一种靶向递送siRNA仿生纳米颗粒及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种靶向递送siRNA仿生纳米颗粒及其制备方法和应用，所述靶向递送siRNA仿生纳米颗粒为结肠癌细胞膜包裹的siFGFR4/PLGA@CCRM复合纳米颗粒，并提供了其制备方法和应用。本发明专利技术所述方法采用仿生纳米颗粒，高效地实现FGFR4基因的沉默。本发明专利技术所述方法构建了一种可实现siRNA高效递送的体系，它能特异性识别结肠癌细胞，并在癌组织中蓄积，进入细胞后，高效沉默目标基因，抑制目标基因的表达，从而抑制肿瘤的生长。从而抑制肿瘤的生长。从而抑制肿瘤的生长。

【技术实现步骤摘要】
一种靶向递送siRNA仿生纳米颗粒及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及一种靶向递送siRNA仿生纳米颗粒及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]结肠癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一，是世界范围内仅次于肺癌和乳腺癌的第三大常见恶性肿瘤。有研究发现从人结肠肿瘤组织分离的癌症相关成纤维细胞(Cancer associated fibroblasts,CAFs)分泌更多的成纤维细胞生长因子FGF
‑
1和FGF
‑
3，FGF
‑
1和FGF
‑
3表达增加，导致FGFR4的自磷酸化增强。FGFR4的激活可诱导下游信号蛋白丝裂原活化蛋白激酶激酶(Mek)和细胞外信号调节激酶1/2(Erk1/2)的表达，从而促进肿瘤的增殖与转移。大量研究表明，FGFR4是一个有前景的结肠癌治疗靶点，使用siFGFR4敲低FGFR4表达能有效抑制结肠癌肿瘤细胞增殖。然而，如何将siFGFR4靶向递送到癌灶是一个亟待解决的问题。
[0003]近年来，纳米颗粒技术已经在疾病的诊断和治疗领域得到了广泛的研究，在药物递送、光热疗法、诊断成像和光动力疗法等诸多方面具有潜在的应用空间。其中，聚乙二醇曾被广泛用作修饰纳米颗粒表面的重要方法之一，用于逃避网状内皮系统的清除。然而，最近的研究表明，经聚乙二醇修饰的纳米药物，在持续给药后被肝脏迅速清除，这种现象被称为“加速血液清除”。因此，有必要研发更适合体内药物递送的仿生纳米系统。其中，细胞膜仿生技术是一种新颖的纳米粒生物功能化修饰手段，其利用细胞膜作为载体，保留了复杂的抗原信息并且模仿了源细胞的许多自然特性，从而在不考虑内核纳米材料特性的情况下，促进核内纳米粒在体内的长循环和靶向递送。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种靶向递送siRNA仿生纳米颗粒。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：一种靶向递送siRNA仿生纳米颗粒，所述靶向递送siRNA仿生纳米颗粒为癌细胞膜包裹的siRNA/ PLGA@CCRM复合纳米颗粒。
[0006]进一步的，所述siRNA优选为siFGFR4。
[0007]进一步的，癌细胞膜优选为HCT116细胞膜。
[0008]进一步的，所述siRNA/PLGA@CCRM复合纳米颗粒中PLGA与siFGFR4的质量配比为50:1～300:1；所述siFGFR4/PLGA@CCRM复合纳米颗粒的粒径为100～500nm。
[0009]进一步的，所述癌细胞膜与所述siFGFR4/PLGA纳米颗粒的质量配比为1:1～50：1。
[0010]一种靶向递送siRNA仿生纳米颗粒的制备方法，所述方法包括以下步骤：(1)合成siFGFR4/PLGA复合纳米粒；(2)提取癌细胞膜；(3)混合步骤(1)所制备的siFGFR4/PLGA复合纳米颗粒，将步骤(2)所得癌细胞膜与所述siFGFR4/PLGA复合纳米颗粒混合并挤压得到所述仿生纳米颗粒。
[0011]进一步的，所述步骤(2)中提取癌细胞膜的方法为反复冻融法。
[0012]进一步的，所述步骤(3)中，所述挤压步骤通过聚碳酸酯膜进行；所述聚碳酸酯膜的孔径为100～400nm。
[0013]一种靶向递送siRNA仿生纳米颗粒的应用，用于癌症靶向基因治疗的药物的制备。
[0014]进一步的，所述癌症为结肠癌。
[0015]本专利技术构建一种可实现siRNA高效递送的体系。它能特异性识别同源癌细胞，并在癌细胞中蓄积，进入细胞后，高效沉默目标基因，抑制目标基因的表达，从而抑制肿瘤的生长。
[0016]同现有技术相比，本专利技术将结肠癌细胞膜作为siRNA药物的递送载体相比传统的化学合成载体具有较大的优势，其获取方式更为简单、成本低廉、产量较高、成分简单，且本专利技术利用过膜挤压制备癌细胞膜仿生纳米颗粒的方法，能够实现仿生纳米颗粒载体的大量、低成本制备。
[0017]本专利技术制备仿生纳米颗粒的方法能够通过更换聚碳酸酯膜孔径，调控载体尺寸，所制备的仿生纳米颗粒粒径均一，且设备价格低廉、操作简便。
[0018]本专利技术中仿生纳米颗粒制备方法能够保留细胞膜原有的功能蛋白，使仿生纳米颗粒具有特定的生物学功能。
[0019]本专利技术制备的基于siFGFR4的siRNA递送载体，siFGFR4被装载于仿生纳米颗粒内，能有效保护siFGFR4不被核酶降解。
[0020]本专利技术开发了基于结肠癌细胞膜包覆的siRNA仿生纳米颗粒，具有生物相容性高、递送效率高、靶向性好等优势，可有效递送siRNA等小核酸药物，能够调控相应基因表达改变，高效抑制结肠癌中FGFR4表达。
[0021]本专利技术开发了FGFR4靶向治疗新途径，该纳米颗粒同时具有靶向癌灶和抗肿瘤作用。
附图说明
[0022]图1 siFGFR4/PLGA以及siFGFR4/PLGA@CCCM纳米粒的表征。图1A示出了PLGA的粒径；图1B示出了所制备的siFGFR4/PLGA的粒径；图1C示出了结肠癌细胞膜包覆的siFGFR4/PLGA@CCCM仿生纳米颗粒的粒径；图1D示出了siFGFR4/PLGA@CCCM在PBS溶液中不同天数的粒径变化；图1E示出了不同纳米颗粒的粒径及Zeta电位。
[0023]图2示出了HCT116细胞对siFGFR4/PLGA@CCCM纳米粒的摄入。
[0024]图3示出了肿瘤靶向siFGFR4/PLGA@CCCM纳米粒对肿瘤细胞进行靶向递送后其FGFR4基因的表达图。
[0025]图4示出了肿瘤靶向siFGFR4/PLGA@CCCM纳米粒对肿瘤细胞进行靶向递送后其FGFR4 蛋白免疫印迹图。
[0026]图5示出了实验动物分组图。
[0027]图6 示出了不同纳米粒给药后，各实验动物组肿瘤体积变化图。
具体实施方式
[0028]下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施
例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。
[0029]实施例1结合附图1
‑
6，一种靶向递送siRNA仿生纳米颗粒，所述靶向递送siRNA仿生纳米颗粒为癌细胞膜包裹的siRNA/ PLGA@CCRM复合纳米颗粒。
[0030]一种靶向递送siRNA仿生纳米颗粒，所述siRNA优选为siFGFR4。
[0031]一种靶向递送siRNA仿生纳米颗粒，，癌细胞膜优选为HCT116细胞膜。
[0032]一种靶向递送siRNA仿生纳米颗粒，所述siRNA/PLGA@CCRM复合纳米颗粒中PLGA与siFGFR4的质量配比为50:1～300:1，优选为200:1；所述siFGFR4/PLGA@CCRM复合纳米颗粒的粒径为100～500nm。
[0033]一种靶向递送siRNA仿生纳米颗粒，所述癌细胞膜与所述siFGFR4/PL本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向递送siRNA仿生纳米颗粒，其特征在于：所述靶向递送siRNA仿生纳米颗粒为癌细胞膜包裹的siRNA/ PLGA@CCRM复合纳米颗粒。2.根据权利要求1所述的一种靶向递送siRNA仿生纳米颗粒，其特征在于：所述siRNA优选为siFGFR4。3.根据权利要求1所述的一种靶向递送siRNA仿生纳米颗粒，其特征在于：癌细胞膜优选为HCT116细胞膜。4.根据权利要求1
‑
3所述的一种靶向递送siRNA仿生纳米颗粒，其特征在于：所述siRNA/PLGA@CCRM复合纳米颗粒中PLGA与siFGFR4的质量配比为50:1～300:1；所述siFGFR4/PLGA@CCRM复合纳米颗粒的粒径为100～500nm。5.根据权利要求1
‑
4中任一项所述的一种靶向递送siRNA仿生纳米颗粒，其特征在于：所述癌细胞膜与所述siFGFR4/PLGA纳米颗粒的质量配比为1:1～50：1。6.一种根据权利要求1
‑
5中任一项所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：方博，
申请(专利权)人：方博，
类型：发明
国别省市：