一种北醇葡萄的组织培养方法技术

本发明专利技术涉及植物培养技术领域，具体涉及一种北醇葡萄单芽茎段的组织培养方法，所述培养方法包括以下步骤：外植体的选择、外植体的消毒、诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗和移栽；本发明专利技术提供的一种北醇葡萄单芽茎段的组织培养方法，使之北醇葡萄组织培养萌芽率高、增殖系数大、生根率好、褐化率低，培养周期短，且成活率高，有较好的市场前景、适宜推广。适宜推广。

【技术实现步骤摘要】
一种北醇葡萄的组织培养方法


[0001]本专利技术涉及植物培养
，具体涉及一种北醇葡萄的组织培养方法。

技术介绍

[0002]北醇葡萄，欧山杂种，1954年由中国科学院植物研究所北京植物园以玫瑰香与山葡萄杂交培育而成。该品种丰产，含糖量高，是优良的酿酒品种，所酿之酒宝石红色，澄清透明，柔和爽口，酒香良好，回味绵长；且适应性极强，抗寒、抗旱、抗湿力均较强，也是优良砧木之一。北醇葡萄传统的繁殖方法主要是利用扦插、嫁接等繁殖方法，但这些繁殖方法一方面需要大量的母株，另方面还需花费大量人力、物力、财力、时间等，且繁殖系数低，成苗慢。随着人们生活水平的提高，对高品质葡萄酒和优质鲜食葡萄的需要越来越大，进而需要大量的北醇葡萄苗木。因此，传统的繁殖方法已远远不能满足生产上的需要。
[0003]植物组织培养技术是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官（如根、茎、叶、茎尖、花、果实等）、组织（如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等）或细胞（如大孢子、小孢子、体细胞等）以及原生质体，在无菌和适宜的人工培养基及温度等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株的学科技术。植物组培苗具有根系发达，生长健壮，抗性增强，管理粗放，降低生产成本等特点。组织培养技术不仅具有繁殖系数大、成苗周期短的优点，而且能够保持亲本优良遗传性状的稳定性，为北醇葡萄快速繁殖和工业化生产提供了一条有效的途径。

技术实现思路

[0004]（一）解决的技术问题本专利技术为解决上述不足提供一种北醇葡萄的组织培养方法，使之葡萄组织培养萌芽率高、增殖系数大、生根率好，培养周期短，且成活率高。
[0005]（二）采用的技术方案本专利技术为实现上述目的，通过以下技术方案予以实现：一种北醇葡萄单芽茎段的组织培养方法，其特征在于，所述培养方法包括以下步骤：（1）外植体的选择：选自北醇葡萄当年生、健壮无病虫害的半木质化的新梢作为外植体，所述北醇葡萄采自宿豫区运河湾农科院葡萄种质资源圃内；（2）外植体的消毒：将剪取的外植体放入纱网袋中用流水冲洗4
‑
6h，转入超净工作台中打开紫外灯灭菌20
‑
40min，随后关闭紫外灯通风8
‑
15min，用无菌水浸泡20
‑
40min，再用75%乙醇浸泡30s，接着用无菌水冲洗外植体2
‑
3次，再用0.06
‑
0.15%HgCl2表面消毒3
‑
12min，用流水冲洗过6
‑
10min，再用无菌水冲洗4
‑
5次，然后用无菌滤纸吸干表面水渍，最后切成长度为1.0
‑
2.0cm的单芽茎段备用；（4）诱导培养：将上述外植体接入诱导培养基进行诱导培养，诱导培养基配比为：MS＋0.1
‑
0.3mg/LIBA+0.5
‑
1.5mg/L6
‑
BA；（5）增殖培养：将生长状况良好、紧密，带有绿色芽点的愈伤组织进行接入增殖培
养基进行增殖培养，增殖培养基配比为：MS+0.1
‑
0.3mg/LIBA+0.1
‑
0.5mg/L6
‑
BA；（6）生根培养：选择2
‑
3cm高、生长健壮的试管苗先在空白MS培养基上培养14d左右，再接入生根培养基进行培养，生根培养基配比为：MS＋0.1
‑
0.3mg/L IBA+0.05
‑
0.15mg/L 6
‑
BA；（7）炼苗：当瓶苗的根长为3
‑
5cm，形成具有完整根、茎、叶时，首先将组培苗移入温室，温度20
‑
25℃，相对空气湿度＞85% ，打开瓶口，每瓶倒入20
‑
30ml无菌水，适应7
‑
10d，然后小心取出苗，尽可能不伤及根系，用温水冲洗掉根部残留的培养基，移栽到基质（草炭∶田园土∶蛭石∶珍珠岩= 2∶4∶1∶1混合）中，栽后浇透水，期间浇灌稀释10
‑
15 倍B5培养液，并喷施800倍液多菌灵1
‑
2次，盖膜保湿，保持温度在20
‑
25℃，喷水1次/3d，每天早晚适当通风换气，10
‑
15d后去掉薄膜。
[0006]（8）移栽：经过上述练苗后，选择阴天天气，将葡萄苗移栽到大田或容器中，按照常规育苗管理即可。
[0007]作为本方案的进一步优化，所述外植体的诱导培养、增殖培养和生根培养都在培养室内进行，且各培养基中均加入30g/L蔗糖，7.0g/L琼脂，水解酪蛋白0.1g/L，pH值均为5.6
‑
6.0；所述外植体的生根培养基中要额外加入活性炭1.0g/L；培养室培养条件为温度26
±
2℃，光照强度2000lx，光照时间10
‑
2h/d。
[0008]（三）有益效果本专利技术通过采用选自宿豫区运河湾农科院葡萄种质资源圃内中当年生、健壮无病虫害的半木质化的新梢作为外植体，通过外植体的选择、消毒、诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗和移栽使之北醇葡萄组织培养萌芽率高、增殖系数大、生根率好，培养周期短，且成活率高，有较好的市场前景、适宜推广。
具体实施方式
[0009]本说明书中公开的所有特征，或公开的所有方法或过程中的步骤，除了互相排斥的特征和/或步骤以外，均可以以任何方式组合。
[0010]本说明书（包括任何附加权利要求、摘要）中公开的任一特征，除非特别叙述，均可被其他等效或具有类似目的的替代特征加以替换。即，除非特别叙述，每个特征只是一系列等效或类似特征中的一个例子而已。
[0011]实施例1：一种北醇葡萄单芽茎段的组织培养方法，其特征在于，所述培养方法包括以下步骤：（1）外植体的选择：选自北醇葡萄当年生、健壮无病虫害的半木质化的新梢作为外植体，所述北醇葡萄采自宿豫区运河湾农科院葡萄种质资源圃内；（2）外植体的消毒：将剪取的外植体放入纱网袋中用流水冲洗4h，转入超净工作台中打开紫外灯灭菌20min，随后关闭紫外灯通风8min，用无菌水浸泡20min，再用75%乙醇浸泡30s，接着用无菌水冲洗外植体2次，再用0.06%HgCl2表面消毒3min，用流水冲洗过6min，再用无菌水冲洗4次，然后用无菌滤纸吸干表面水渍，最后切成长度为2.0cm的单芽茎段备用；（4）诱导培养：将上述外植体接入诱导培养基进行诱导培养，诱导培养基配比为：
MS＋0.1mg/LIBA+0.5mg/L6
‑
BA；（5）增殖培养：将生长状况良好、紧密，带有绿色芽点的愈伤组织进行接入增殖培养基进行增殖培养，增殖培养基配比为：MS+0.1mg/LIBA+0.1mg/L6
‑
BA；（6）生根培养：选择2
‑
3cm高、生长健壮的试管苗先在空白MS培养基上培养14d左右，再接入生根培养基进本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种北醇葡萄单芽茎段的组织培养方法，其特征在于，所述培养方法包括以下步骤：（1）外植体的选择：选自北醇葡萄当年生、健壮无病虫害的半木质化的新梢作为外植体，所述北醇葡萄采自宿豫区运河湾农科院葡萄种质资源圃内；（2）外植体的消毒：将剪取的外植体放入纱网袋中用流水冲洗4
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6h，转入超净工作台中打开紫外灯灭菌20
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40min，随后关闭紫外灯通风8
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15min，用无菌水浸泡20
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40min，再用75%乙醇浸泡30s，接着用无菌水冲洗外植体2
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3次，再用0.06
‑
0.15%HgCl2表面消毒3
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12min，用流水冲洗过6
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10min，再用无菌水冲洗4
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5次，然后用无菌滤纸吸干表面水渍，最后切成长度为1.0
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2.0cm的单芽茎段备用；（4）诱导培养：将上述外植体接入诱导培养基进行诱导培养，诱导培养基配比为：MS＋0.1
‑
0.3mg/LIBA+0.5
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1.5mg/L6
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BA；（5）增殖培养：将生长状况良好、紧密，带有绿色芽点的愈伤组织进行接入增殖培养基进行增殖培养，增殖培养基配比为：MS+0.1
‑
0.3mg/LIBA+0.1
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0.5mg/L6
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BA；（6）生根培养：选择2
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3cm高、生长健壮的试管苗先在空白MS培...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘威，罗桂杰，蔡卫佳，刘旭，王昊，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院宿迁农科所，
类型：发明
国别省市：