一种散偏汤UPLC指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱和应用技术

本申请涉及中药领域，具体公开了一种散偏汤UPLC指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱和应用，其建立方法包括以下步骤：（a）制备对照物溶液；（b）取散偏汤制剂，加入甲醇溶液，称定重量，超声处理，取出放冷，再称定重量，用甲醇溶液补足减失的重量，混合，过滤，得到滤液为供试品溶液；（c）吸取参照物溶液和供试品溶液，采集色谱图；（d）选择不同批次散色谱图中均存在色谱峰作为共有峰，得到散偏汤的标准指纹图谱；本申请还公开了通过上述方法得到的散偏汤UPLC标准指纹图谱和标准指纹图谱在散偏汤制剂检测中的应用。本申请具有得到的UPLC指纹图谱可以快速全面反映和控制散偏汤整体质量问题，满足企业对于散偏汤产品质量控制。满足企业对于散偏汤产品质量控制。满足企业对于散偏汤产品质量控制。

【技术实现步骤摘要】
一种散偏汤UPLC指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱和应用


[0001]本申请涉及中药
，更具体地说，它涉及一种散偏汤UPLC指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱和应用。

技术介绍

[0002]偏头痛是常见的神经血管性疾病，多为一侧或两侧颞部反复发作的中重度搏动性头痛，发作前可伴视觉、体觉先兆，发作时常伴有呕吐，与抑郁、焦虑、失眠、认知功能障碍等多种疾病共病，并且会导致脑白质病变、认知下降、无症状脑梗死等多种并发症，严重危害人们的身体健康和生活质量。
[0003]西医西药的作用机制比较单一，对偏头痛的治疗效果不显著，不能对偏头痛的临床治疗有一个全面的调节，因此，中医独特的临床辩证治疗体系，受到越来越多的关注。古代名方散偏汤内含川芎、甘草、白芷、白芍、郁李仁、柴胡、香附和白芥子八味中药材。根据几百年实际临川应用和科学研究表明，散偏汤治疗偏头痛有明显疗效。
[0004]2018年4月，为贯彻《中华人民共和国中医药法》，推动来源于古代经典名方的中药复方制剂稳步发展，为人民群众健康提供更好保障，国家中医药管理局会同国家药品监督管理局制定《古代经典名方目录(第一批)》，其中，散偏汤为目录第98条。但是目前对于散偏汤的报道主要集中于临床用药研究及药理研究方面，对于产品检测质量控制相关研究较少。
[0005]而由于散偏汤成分复杂而多样，对其质量控制也提高了难度。指纹图谱是运用现代分析技术鉴别中药材或中成药的真伪，评价原料药、半成品和成品质量的一致性和稳定性的一种综合分析的有效手段，与现有的单一有效成分或指标性成分的鉴定相比，中药指纹图谱技术综合各种有效化学信息，使结果更为科学合理。目前，中药指纹图谱已成为国内外公认的中药质量控制的重要方法，指纹图谱的研究和建立，对于提高中药质量、促进中药现代化具有重要意义。
[0006]研究散偏汤指纹图谱建立对于全面、综合反应散偏汤产品质量的差异，有效进行全过程质量控制具有重要意义。莫雨佳，王彦等.经典名方散偏汤HPLC指纹图谱的建立及川芎的量值传递研究(J).中国中药杂质，2020.45(3)：573以及刘雪纯，莫雨佳等.经典名方散偏汤的物质基准量值传递分析(J).中国中药杂质，2022.47(8)：2099对于散偏汤的指纹图谱有提及，但是均是HPLC指纹图谱方法，而散偏汤中成分多而复杂，采用该种指纹图谱方法均需要建立两个指纹图谱，花费精力时间多。UPLC指纹图谱相较于HPLC的速度、灵敏度以及分离度更快，因此研究采用UPLC对散偏汤建立指纹图谱对于散偏汤进行质量控制分析具有重要的意义。

技术实现思路

[0007]为了采用UPLC对散偏汤建立指纹图谱，反映和控制散偏汤整体质量，本申请提供
一种散偏汤UPLC指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱和应用。
[0008]第一方面，本申请提供一种散偏汤UPLC指纹图谱的建立方法，采用如下的技术方案：一种散偏汤UPLC指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：(a)对照物溶液的制备：取芍药苷对照品，加入甲醇溶液制成对照物溶液；(b)供试品溶液的制备：取散偏汤制剂，加入甲醇溶液，称定重量，超声处理30min，取出放冷，再称定重量，用甲醇溶液补足减失的重量，混合，过滤，得到滤液为供试品溶液；(c)测定：分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液，注入超高效液相色谱仪，采集色谱图；(d)将步骤(c)中获得的散偏汤供试品溶液的指纹图谱的积分信号导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》软件，选择不同批次散色谱图中均存在色谱峰作为共有峰，得到散偏汤的标准指纹图谱；其中，步骤(c)中，液相色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以磷酸溶液为流动相B；梯度洗脱：0
‑
8min，A 2
→
8％；8
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15min，A 8％；15
‑
25min，A 8
→
15％；25
‑
27min，A 15
→
20％；27
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37min，A 20
→
25％；37
‑
60min，A25
→
70％；检测波长为230nm。
[0009]通过采用上述技术方案，本申请中方法通过对于流动相组成、梯度洗脱程序、流速、检测波长以及供试品溶液的预处理，制定出指纹图谱，利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对30批次的散偏汤进行了UPLC指纹图谱相似度分析，相似度在0.90以上，得到散偏汤UPLC指纹图谱方法可靠，而且操作简便，可以科学、有效评价散偏汤的质量，满足企业对于散偏汤产品质量控制的需求；而且本申请建立的指纹图谱中各批次散偏汤共有峰相对保留时间基本一致，该分析方法稳定性好，能够测定散偏汤的有效成分，最终得到的散偏汤UPLC指纹图谱检测方法，可用于散偏汤的质量控制欲评价，是全面评价散偏汤质量的有效手段。本申请中建立得到的散偏汤UPLC指纹图谱检测方法，以芍药苷作为参照峰，建立了30批散偏汤的UPLC指纹图谱，共13个共有峰，对得到的UPLC共有峰进行分析鉴定，鉴定芥子碱、阿魏酸、芍药苷、芍药内酯苷、甘草酸等成分，进一步阐明了散偏汤的化学物质基础。
[0010]可选的，步骤(b)中，超声处理参数为：功率为320w，频率为40kHz。
[0011]通过采用上述技术方案，通过对于散偏汤产品甲醇溶解后超声处理，实现了利用UPLC技术对散偏汤的指纹图谱研究，作为对于散偏汤的整体研究方法，在该条件下出峰较多，反应信息更加全面，而且精密度高，稳定性和重复性好。
[0012]可选的，步骤(d)中，供试品指纹图谱与对照品指纹图谱相似度不低于0.90。
[0013]可选的，所述共有峰有13个，2号峰为芥子碱，3号峰为芍药内酯苷，4号峰为参照峰芍药苷，5号峰为阿魏酸，7号峰为甘草苷，8号峰为异甘草苷，11号峰为苯甲酰芍药苷，12号峰为甘草酸。
[0014]可选的，标准指纹图谱中，以芍药苷为参照峰，得到共有峰的相对保留时间如下：峰1：0.280；峰2：0.797；峰3：0.897；峰4：1.000；峰5：1.055；峰6：1.110；峰7：1.211；峰8：1.231；峰9：1.262；峰10：1.510；峰11：1.822；峰12：2.038；峰13：2.126。
[0015]可选的，标准指纹图谱中，以芍药苷为参照峰，得到共有峰的相对峰面积如下：峰
1：0.222；峰2：0.442；峰3：0.162；峰4：1.000；峰5：0.347；峰6：0.208；峰7：0.109；峰8：0.064；峰9：0.042；峰10：0.041；峰11：0.060；峰12：0.036；峰13：0.046。
[0016]可选的，步骤(b)中散片汤产品由以下原料制得：白芍777g，川芎1554g，郁李仁155g，柴胡155g，白芥子466g，香附311g，甘草155g，白芷78g。
[0017]通过采用上述技术方案，散偏汤以祛风止痛、行气活血的川本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种散偏汤UPLC指纹图谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：（a）对照物溶液的制备：取芍药苷对照品，加入甲醇溶液制成对照物溶液；（b）供试品溶液的制备：取散偏汤制剂，加入甲醇溶液，称定重量，超声处理30min，取出放冷，再称定重量，用甲醇溶液补足减失的重量，混合，过滤，得到滤液为供试品溶液；（c）测定：分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液，注入超高效液相色谱仪，采集色谱图；（d）将步骤（c）中获得的散偏汤供试品溶液的指纹图谱的积分信号导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》软件，选择不同批次散色谱图中均存在色谱峰作为共有峰，得到散偏汤的标准指纹图谱；其中，步骤（c）中，液相色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以磷酸溶液为流动相B；梯度洗脱：0
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8min，A 2
→
8%；8
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15min，A 8%；15
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25min，A 8
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15%；25
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27min，A 15
→
20%；27
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37min，A 20
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25%；37
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60min，A 25
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70%；检测波长为230nm。2.根据权利要求1所述的一种散偏汤UPLC指纹图谱检测方法，其特征在于：步骤（b）中，超声处理参数为：功率为310
‑
330w，频率为35
‑
45kHz。3.根据权利要求1所述的一种散偏汤UPLC指纹图谱检测方法，其特征在于：步骤（d）中，供试品指纹图谱与对照品指纹图谱相似度不低于0.90。4.根据权利要求1所述的一种散偏汤UPLC指纹图谱检测方法，其特征在于：所述共有峰有13个，2号峰为芥子碱，3号峰为芍药内酯苷，4号峰为参照峰芍药苷，5号峰为阿魏酸，7号峰为甘草苷，8号峰为异甘草苷...

【专利技术属性】
技术研发人员：王龙虎，李丽平，顾选，范玛莉，赵帅丹，王莎，
申请(专利权)人：华颐药业有限公司，
类型：发明
国别省市：