VII因子活性测定试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种VII因子活性测定试剂盒及其制备方法，试剂盒包括乏VII因子血浆、标准血浆和样本稀释液；乏VII因子血浆包括：氨基酸、防腐剂、冻干保护剂，其余为添加抗凝剂且利用单克隆抗体制成的乏VII因子血浆原料；标准血浆包括：氨基酸、防腐剂、冻干保护剂，其余为添加抗凝剂的标准血浆原料；样本稀释液包括：稳定剂、防腐剂、缓冲液，其余为水；制备方法包括：制备亲和免疫胶，制备乏VII因子血浆，制备标准血浆，制备样本稀释液。本发明专利技术的VII因子活性测定试剂盒使用便利，精密度高，线性范围广，线性范围内测试相关性良好，且生产成本低，制备方法简单。备方法简单。备方法简单。

【技术实现步骤摘要】
VII因子活性测定试剂盒及其制备方法


[0001]本专利技术涉及医学体外诊断
，尤其涉及一种VII因子活性测定试剂盒及其制备方法。

技术介绍

[0002]凝血因子VII(FVII)，又称稳定因子(stable factor)或血清凝血酶原转化加速因子(serum prothrombin conversion accelerator，SPCA)，其生理作用主要是和组织因子(TF)形成复合物(TF
‑
FVII)后激活FX而启动外源性凝血途径。血浆FVII水平检测不仅用于诊断FVII缺乏症、监测抗凝治疗。近来有研究显示，血浆FVII水平升高是导致心、脑血管血栓与出血性疾病的高危因素，其基因多态性也与上述疾病具有相关性，FVII水平还可用于评价肝病患者的病情进展及预后，其水平和基因多态性还与癌症的发生发展有一定的相关性。故血浆FVII水平测定具有重要的临床意义，但目前FVII：C检测所需的乏FVII血浆的价格十分昂贵。

技术实现思路

[0003]本专利技术要解决的技术问题在于，针对现有技术中，FVII：C检测所需的乏FVII血浆的价格十分昂贵，提供一种低成本、高质量的VII因子活性测定试剂盒及其制备方法。
[0004]本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：一种VII因子活性测定试剂盒，包括乏VII因子血浆、标准血浆和样本稀释液；乏VII因子血浆以其总体积为1L计，包括以下组分：20～50g氨基酸、0.5～1.5g防腐剂、15～40g冻干保护剂，其余为添加抗凝剂且利用单克隆抗体制成的乏VII因子血浆原料；标准血浆以其总体积为1L计，包括以下组分：20～50g氨基酸、0.5～1.5g防腐剂、15～40g冻干保护剂，其余为添加抗凝剂的标准血浆原料；抗凝剂以其总体积为1L计，包括30～40g枸橼酸钠和水，且抗凝剂与正常人血浆的体积比为1:(8～10)；样本稀释液以其总体积为1L计，包括以下组分：11～25g稳定剂、0.5～1.5g防腐剂、含量为1mol且pH值为6.0～8.0的缓冲液，其余为水。
[0005]优选地，防腐剂为DN、Proclin
‑
300、硫柳汞、庆大霉素或卡松。
[0006]优选地，冻干保护剂包括10～30g甘露醇和5～10g海藻糖。
[0007]优选地，氨基酸为甘氨酸、丙氨酸或精氨酸。
[0008]优选地，缓冲液为Tris缓冲液、HEPES缓冲液或PBS缓冲液。
[0009]优选地，稳定剂包括3～5g巴比妥钠、3～5g无机盐和5～15g白蛋白。
[0010]优选地，无机盐为氯化钠、氯化钙或硫酸铵。
[0011]优选地，白蛋白为牛血清白蛋白、马血清白蛋白或人血清白蛋白。
[0012]一种VII因子活性测定试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
[0013]S1、制备亲和免疫胶：将鼠抗人FVII单克隆抗体与溴化氰活化的琼脂糖凝胶偶联，得到亲和免疫胶，将其装入亲和层析柱，用平衡液流洗；
[0014]S2、乏VII因子血浆的制备：将抗凝剂与正常人血浆按体积比为1:(8～10)混合并
离心，取上清血浆装入S1步骤所得的亲和层析柱，收集流出液；以流出液的总体积为1L计，在流出液中添加20～50g氨基酸、0.5～1.5g防腐剂和15～40g冻干保护剂，分装并进行冻干，得到乏VII因子血浆冻干粉；
[0015]S3、标准血浆的制备：将抗凝剂与正常人血浆按体积比为1:(8～10)混合并离心，取上清血浆；以标准血浆的总体积为1L计，在上清血浆中添加20～50g氨基酸、0.5～1.5g防腐剂、15～40g冻干保护剂，分装并进行冻干，得到标准血浆冻干粉；
[0016]S4、样本稀释液的制备：以稀释液总体积为1L计，将11～25g稳定剂、0.5～1.5g防腐剂、含量为1mol且pH值为6.0～8.0的缓冲液和水混合，得到样本稀释液。
[0017]优选地，在步骤S1中，鼠抗人FVII单克隆抗体和溴化氰活化的琼脂糖凝胶的体积比为(0.8～1.2):1。
[0018]优选地，平衡液以其总体积为1L计，由8～10g氯化钠和含量为1mol且pH值为6.0～8.0的Tris缓冲液组成；平衡液与亲和免疫胶的体积比为(3～10):1。
[0019]优选地，在步骤S2和S3中，离心的温度为2～6℃，转速为2000～4000rpm，时间为10～20min。
[0020]优选地，在步骤S2中，正常人血浆冷上清从亲和层析柱流出的速度为20～40mL/h。
[0021]优选地，免疫亲和胶和正常人血浆冷上清的体积比为1:(4～5)。
[0022]本专利技术的有益效果：
[0023]本专利技术利用鼠抗人FVII单克隆抗体制备亲和免疫胶，通过免疫吸附法将正常人血浆去除VII因子，而血浆中的其他成分不受影响，可制得低成本而高质量的乏VII因子血浆；本专利技术还通过冻干工艺制得冻干血浆。本专利技术的VII因子活性测定试剂盒使用便利，用于临床诊断，且精密度高，线性范围广，线性范围内测试相关性良好。
[0024]本专利技术提供一种VII因子活性测定试剂盒的制备方法，该制备方法的生产成本低，制备简单，可用于规划化生产，实用性强。
附图说明
[0025]图1是本专利技术实施例1测试校准品的理论值和实测值的线性；
[0026]图2是本专利技术实施例2测试校准品的理论值和实测值的线性。
具体实施方式
[0027]为了对本专利技术的技术特征、目的和效果有更加清楚的理解，下面将结合实施例对本专利技术做进一步详述，本实施例仅用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术保护范围的限定。
[0028]一种VII因子活性测定试剂盒，包括乏VII因子血浆、标准血浆和样本稀释液；乏VII因子血浆以其总体积为1L计，包括以下组分：20～50g氨基酸、0.5～1.5g防腐剂、15～40g冻干保护剂，其余为添加抗凝剂且利用单克隆抗体制成的乏VII因子血浆原料；标准血浆以其总体积为1L计，包括以下组分：20～50g氨基酸、0.5～1.5g防腐剂、15～40g冻干保护剂，其余为添加抗凝剂的标准血浆原料；抗凝剂以其总体积为1L计，包括30～40g枸橼酸钠和水，且抗凝剂与正常人血浆的体积比为1:(8～10)；样本稀释液以其总体积为1L计，包括以下组分：11～25g稳定剂、0.5～1.5g防腐剂、含量为1mol且pH值为6.0～8.0的缓冲液，其余为水。
[0029]其中，抗凝剂为枸橼酸钠溶液，用于延缓血液凝固时间。
[0030]防腐剂为DN、Proclin
‑
300、硫柳汞、庆大霉素或卡松。
[0031]冻干保护剂包括10～30g甘露醇和5～10g海藻糖。
[0032]氨基酸为甘氨酸、丙氨酸或精氨酸，可以提高血浆稳定性。
[0033]缓冲液为Tris缓冲液、HEPES缓冲液或PBS缓冲液。
[0034]稳定剂包括3～5g巴比妥钠、3～5g无机盐和5～15g白蛋白。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种VII因子活性测定试剂盒，其特征在于，包括乏VII因子血浆、标准血浆和样本稀释液；所述乏VII因子血浆以其总体积为1L计，包括以下组分：20～50g氨基酸、0.5～1.5g防腐剂、15～40g冻干保护剂，其余为添加抗凝剂且利用单克隆抗体制成的乏VII因子血浆原料；所述标准血浆以其总体积为1L计，包括以下组分：20～50g氨基酸、0.5～1.5g防腐剂、15～40g冻干保护剂，其余为添加抗凝剂的标准血浆原料；所述抗凝剂以其总体积为1L计，包括30～40g枸橼酸钠和水，且抗凝剂与正常人血浆的体积比为1:(8～10)；所述样本稀释液以其总体积为1L计，包括以下组分：11～25g稳定剂、0.5～1.5g防腐剂、含量为1mol且pH值为6.0～8.0的缓冲液，其余为水。2.根据权利要求1所述的VII因子活性测定试剂盒，其特征在于，所述防腐剂为DN、Proclin
‑
300、硫柳汞、庆大霉素或卡松。3.根据权利要求1所述的VII因子活性测定试剂盒，其特征在于，所述冻干保护剂包括10～30g甘露醇和5～10g海藻糖。4.根据权利要求1所述的VII因子活性测定试剂盒，其特征在于，所述氨基酸为甘氨酸、丙氨酸或精氨酸。5.根据权利要求1所述的VII因子活性测定试剂盒，其特征在于，所述缓冲液为Tris缓冲液、HEPES缓冲液或PBS缓冲液。6.根据权利要求1所述的VII因子活性测定试剂盒，其特征在于，所述稳定剂包括3～5g巴比妥钠、3～5g无机盐和5～15g白蛋白。7.根据权利要求6所述的VII因子活性测定试剂盒，其特征在于，所述无机盐为氯化钠、氯化钙或硫酸铵。8.根据权利要求6所述的VII因子活性测定试剂盒，其特征在于，所述白蛋白为牛血清白蛋白、马血清白蛋白或人血清白蛋白。9.一种VII因子活性测定试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、制备亲和免疫胶：将鼠抗人FVII单克隆抗体与溴化氰活化的琼脂糖...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑琳，
申请(专利权)人：深圳市帝迈生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：