一株H9亚型禽流感病毒分离株及其应用制造技术

本发明专利技术提供了H9亚型禽流感HF株以及其灭活抗原制备的疫苗组合物物，该株具有良好的免疫原性，在低含量条件下即能对现有的H9亚型禽流感完全保护，且能与多种其他抗原制备联苗和复合疫苗。复合疫苗。复合疫苗。

【技术实现步骤摘要】
一株H9亚型禽流感病毒分离株及其应用
[0001]本申请是中国专利申请号201910928612.X，申请日2019年09月28日，专利技术名称是“一株H9亚型禽流感病毒分离株及其应用”的中国专利申请的分案申请。


[0002]本专利技术涉及动物病毒学领域，具体涉及一株H9N2禽流感病毒毒株的分离鉴定和纯化方法，以及用该毒株制备的预防禽流感的灭活疫苗。

技术介绍

[0003]禽流感(Avian influenza，AI)是由禽流感病毒(Avian influenza virus，AIV)引起的一种急性、热性、高度接触性禽类传染病，AIV是一种单股负链分节段RNA病毒，属于正黏病毒科，A型流感病毒属。根据病毒致病性和毒力不同，在临床上可分为高致病性禽流感病毒和低致病性禽流感病毒，而根据其表面糖蛋白血凝素(Hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)的差异，可将A型流感病毒分为不同的亚型，目前在禽类中分离的流感病毒HA亚型有16种和NA亚型有10种。
[0004]低致病性禽流感病毒种类繁多，但主要以H9亚型为主，其中在我国广泛流行的为H9N2亚型禽流感病毒。该亚型病毒单纯感染鸡时发病率高，死亡率低，仅出现轻微的呼吸道症状，引起产蛋率和孵化率下降，但由于易与其他致病微生物发生协同作用，造成继发感染，从而引起了禽群的高致死率，所以对养禽业危害巨大。
[0005]目前疫苗接种是防控H9N2亚型禽流感的主要手段之一，但由于病毒可以通过抗原漂移和抗原转变两种途径产生变异株，导致HA和NA抗原性发生变化，引起免疫失败。特别是近年来禽群感染H9N2亚型禽流感的情况不断发生，甚至出现在免疫群体，这种现象出现的原因是现用疫苗株与目前流行野毒株之间存在较大的遗传距离及抗原性差异，导致疫苗株的免疫保护效力下降。因此，目前存在的问题是需要研究开发一种可以对流行野毒株提供有效交叉保护的，用于预防H9亚型禽流感的疫苗。

技术实现思路

[0006]为解决现有的技术问题，本专利技术提供一种H9亚型禽流感病毒分离株以及利用该毒株制备的灭活疫苗。该禽流感病毒分离株属于H9亚型，具有良好的交叉免疫原性，以该分离株制得的灭活疫苗可以对新型H9亚型禽流感流行野毒株提供有效的交叉保护。
[0007]为达到上述目的，本专利技术自国内某发病鸡场分离一株H9亚型禽流感HF株，保藏号为CCTCC NO：V201941。
[0008]HF株具备下述特点：
[0009](1)所述毒株为禽流感病毒H9N2亚型毒株。
[0010](2)所述毒株可在鸡胚中高滴度生长，血凝素效价稳定在1∶512。
[0011](3)所述毒株对鸡胚的半数感染量(EID
50
)可达10
9.17
/0.1ml，测定静脉接种致病指数(IVPI)为0，证明该毒株为低致病力毒株。
[0012](4)交叉血凝抑制实验证明所述毒株与新型H9亚型禽流感流行野毒株的抗原相关性良好。
[0013]禽流感病毒(H9亚型)HF株(Avian Influenza Virus(Subtype H9)，Strain HF)，保藏号为CCTCC NO：V201941，保藏日期为2019年06月19日，保藏地址为中国武汉
·
武汉大学。
[0014]本专利技术中所用术语H9亚型禽流感病毒也称为禽流感病毒H9亚型。
[0015]类似的，本专利技术中所用术语禽流感病毒H9亚型HF株也称为H9亚型禽流感病毒HF株。
[0016]本专利技术还涉及一种疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包含免疫量的所述的H9亚型禽流感HF株或其培养物灭活抗原和药学上可接受的载体。
[0017]作为本专利技术的一种实施方式，本专利技术所述的疫苗组合物中，所述H9亚型禽流感HF株或其培养物灭活抗原含量为灭活前≥10
6.5
EID
50
/0.1ml。
[0018]本专利技术的H9亚型禽流感HF株或其培养物灭活抗原免疫原性良好，含量仅为10
6.5
EID
50
/0.1ml也能产生完全免疫保护。
[0019]作为本专利技术的一种优选实施方式，本专利技术所述的疫苗组合物中，所述H9亚型禽流感HF株或其培养物灭活抗原含量为灭活前10
6.5
～10
8.5
EID
50
/0.1ml。
[0020]作为本专利技术的一种更优选实施方式，本专利技术所述的疫苗组合物中，所述H9亚型禽流感HF株或其培养物灭活抗原含量为灭活前10
8.0
EID
50
/0.1ml。
[0021]作为本专利技术的一种实施方式，本专利技术所述的疫苗组合物中，所述药学上可接受的载体为佐剂，所述佐剂所述包括：(1)白油、铝胶佐剂、皂苷、阿夫立定、DDA；(2)油包水乳剂、水包油乳剂、水包油包水乳剂；或(3)丙烯酸或甲基丙烯酸的聚合物、顺丁烯二酸酐和链烯基衍生物的共聚物；以及RIBI佐剂系统、Block co
‑
polymer、SAF
‑
M、单磷酰脂质A、Avridine脂质
‑
胺佐剂、大肠杆菌不耐热肠毒素、霍乱毒素、IMS 1314、胞壁酰二肽、Montanide ISA 206、Gel佐剂中的一种或几种；优选地，皂苷为Quil A、QS
‑
21、GPI
‑
0100；
[0022]所述佐剂含量为5％
‑
70％V/V。
[0023]优选地，所述佐剂为白油佐剂，其用于制备油包水乳剂；
[0024]所述佐剂的浓度范围是从5％到70％V/V，优选从30％到70％，更优选66％V/V。
[0025]本专利技术的疫苗组合物进一步包含其它病原体或抗原组合使用以制备抵抗包括H9亚型禽流感病毒感染的各种疾病的联合疫苗或复合疫苗。
[0026]作为本专利技术的一种实施方式，本专利技术所述的疫苗组合物中，所述疫苗组合物还包括以下抗原的一种或多种：鸡新城疫病毒抗原、禽减蛋综合征病毒抗原、鸡传染性支气管炎病毒抗原、鸡传染性法氏囊病病毒抗原、禽腺病毒抗原、禽呼肠孤病毒抗原、大肠杆菌抗原、副鸡禽杆菌抗原、滑液囊支原体抗原、鸡毒支原体抗原、多杀性巴氏杆菌抗原、马立克氏病毒抗原、禽脑脊髓炎病毒抗原、鸡传染性喉气管炎病毒抗原。
[0027]作为本专利技术的一种优选实施方式，本专利技术所述的疫苗组合物中，所述疫苗组合物还包括由以下抗原组成的组中的一种或多种：鸡新城疫病毒灭活抗原、禽减蛋综合征病毒灭活抗原、鸡传染性支气管炎病毒灭活抗原、鸡传染性法氏囊病病毒亚单位抗原、禽腺病毒灭活抗原。
[0028]作为本专利技术的一种更优选实施方式，本专利技术所述的疫苗组合物中，所述疫苗组合
物还包括由以下抗原组成的组中的一种或多种：所述鸡新城疫病毒N7a株灭活抗原、所述禽减蛋综合征病毒HX株灭活抗原、所述鸡传染性支气管炎病本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.H9亚型禽流感HF株，保藏号为CCTCC NO：V201941。2.一种疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包含免疫量的权利要求1所述的H9亚型禽流感HF株或其培养物灭活抗原和药学上可接受的载体。3.根据权利要求2所述的疫苗组合物，其中，所述H9亚型禽流感HF株或其培养物灭活抗原含量为灭活前≥10
6.5
～10
8.5
EID
50
/0.1ml；优选地，所述H9亚型禽流感HF株或其培养物灭活抗原含量为灭活前10
8.0
EID
50
/0.1ml。4.根据权利要求2所述的疫苗组合物，其中，所述药学上可接受的载体为佐剂，所述佐剂所述包括：(1)白油、铝胶佐剂、皂苷、阿夫立定、DDA；(2)油包水乳剂、水包油乳剂、水包油包水乳剂；或(3)丙烯酸或甲基丙烯酸的聚合物、顺丁烯二酸酐和链烯基衍生物的共聚物；以及RIBI佐剂系统、Block co
‑
polymer、SAF
‑
M、单磷酰脂质A、Avridine脂质
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胺佐剂、大肠杆菌不耐热肠毒素、霍乱毒素、IMS 1314、胞壁酰二肽、Montanide ISA 206、Gel佐剂中的一种或几种；优选地，皂苷为QuilA、QS
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21、GPI
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0100；所述佐剂含量为5％
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70％V/V；优选地，所述佐剂为白油佐剂，其用于制备油包水乳剂；所述佐剂的浓度范围是从5％到70％V/V，优选从30％到70％，更优选66％V/V。5.根据权利要求2所述的疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物还包括以下抗原的一种或多种：鸡新城疫病毒抗原、禽减蛋综合征病毒抗原、鸡传染性支气管炎病毒抗原、鸡传染性法氏囊病病毒抗原、禽腺病毒抗原、禽呼肠孤病毒抗原、大肠杆菌抗原、副鸡禽杆菌抗原、滑液囊支原体抗原、鸡毒支原体抗原、多杀性巴氏杆菌抗原、马立克氏病毒抗原、禽脑脊髓炎病毒抗原、鸡传染性喉气管炎病毒抗原；优选地，所述疫苗组合物包括由以下抗原组成的组中的一种或多种：鸡新城疫病毒灭活抗原、禽减蛋综合征病毒灭活抗原、鸡传染性支气管炎病毒灭活抗原、鸡传染性法氏囊病病毒亚单位抗原、禽腺病毒灭活抗原；更优选地，所述鸡新城疫病毒灭活抗原为鸡新城疫病毒N7a株灭活抗原、所述禽减蛋综合征病毒灭活抗原为禽减蛋综合征病毒HX株灭活抗原、所述鸡传染性支气管炎病毒灭活抗原为鸡传染性支气管炎病毒M41株灭活抗原、所述鸡传染性法支气管炎病毒灭活抗原为鸡传染性氏囊病病毒VP2亚单位抗原、所述禽腺病毒灭活抗原为禽腺病毒FAV
‑
HN株灭活抗原，其中，所述禽减蛋综合征病毒HX株灭活抗原的保藏号为CCTCC NO：V201942。6.根据权利要求5所述的疫苗组合物，其中，所述H9亚型禽流感病毒HF株或其培养物灭活抗原含量为灭活前10
6.5
～10
8.5
EID
50
/0.1ml，所述鸡新城疫病毒灭活抗原含量为灭活前10
8.0
～10
9.0
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【专利技术属性】
技术研发人员：田克恭，王婉冰，张许科，
申请(专利权)人：洛阳惠中生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：