一种利用紫外-可见分光光度法测定替奈普酶中尿素残留量的方法技术

本发明专利技术涉及一种利用紫外

【技术实现步骤摘要】
一种利用紫外
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可见分光光度法测定替奈普酶中尿素残留量的方法


[0001]本专利技术涉及生物医药
，尤其是涉及一种利用紫外
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可见分光光度法测定替奈普酶中尿素残留量的方法。

技术介绍

[0002]替奈普酶(TNK
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tPA)是迄今为止最安全有效且使用最方便的溶栓药，目前国内已上市的有第一代重组天然tPA类产品，商品名“爱通立”；第二代为采用大肠杆菌表达的tPA类产品，即瑞替普酶；而替奈普酶(TNK
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tPA)是世贸天阶制药(江苏)有限责任公司生产的第三代tPA类产品，是目前可以单次静脉推注的溶栓药品种，其具有一针救命，使用方便的特点，更加适合急救，使得溶栓治疗在院外进行成为可能，具有划时代的意义。而为了提高替奈普酶(TNK
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tPA)的质量标准，需要建立制剂中辅料尿素残留量的检验方法和控制要求。
[0003]对于原辅料中尿素含量的检测，2020版《中国药典》中收纳的方法为凯氏定氮法测定尿素的含量，但由于生物制品中尿素是作为辅料使用，含量较低，且生物制品中组分较为复杂，辅料之间存在一定影响，因此上述方法不适用于该产品中尿素残留量测定。
[0004]现有技术中公开了众多测定尿素含量的方法，如脲酶
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改良波氏法，尿素氮检测试剂盒微量法，但由于该方法均基于血清中尿素测定，存在重复性和准确度差，操作繁琐，检测设备要求高等缺点；因此，针对上述问题，为了提高替奈普酶(TNK
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tPA)制剂的质量，亟需提供一种特别适用于检测替奈普酶(TNK
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tPA)中尿素残留量的检测方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种利用紫外
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可见分光光度法测定替奈普酶中尿素残留量的方法。
[0006]为达到本专利技术之目的，采用如下技术方案：
[0007]一种利用紫外
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可见分光光度法测定替奈普酶中尿素残留量的方法，该方法的步骤如下：
[0008]步骤1：取替奈普酶供试样品放入试管中进行溶解，得到样品溶液；
[0009]步骤2：在样品溶液中加入1ml的0.2％二乙酰一肟溶液，混和均匀后再加0.2％安替比林的50％硫酸溶液2ml，混合均匀得到混合溶液；
[0010]步骤3：将试管置于沸水浴中水浴加热，加热完毕后取出置于流动的水中冷却；冷却至室温后，取适量待测溶液放入紫外
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可见分光光度计中进行检测，记录吸光度，根据外标法计算替奈普酶供试样品中尿素残留量。
[0011]优选的，所述步骤1的替奈普酶供试样品中尿素残留量≤100ug/瓶。
[0012]优选的，所述步骤3中，水浴加热时长为45～55min。
[0013]优选的，所述步骤3中，冷却时长为2～10min。
[0014]优选的，所述步骤3中，检测波长为460nm。
[0015]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
[0016]本专利技术所采用的方法，采用在酸性反应环境中加热，使尿素与二乙酰缩合，生成色素原二嗪，再以紫外
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可见分光光度法进行测定，从而实现了替奈普酶(TNK
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tPA)中尿素的残留量的准确测定；同时，该方法具有检测专属性高、重复性好、线性系数良好、精密度高等优点，为提高替奈普酶(TNK
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tPA)产品的质量制定了一个科学、严格的内控标准，对提高替奈普酶(TNK
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tPA)产品的质量具有指导性意义。
附图说明
[0017]为了更清楚地说明本专利技术实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0018]图1为尿素标准品的标准曲线图。
具体实施方式
[0019]为了使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例是本专利技术的部分实施例，而不是全部实施例。
[0020]本文中所述“替奈普酶(TNK
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tPA)”为世贸天阶制药(江苏)有限责任公司生产，规格为20mg/瓶。
[0021]本专利技术提供的一种利用紫外
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可见分光光度法测定替奈普酶中尿素残留量的方法，该方法的步骤如下：
[0022]步骤1：取替奈普酶供试样品放入试管中进行溶解，得到样品溶液；其中，待测的替奈普酶供试样品中尿素残留量应≤100ug/瓶。
[0023]步骤2：在样品溶液中加入1ml的0.2％二乙酰一肟溶液，混和均匀后再加0.2％安替比林的50％硫酸溶液2ml，混合均匀得到混合溶液；
[0024]步骤3：将试管置于沸水浴中水浴加热45～55min，加热完毕后取出置于流动的水中冷却2～10min；冷却至室温后，取适量待测溶液放入紫外
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可见分光光度计中进行检测，在460nm波长处测定吸光度，根据外标法计算替奈普酶供试样品中尿素残留量即可。
[0025]实施例1
[0026]步骤1：取替奈普酶供试样品1瓶按标示量复溶后用水稀释64倍，得到样品溶液；并取尿素标准品(约10mg)加入水溶解，得到标准品溶液；
[0027]步骤2：分别在样品溶液和标准品溶液中加入1ml的0.2％二乙酰一肟溶液，混和均匀后再加0.2％安替比林的50％硫酸溶液2ml，混合均匀得到混合溶液；
[0028]步骤3：将试管置于沸水浴中水浴加热50min，加热完毕后取出置于流动的水中冷却2min；冷却至室温后，取适量待测溶液放入紫外
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可见分光光度计中进行检测，在460nm波长处测定吸光度，根据外标法计算替奈普酶供试样品中尿素残留量即可。
[0029]实施例2
[0030]在实施例1的基础上，将水浴加热时间修改为55min，其余参数及操作如实施例1所示，测定结果未发生明显变化。
[0031]实施例3
[0032]在实施例1的基础上，将水浴加热时间修改为45min，其余参数及操作如实施例1所示，测定结果未发生明显变化。
[0033]实施例4
[0034]在实施例1的基础上，将加热后置于流动的水中冷却的时长修改为5分钟，其余参数及操作如实施例1所示，测定结果未发生明显变化。
[0035]实施例5
[0036]在实施例1的基础上，将加热后置于流动的水中冷却的时长修改为10分钟，其余参数及操作如实施例1所示，测定结果未发生明显变化。
[0037]1、线性关系检测
[0038]采用紫外
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可见分光光度法，按实施例1所述条件进行检测，取10ug/ml的标准品溶液0ml(0ug)、0.03ml(0.3ug)、0.06ml(0.6ug)、0.12ml(1.2ug)、0.24ml(2.4ug)、0.5ml(5ug)分别置于避光离心管中，加稀释液至10本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用紫外
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可见分光光度法测定替奈普酶中尿素残留量的方法，其特征在于：该方法的步骤如下：步骤1：取替奈普酶供试样品放入试管中进行溶解，得到样品溶液；步骤2：在样品溶液中加入1ml的0.2％二乙酰一肟溶液，混和均匀后再加0.2％安替比林的50％硫酸溶液2ml，混合均匀得到混合溶液；步骤3：将试管置于沸水浴中水浴加热，加热完毕后取出置于流动的水中冷却；冷却至室温后，取适量待测溶液放入紫外
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可见分光光度计中进行检测，记录吸光度，根据外标法计算替奈普酶供试样品中尿素残留量。2.根据权利要求1所述的一种利用紫外
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可见分光光度法测定...

【专利技术属性】
技术研发人员：张慧君，严志军，张文学，陈太标，花亚东，
申请(专利权)人：江苏丰华生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：