表达BCMA特异性嵌合抗原受体的基因工程化T细胞及其在癌症疗法中的用途制造技术

披露了一种表达结合B细胞成熟抗原(BCMA)的嵌合抗原受体(CAR)的基因工程化T细胞及其用于治疗多发性骨髓瘤，例如难治性和/或复发性多发性骨髓瘤的用途。该基因工程化T细胞可以包含被破坏的内源性TRAC基因和/或被破坏的内源性β2M基因。内源性β2M基因。内源性β2M基因。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】表达BCMA特异性嵌合抗原受体的基因工程化T细胞及其在癌症疗法中的用途
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年1月17日提交的美国临时专利申请号62/962,315、2020年4月22日提交的美国临时专利申请号63/013,587、和2020年12月23日提交的美国临时专利申请号63/129,973的优先权权益。每一个先前申请的全部内容特此通过援引以其全文并入。

技术介绍

[0003]多发性骨髓瘤(MM)是骨髓中终末分化浆细胞的恶性肿瘤。MM由通过异常浆细胞分泌单克隆免疫球蛋白(也被称为M
‑
蛋白或单克隆蛋白)或单克隆游离轻链引起，并且通过特征性的骨髓活检发现和可归因于与浆细胞增殖相关的终末器官损伤的症状(高钙血症、肾功能不全、贫血、骨折)而在一系列浆细胞病上区分(Kumar 2017a)。MM占所有血液系统恶性肿瘤的约10％，并且是仅次于非霍奇金淋巴瘤(NHL)的第二常见血液系统恶性肿瘤(Kumar 2017a，Rajkumar和Kumar 2016)。对于大部分患者而言，MM是最终导致死亡的无法治愈的疾病。对治疗MM、尤其是复发性/难治性MM的有效疗法的需求尚未得到满足。

技术实现思路

[0004]本披露至少部分是基于免疫细胞疗法的开发，该免疫细胞疗法涉及包含被破坏的内源性TRAC和β2M基因并且表达靶向B细胞成熟抗原(BCMA)的嵌合抗原受体(CAR)的同种异体T细胞。同种异体抗BCMA CAR
‑
T细胞使得人类多发性骨髓瘤肿瘤(携带BCMA阳性肿瘤细胞)被根除，如在异种移植小鼠模型中观察到的。具有重要意义的是，已经观察到同种异体抗BCMA CAR
‑
T细胞的施用消除了肿瘤负荷并保护动物免受肿瘤细胞的再激发。进一步，同种异体抗BCMA CAR
‑
T细胞显示针对BCMA
+
细胞的高选择性，并且不导致不希望的致癌转化。另外，来自动物模型的数据显示，同种异体抗BCMA CAR
‑
T细胞不诱导移植物抗宿主病(GvHD)或宿主抗移植物病(HvGD)。总之，预期抗BCMA同种异体CAR
‑
T细胞在人类受试者的治疗用途(例如，癌症治疗)中是高度有效且安全的。
[0005]因此，本披露提供了包含基因工程化T细胞的组合物，这些基因工程化T细胞具有被破坏的内源性TRAC和β2M基因并且表达对B细胞成熟抗原(BCMA)具有特异性的嵌合抗原受体(CAR)；和用于治疗癌症(例如，MM)的同种异体抗BCMA CAR
‑
T细胞疗法。这些基因工程化T细胞可以衍生自一个或多个健康供体(例如，健康人类供体)。
[0006]在一些方面，本披露提供了一种基因工程化T细胞群体，该群体包含含有核酸、被破坏的TRAC基因、和被破坏的β2M基因的T细胞，该核酸包含编码结合BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的核苷酸序列。包含该CAR编码序列的核酸可以被插入该被破坏的TRAC基因中。在一些实施例中，该基因工程化T细胞群体可以包含≥30％(例如，约35％
‑
70％)的抗BCMA CAR
+ T细胞、≤0.4％的TCR
+ T细胞、和/或≤30％(例如，约15％
‑
30％)的B2M
+ T细胞。在一些实施例中，该T细胞群体中约35％
‑
65％的T细胞是CAR
+
/TCR
‑
/B2M
‑
。
[0007]在一些实施例中，该抗BCMA CAR包含(i)包含抗BCMA单链可变片段(scFv)的胞外
结构域；(ii)CD8a跨膜结构域；和(iii)包含来自4
‑
1BB的共刺激结构域和CD3ζ信号传导结构域的胞内结构域。例如，该抗BCMA scFv可以包含含有SEQ ID NO:42的重链可变结构域(V
H
)和含有SEQ ID NO:43的轻链可变结构域(V
L
)。在一些实例中，该抗BCMA scFv包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列。在一些实例中，该抗BCMA CAR包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列。
[0008]在一些实施例中，该被破坏的TRAC基因可以通过CRISPR/Cas9基因编辑系统产生，该基因编辑系统包括含有SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的间隔子序列的指导RNA。在一些实例中，该被破坏的TRAC基因具有SEQ ID NO:10的缺失。替代性地或另外，编码抗BCMA CAR的SEQ ID NO:30的核苷酸序列被插入该TRAC基因中，从而例如取代包含SEQ ID NO:10的缺失片段。
[0009]在一些实施例中，该被破坏的β2M基因可以通过CRISPR/Cas9基因编辑系统产生，该基因编辑系统可以包括含有SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8的间隔子序列的指导RNA。在一些实例中，该被破坏的β2M基因可以包含至少一个SEQ ID NO:21
‑
26。
[0010]进一步，本披露提供了一种组合物，该组合物包含本文列出的任何基因工程化T细胞群体和冷冻保存溶液，该基因工程化T细胞群体悬浮于该冷冻保存溶液中。在一些实施例中，该冷冻保存溶液可以包含约2％
‑
10％的二甲亚砜(DMSO)，任选地约5％的DMSO，并且基本上不含血清。在一些实施例中，该组合物可以置于储存小瓶中。在一些实例中，每个储存小瓶含有约25
‑
85x106个细胞/ml。
[0011]在另一方面，本文提供了一种用于使用本文披露的任何基因工程化T细胞群体或如本文也披露的包含其的任何组合物来治疗多发性骨髓瘤(MM)的方法。在一些实施例中，该方法可以包括：(i)向有需要的受试者施用有效量的一种或多种淋巴细胞清除化疗剂；以及(ii)在步骤(i)之后向该受试者施用有效量的如本文披露的任何基因工程化T细胞群体。
[0012]在一些实施例中，向受试者诸如人类患者给予的该有效量的基因工程化T细胞群体足以实现以下中的一项或多项：(a)使该受试者的软组织浆细胞瘤大小(SPD)降低至少50％；(b)使该受试者的血清M
‑
蛋白水平降低至少25％，任选地50％；(c)使该受试者的24小时尿液M
‑
蛋白水平降低至少50％，任选地90％；(d)使该受试者的受累与非受累游离轻链(FLC)水平之间的差值降低至少50％；(e)使该受试者的浆细胞计数降低至少50％；(f)使该受试者的κ与λ轻链比率(κ/λ比率)降低至4:1或更低，该受试者具有产生κ轻链的骨髓瘤细胞；以及(f)使该受试者的κ与λ轻链比率(κ/λ比率)增加至1:2或更高，该受试者具有产生λ轻链的骨髓瘤细胞。在一些实例中，向该受试者给予的该有效量的基因工程化T细胞群体足以使该受试者的血清M
‑
蛋白水平降低至少90％并且使该受试者的24小时尿液M...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种治疗多发性骨髓瘤(MM)的方法，该方法包括：(i)向有需要的受试者施用有效量的一种或多种淋巴细胞清除化疗剂；以及(ii)在步骤(i)之后向该受试者施用有效量的基因工程化T细胞群体；其中该基因工程化T细胞群体包含含有核酸、被破坏的TRAC基因、和被破坏的β2M基因的T细胞，该核酸包含编码结合BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的核苷酸序列；并且其中该编码CAR的核酸被插入该被破坏的TRAC基因中。2.如权利要求1所述的方法，其中该结合BCMA的CAR包含：(i)包含抗BCMA单链可变片段(scFv)的胞外结构域；(ii)CD8a跨膜结构域；以及(iii)包含来自4
‑
1BB的共刺激结构域和CD3ζ信号传导结构域的胞内结构域。3.如权利要求2所述的方法，其中该抗BCMA scFv包含含有SEQ ID NO:42的重链可变结构域(V
H
)和含有SEQ ID NO:43的轻链可变结构域(V
L
)。4.如权利要求3所述的方法，其中该抗BCMA scFv包含SEQ ID NO:41。5.如权利要求1或权利要求2所述的方法，其中该结合BCMA的CAR包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列。6.如权利要求5所述的方法，其中该编码抗BCMA CAR的核酸包含SEQ ID NO:33的核苷酸序列。7.如权利要求1
‑
6中任一项所述的方法，其中该被破坏的TRAC基因通过CRISPR/Cas9基因编辑系统产生，该基因编辑系统包括含有SEQ ID NO:4的间隔子序列的指导RNA。8.如权利要求1
‑
7中任一项所述的方法，其中该被破坏的TRAC基因具有包含SEQ ID NO:10的缺失，任选地其中该被破坏的TRAC基因包含取代该缺失的SEQ ID NO:30的核苷酸序列。9.如权利要求1
‑
8中任一项所述的方法，其中该被破坏的β2M基因通过CRISPR/Cas9基因编辑系统产生，该基因编辑系统包括含有SEQ ID NO:8的间隔子序列的指导RNA。10.如权利要求1
‑
8中任一项所述的方法，其中该被破坏的β2M基因包含SEQ ID NO:21
‑
26中的至少一个。11.如权利要求1
‑
10中任一项所述的方法，其中在该基因工程化T细胞群体中，这些基因工程化T细胞中≥30％是CAR
+
，这些基因工程化T细胞中≤0.4％是TCR
+
，并且/或者这些基因工程化T细胞中≤30％是B2M
+
。12.如权利要求1
‑
11中任一项所述的方法，其中该基因工程化T细胞群体衍生自一个或多个健康人类供体。13.如权利要求1
‑
12中任一项所述的方法，其中该基因工程化T细胞群悬浮于冷冻保存溶液中。14.如权利要求1
‑
13中任一项所述的方法，其中该有效量的基因工程化T细胞群体的范围是从约5.0x107至约7.5x108个CAR
+ T细胞，任选地其中该有效量的基因工程化T细胞群体的范围是从约5.0x107至约1.5x108个CAR
+ T细胞、约1.5x108至约4.5x108个CAR
+ T细胞、约4.5x108至约6.0x108个CAR
+ T细胞、或约6.0x108至约7.5x108个CAR
+ T细胞。15.如权利要求14所述的方法，其中该有效量的基因工程化T细胞群体是约5.0x107个CAR
+ T细胞、约1.5x108个CAR
+ T细胞、约4.5x108个CAR
+ T细胞、约6.0x108个CAR
+ T细胞、或
约7.5x108个CAR
+ T细胞。16.如权利要求1
‑
15中任一项所述的方法，其中该基因工程化T细胞群体通过静脉内输注施用。17.如权利要求1
‑
16中任一项所述的方法，其中步骤(i)包括向该受试者每天静脉内共同施用约30mg/m2的氟达拉滨和约300mg/m2的环磷酰胺，持续三天。18.如权利要求1
‑
16中任一项所述的方法，其中步骤(i)包括向该受试者每天静脉内共同施用约30mg/m2的氟达拉滨和约500mg/m2的环磷酰胺，持续三天。19.如权利要求1
‑
18中任一项所述的方法，其中步骤(ii)在步骤(i)之后2
‑
7天进行。20.如权利要求1
‑
19中任一项所述的方法，其中在步骤(i)之前，该人类患者不显示以下特征中的一种或多种：(a)临床状态显著恶化，(b)需要补充氧气以维持大于约91％的饱和度水平，(c)不受控制的心律失常，(d)需要血管升压药支持的低血压，(e)活动性感染，以及(f)增加免疫效应细胞相关神经毒性综合征(ICANS)的风险的神经毒性。21.如权利要求1
‑
20中任一项所述的方法，其中在步骤(ii)之前和在步骤(i)之后，该人类患者不显示以下特征中的一种或多种：(a)活动性不受控制的感染，(b)与步骤(i)之前的临床状态相比的临床状态恶化，以及(c)增加免疫效应细胞相关神经毒性综合征(ICANS)的风险的神经毒性。22.如权利要求1
‑
21中任一项所述的方法，该方法进一步包括(iii)在步骤(ii)之后监测该人类患者的急性毒性的发展。23.如权利要求22所述的方法，其中急性毒性包括细胞因子释放综合征(CRS)、神经毒性、肿瘤溶解综合征、噬血细胞性淋巴组织细胞增生症(HLH)、细胞减少症、GvHD、低血压、肾功能不全、病毒性脑炎、中性粒细胞减少症、血小板减少症或其组合。24.如权利要求22或权利要求23所述的方法，其中如果观察到毒性的发展，则对该患者进行毒性管理。25.如权利要求1
‑
24中任一项所述的方法，其中该受试者是人类患者，任选地18岁或更大。26.如权利要求1
‑
25中任一项所述的方法，其中该受试者患有复发性和/或难治性MM。27.如权利要求1
‑
26中任一项所述的方法，其中该受试者经历至少两个针对MM的先前疗法。28.如权利要求27所述的方法，其中这些至少两个先前疗法包括免疫调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗CD38抗体、或其组合。29.如权利要求28所述的方法，其中该受试者对于包括免疫调节剂和蛋白酶体抑制剂的先前疗法是难治性的。30.如权利要求28所述的方法，其中该受试者对于包括免疫调节剂、蛋白酶体抑制剂、和抗CD38抗体的先前疗法是难治性的。
31.如权利要求1
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30中任一项所述的方法，其中该受试者在自体干细胞移植(SCT)之后复发，并且其中任选地该复发在该SCT之后12个月内发生。32.如权利要求1
...

【专利技术属性】
技术研发人员：JA特雷特，E莫拉瓦，J萨格特，AY维弗，
申请(专利权)人：克里斯珀医疗股份公司，
类型：发明
国别省市：