交联剂。
[0008]本专利技术中，首次以甲苯磺酰基磁珠与链霉亲和素偶联制备链霉亲和素磁珠，无需额外添加交联剂，且制备得到的链霉亲和素磁珠偶联效率高。
[0009]本专利技术中，表面修饰有甲苯磺酰基的磁珠均适用于本专利技术，不作特殊限制，例如可选择苏州纳微生命科技有限公司生产的MagneStar
® MP3
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Tosyl。
[0010]优选地，所述偶联的方法包括：将甲苯磺酰基磁珠、链霉亲和素和偶联缓冲液A混合，再加入偶联缓冲液B，进行偶联反应。
[0011]优选地，所述偶联缓冲液A包括硼酸盐缓冲液。
[0012]本专利技术中，领域内通用硼酸盐缓冲液均适用于本专利技术，例如配方可以为0.05~0.15 M（mol/L） Borate Buffer，pH 9.0~9.5。
[0013]优选地，所述偶联缓冲液B包括硫酸铵缓冲液。
[0014]本专利技术中，领域内通用硫酸铵缓冲液均适用于本专利技术，例如配方可以为1~3 M (NH4)2SO
4 Buffer，pH 8.6~9.5。
[0015]优选地，所述偶联反应的温度为30~50℃，包括但不限于31℃、32℃、33℃、34℃、35℃、36℃、38℃、40℃、42℃、44℃、45℃、46℃、48℃或49℃，时间为16~18 h。
[0016]本专利技术中，可根据实际情况控制加料顺序及方式，例如可先将链霉亲和素预溶解后加料。
[0017]优选地，所述偶联的方法包括以下步骤：（1
’
）将甲苯磺酰基磁珠与偶联缓冲液A混合；（2
’
）将链霉亲和素与偶联缓冲液A混合；（3
’
）将步骤（2
’
）混合液与步骤（1
’
）混合液混合，然后加入偶联缓冲液B，进行偶联反应。
[0018]优选地，所述偶联后还包括剥离物理吸附的链霉亲和素的步骤和封闭及老化的步骤。
[0019]优选地，所述剥离物理吸附的链霉亲和素的步骤包括：将甲苯磺酰基磁珠与链霉亲和素偶联后得到的磁珠与淬灭缓冲液混合，进行淬灭反应，剥离物理吸附的链霉亲和素。
[0020]优选地，所述淬灭缓冲液包括Tris缓冲液。
[0021]本专利技术中，领域内通用Tris缓冲液均适用于本专利技术，例如配方可以为含有5~20 mM（mmol/L）Tris和0.01~0.05% Triton X
‑
100，pH 7.4~8.0。
[0022]优选地，所述淬灭反应的温度30~50℃，包括但不限于31℃、32℃、33℃、34℃、35℃、36℃、38℃、40℃、42℃、44℃、45℃、46℃、48℃或49℃，时间为0.5~3 h，包括但不限于0.6 h、0.7 h、0.8 h、0.9 h、1.2 h、1.5 h、2 h、2.2 h、2.4 h、2.6 h、2.8 h或2.9 h。
[0023]优选地，所述封闭及老化的步骤包括：将经过剥离物理吸附的链霉亲和素的磁珠与封闭缓冲液混合，进行封闭反应，将封闭后磁珠与老化缓冲液混合，进行老化反应。
[0024]优选地，所述封闭缓冲液包括含有BSA的Tris缓冲液。
[0025]本专利技术中，领域内通用含有牛血清白蛋白（BSA）的Tris缓冲液均适用于本专利技术，例
如配方可以为含有5~20 mM Tris Bufffer和1~4% BSA，pH 7.4~8.0。
[0026]优选地，所述封闭反应的温度为30~50℃，包括但不限于31℃、32℃、33℃、34℃、35℃、36℃、38℃、40℃、42℃、44℃、45℃、46℃、48℃或49℃，时间为4~6 h。
[0027]优选地，所述老化缓冲液包括硼酸盐缓冲液。
[0028]本专利技术中，领域内通用硼酸盐缓冲液均适用于本专利技术，例如配方可以为含有5~10 mM Borate buffer和0.1~0.5% BSA，pH 9.0~10.0。
[0029]本专利技术中，创造性采用硼酸盐缓冲液作为老化液，能够进一步提高链霉亲和素磁珠的稳定本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种链霉亲和素磁珠的制备方法，其特征在于，所述链霉亲和素磁珠的制备方法包括：利用甲苯磺酰基磁珠与链霉亲和素进行偶联，得到所述链霉亲和素磁珠；所述链霉亲和素磁珠的制备方法不使用交联剂。2.根据权利要求1所述的链霉亲和素磁珠的制备方法，其特征在于，所述偶联的方法包括：将甲苯磺酰基磁珠、链霉亲和素和偶联缓冲液A混合，再加入偶联缓冲液B，进行偶联反应；所述偶联缓冲液A包括硼酸盐缓冲液；所述偶联缓冲液B包括硫酸铵缓冲液；所述偶联反应的温度为30~50℃，时间为16~18 h。3.根据权利要求2所述的链霉亲和素磁珠的制备方法，其特征在于，所述偶联的方法包括以下步骤：（1
’
）将甲苯磺酰基磁珠与偶联缓冲液A混合；（2
’
）将链霉亲和素与偶联缓冲液A混合；（3
’
）将步骤（2
’
）混合液与步骤（1
’
）混合液混合，然后加入偶联缓冲液B，进行偶联反应。4.根据权利要求1所述的链霉亲和素磁珠的制备方法，其特征在于，所述偶联后还包括剥离物理吸附的链霉亲和素的步骤和封闭及老化的步骤。5.根据权利要求4所述的链霉亲和素磁珠的制备方法，其特征在于，所述剥离物理吸附的链霉亲和素的步骤包括：将甲苯磺酰基磁珠与链霉亲和素偶联后得到的磁珠与淬灭缓冲液混合，进行淬灭反应；所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：张子昕，赵光耀，钱亚如，叶堃，李浩然，郑慧茹，
申请(专利权)人：苏州纳微生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：