一种调控抗体糖型的方法及其应用技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种调控抗体糖型的方法及其应用。所述的调控抗体糖型的方法，包括以下步骤：在表达抗体的细胞培养过程中添加糖型调节剂；所述糖型调节剂包括：岩藻糖、氯化铵、N

【技术实现步骤摘要】
一种调控抗体糖型的方法及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体而言，涉及一种调控抗体糖型的方法及其应用。

技术介绍

[0002]生物药研发过程中，经常会遇到工艺变更，而保持工艺变更前后的质量可比是至关重要的。另外在生物类似药研发过程中，保持类似药与原研药质量的可比也是非常关键的，而抗体的糖型分布属于抗体药物的关键质量属性，因此保持变更前后抗体的糖型分布一致或者对于类似药而言保持与原研药一致是至关重要的。
[0003]现有的细胞培养工艺中，调节糖型比例的方法主要有：培养基筛选，培养工艺优化(pH，DO，温度等优化)等。在生物药开发过程中，现有的培养基和细胞培养工艺优化后，可能与之前工艺的糖型分布存在一定差异，另外在生物类似药研发过程中，可能与原研药糖型分布存在差异。
[0004]有鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种调控抗体糖型的方法，所述的调控抗体糖型的方法，适于抗体药物开发过程半乳糖基化的调控，尤其是G0F、G1F与G2F的比例。
[0006]为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：
[0007]一种调控抗体糖型的方法，包括以下步骤：
[0008]在表达抗体的细胞培养过程中添加糖型调节剂；
[0009]所述糖型调节剂包括：岩藻糖、氯化铵、N
‑
乙酰氨基葡萄糖以及2
‑
脱氧
‑2‑
氟
‑
D
‑
半乳糖中的至少一种。
[0010]所述的调控抗体糖型的方法，通过向表达抗体的细胞培养过程中使用的培养基添加糖型调节剂，达到显著提高G0F比例和降低G1F与G2F比例的效果。本专利技术使用的糖型调节剂易于采购，提供的方法简单易操作，还可以根据需求适当调整添加浓度，适于药物开发过程半乳糖基化的调控，尤其是G0F、G1F与G2F的比例。
[0011]优选地，所述表达抗体的细胞的培养过程包括：
[0012]所述表达抗体的细胞在生长培养基中培养至密度为4
×
106～8
×
106cells/mL时，使用生长培养基进行第一离心换液；所述细胞培养至密度大于8
×
106cells/mL时，使用含有所述糖型调节剂的生产培养基进行第二离心换液。
[0013]优选地，所述岩藻糖的添加浓度为16～24mM。
[0014]优选地，所述氯化铵的添加浓度为6～14mM。
[0015]优选地，所述乙酰氨基葡萄糖的添加浓度为6～14mM。
[0016]优选地，所述脱氧
‑2‑
氟
‑
D
‑
半乳糖的添加浓度为50～150μM。
[0017]优选地，所述表达抗体的细胞培养的时间为14～16天。
[0018]优选地，所述表达抗体的细胞的培养方式包括：批次培养、流加批次培养或灌流培
养中的任意一种。
[0019]优选地，所述表达抗体的细胞类型包括：CHO细胞。
[0020]一种抗体药物的制备方法，包括所述的调控抗体糖型的方法。
[0021]与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
[0022](1)本专利技术提供的调控抗体糖型的方法，通过向表达蛋白的细胞培养过程中使用的培养基添加糖型调节剂，达到显著提高G0F比例和降低G1F与G2F比例的效果。本专利技术使用的糖型调节剂易于采购，提供的方法简单易操作，还可以根据需求适当调整添加浓度，适于药物开发过程半乳糖基化的调控，尤其是G0F、G1F与G2F的比例。
具体实施方式
[0023]下面将结合具体实施方式对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，但是本领域技术人员将会理解，下列所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例，仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0024]一种调控抗体糖型的方法，包括以下步骤：
[0025]在表达抗体的细胞培养过程中添加糖型调节剂；
[0026]所述糖型调节剂包括：岩藻糖(Fucose)、氯化铵、N
‑
乙酰氨基葡萄糖(N
‑
acetyl
‑
D
‑
(+)
‑
glucosamine，GlcNAc)以及2
‑
脱氧
‑2‑
氟
‑
D
‑
半乳糖(2
‑
Deoxy
‑2‑
fluoro
‑
D
‑
galactose，2FG)中的至少一种。
[0027]所述调控抗体糖型的方法，通过向表达抗体的细胞培养的培养基添加糖型调节剂，达到显著提高G0F比例和降低G1F与G2F比例的效果。本专利技术使用的糖型调节剂易于采购，提供的方法简单易操作，还可以根据需求适当调整添加浓度，适于药物开发过程半乳糖基化的调控，尤其是G0F、G1F与G2F的比例。
[0028]优选地，所述表达抗体的细胞的培养过程包括：
[0029]所述表达抗体的细胞在生长培养基中培养至密度为4
×
106～8
×
106Cells/mL时，使用生长培养基进行第一离心换液；所述细胞培养至密度大于8
×
106Cells/mL时，使用含有所述糖型调节剂的生产培养基进行第二离心换液。
[0030]优选地，细胞培养至密度大于4
×
106cells/mL时，使用生长培养基进行离心换液，离心条件为1000rpm离心5min，换液体积为10mL。
[0031]优选地，细胞培养至密度大于8
×
106cells/mL时，使用生产培养基进行离心换液，离心条件为1000rpm离心5min，换液体积为10mL。
[0032]本专利技术对生长培养基和生产培养基的具体类型不做具体限定。所述生长培养基优选为Hyclone Actipro培养基，所述生产培养基优选为Hyclone Actipro培养基加5％Cell Boost 7a和0.5％Cell Boost 7b。
[0033]优选地，所述表达抗体的细胞的接种密度为0.8
×
106～1.2
×
106cells/mL。
[0034]优选地，细胞培养的摇床温度为35
±
0.5℃，摇床转速190
±
5rpm，轨道直径50mm，CO2浓度5
±
0.5％，倾斜角度为75度。
[0035]本专利技术中培养细胞使用50mL的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种调控抗体糖型的方法，其特征在于，包括以下步骤：在表达抗体的细胞培养过程中添加糖型调节剂；所述糖型调节剂包括：岩藻糖、氯化铵、N
‑
乙酰氨基葡萄糖以及2
‑
脱氧
‑2‑
氟
‑
D
‑
半乳糖中的至少一种。2.根据权利要求1所述的调控抗体糖型的方法，其特征在于，所述表达抗体的细胞的培养过程包括：所述表达抗体的细胞在生长培养基中培养至密度为4
×
106～8
×
106cells/mL时，使用生长培养基进行第一离心换液；所述细胞培养至密度大于8
×
106cells/mL时，使用含有所述糖型调节剂的生产培养基进行第二离心换液。3.根据权利要求1或2所述的调控抗体糖型的方法，其特征在于，所述岩藻糖的添加浓度为16～24mM。4.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：管叙龙，章柳泽，王克波，钱媛媛，杨晓明，张晞晨，
申请(专利权)人：杭州奕安济世生物药业有限公司，
类型：发明
国别省市：