一种靶向钙敏感受体的促CCK分泌肽及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种靶向钙敏感受体的促CCK分泌肽及其制备方法和应用。靶向钙敏感受体的促CCK分泌肽为QGDVVALPA活性肽，氨基酸序列为：Gln

【技术实现步骤摘要】
一种靶向钙敏感受体的促CCK分泌肽及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物活性肽领域，尤其是涉及一种靶向钙敏感受体的促CCK分泌肽及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]肥胖已成为全球性的公众健康问题。许多慢性疾病如心血管疾病、II型糖尿病、动脉粥样硬化、脂肪肝、痛风等均与肥胖有关。能量摄入和能量支出不平衡是导致个体超重肥胖的直接原因。因此，为了预防肥胖，限制过多的能量摄取，即限制摄食量是最佳的手段。机体摄食中枢下丘脑和消化道是机体控制摄食调节的关键部位，其中分布着许多与摄食调节有关的脑肠肽。胆囊收缩素(cholecystokinin， CCK)是经典脑肠肽中的一员，可调节机体产生饱感信号，减少机体的摄食量，从而达到抑制食欲的作用。增加肠道CCK的分泌对于预防和缓解肥胖具有重要意义。
[0003]研究已证实CCK的分泌受膳食因素调控。因此，可以通过膳食调控肠道CCK 的分泌进而改善或缓解肥胖及相关的慢性疾病。食源性生物活性肽是一种常见的膳食因子，具有易被人体消化吸收、食用安全性高等特点。国家高度重视食源性生物活性肽产业的发展，明确指出，要加快发展功能性食品，支持发展生物活性肽等保健和健康食品，并开展应用示范。当前食源性生物活性肽的来源主要包括动物蛋白和植物蛋白，而植物蛋白因环境、经济、可持续性等因素受到越来越多的关注。燕麦(Avena sativa L)是我国西部、华北地区的主要农作物之一，具有重要食用价值，其蛋白质含量均高于小麦、玉米、水稻等作物。目前对燕麦多糖和油脂的开发利用较多，但对燕麦蛋白却缺乏开发。以燕麦来源的蛋白为原料，开发生物活性肽具有重要的应用价值和开发前景。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种靶向钙敏感受体的促CCK分泌肽及其制备方法和应用。
[0005]本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现：
[0006]本专利技术第一方面，提供一种靶向钙敏感受体的促CCK分泌肽，靶向钙敏感受体的促CCK分泌肽为QGDVVALPA活性肽，氨基酸序列为： Gln
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Gly
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Asp
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Val
‑
Val
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Ala
‑
Leu
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Pro
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Ala，如SEQ ID NO.1所示。
[0007]燕麦蛋白主要是球蛋白，其中燕麦12S seed storage globulin 1的氨基酸序列如 SEQ ID NO.2所示。可以发现，QGDVVALPA活性肽在燕麦蛋白存在。QGDVVALPA 活性肽可以从燕麦蛋白中制备。
[0008]本专利技术提供的QGDVVALPA活性肽是燕麦来源的，可靶向钙敏感受体(CaSR) 激活Gq信号通路，进而提高胞内钙离子浓度而显著促进肠道内分泌细胞分泌胆囊收缩素(CCK)；同时该活性肽具有安全无毒副作用、耐受胃肠道消化酶酶解和易吸收等优点。
[0009]本专利技术第二方面，提供编码所述靶向钙敏感受体的促CCK分泌肽的多核苷酸。
[0010]本专利技术第三方面，提供所述靶向钙敏感受体的促CCK分泌肽的制备方法，通过基因工程的方法人工合成，或从燕麦蛋白中通过分离纯化的方法直接获得，或直接通过化学合成制备。
[0011]通过基因工程的方法人工合成所述靶向钙敏感受体的促CCK分泌肽是本领域技术人员能够实现的技术方案，例如可以是以DNA重组技术为基础，通过合适的 DNA模板来控制多肽的序列合成。
[0012]关于从燕麦蛋白中通过分离纯化的方法直接获得的方式可以为：基于给定的靶向钙敏感受体的促CCK分泌肽的氨基酸序列，采用生物学技术上常规的酶解、分离、纯化方法从燕麦获取靶向钙敏感受体的促CCK分泌肽。
[0013]通过化学合成制备的方法为采用传统的固相合成法合成上述寡肽。
[0014]本专利技术第四方面，提供含有所述靶向钙敏感受体的促CCK分泌肽的酶解产物的制备方法，采用两步酶解法将燕麦蛋白进行酶解，包括以下步骤：用胃蛋白酶和胰蛋白酶依次酶解燕麦蛋白，得到燕麦蛋白酶解产物，即为含有所述靶向钙敏感受体的促CCK分泌肽的酶解产物。
[0015]在本专利技术的一个实施方式中，所述用胃蛋白酶和胰蛋白酶依次酶解燕麦蛋白的方法，包括如下步骤：
[0016]1)从燕麦中提取燕麦蛋白；
[0017]2)用所述胃蛋白酶酶解所述燕麦蛋白，得到第一次酶解产物；
[0018]3)用所述胰蛋白酶酶解所述第一次酶解产物，得到燕麦蛋白酶解产物。
[0019]在本专利技术的一个实施方式中，从燕麦中提取燕麦蛋白的方法包括以下步骤：
[0020]将燕麦磨粉、脱脂，然后加入蒸馏水中，将pH调到4
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6，用纤维素酶预先处理0.5
‑
2h；然后将pH调至10
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12进行蛋白提取，结束后离心取上清液，将上清液 pH调至4.4
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4.6，静置后离心，水洗；最后干燥得到燕麦蛋白。
[0021]在本专利技术的一个实施方式中，所述胃蛋白酶或胰蛋白酶与所述燕麦蛋白的质量比为1：10
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100。
[0022]在本专利技术的一个实施方式中，所述胃蛋白酶或胰蛋白酶的酶解条件为37℃酶解1
‑
4h。
[0023]在本专利技术的一个实施方式中，步骤3)得到燕麦蛋白酶解产物后，还包括以下步骤：
[0024]将所述燕麦蛋白酶解产物利用Toyopearl HW
‑
40F尺寸排阻色谱柱进行分离，以去离子水作为洗脱剂，以一定的流速进行洗脱、层析纯化，收集不同组分；然后检测不同组分对肠内分泌细胞CCK分泌的影响，选择刺激CCK分泌最高活性的组分为目的组分，即为含有所述靶向钙敏感受体的促CCK分泌肽的酶解产物。
[0025]本专利技术第五方面，提供基于上述制备方法制备的含有所述靶向钙敏感受体的促 CCK分泌肽的酶解产物。
[0026]本专利技术第六方面，提供所述靶向钙敏感受体的促CCK分泌肽、所述含有所述靶向钙敏感受体的促CCK分泌肽的酶解产物在制备具有如下1)
‑
4)中至少一种功能的产品中的应用：
[0027]1)促进CCK分泌；
[0028]2)减缓胃排空；
[0029]3)抑制食欲减少进食量；
[0030]4)预防或辅助治疗肥胖。
[0031]所述靶向钙敏感受体的促CCK分泌肽、所述含有所述靶向钙敏感受体的促 CCK分泌肽的酶解产物具有促进CCK分泌功能，能够减缓胃排空、抑制食欲减少进食量、预防或辅助治疗肥胖。
[0032]本专利技术第七方面，提供一种产品，其中包含所述靶向钙敏感受体的促CCK分泌肽，或所述含有所述靶向钙敏感受体的促CCK分泌肽的酶解产物，所述产品具有如下1)
‑
4)中至少一种功能：
[0033]1)促进CCK分泌；
[0034]2)减缓胃排空；
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向钙敏感受体的促CCK分泌肽，其特征在于，为QGDVVALPA活性肽，氨基酸序列为：Gln
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Gly
‑
Asp
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Val
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Val
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Ala
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Leu
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Pro
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Ala。2.编码权利要求1所述靶向钙敏感受体的促CCK分泌肽的多核苷酸。3.权利要求1所述靶向钙敏感受体的促CCK分泌肽的制备方法，其特征在于，通过基因工程的方法人工合成，或从燕麦蛋白中通过分离纯化的方法直接获得，或直接通过化学合成制备。4.含有权利要求1所述靶向钙敏感受体的促CCK分泌肽的酶解产物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：用胃蛋白酶和胰蛋白酶依次酶解燕麦蛋白，得到燕麦蛋白酶解产物，即为含有权利要求1所述靶向钙敏感受体的促CCK分泌肽的酶解产物。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述胃蛋白酶或胰蛋白酶与所述燕麦蛋白的质量比为1：10
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100；所述胃蛋白酶或胰蛋白酶的酶解条件为37℃酶解1
‑
4h。6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，得到燕麦蛋白酶解产物后，还包括以下步骤：将所述燕麦蛋白酶解产物利用Toyopearl ...

【专利技术属性】
技术研发人员：管骁，宋洪东，黄凯，傅秋云，
申请(专利权)人：上海理工大学，
类型：发明
国别省市：