一种半叶马尾藻中国变种亲本同步促熟及幼苗保存方法技术

本发明专利技术涉及一种半叶马尾藻中国变种亲本同步促熟及幼苗保存方法，亲本同步促熟的方法包括：以栽培筏架将采集的半叶马尾藻中国变种的亲本定植于海面水下，进行藻体栽培促熟，采集同步成熟的雌雄藻株的生殖托共培养于装有过滤海水的水槽中，过滤收集受精卵。幼苗保存方法包括：将收集的受精卵用消毒海水冲洗后培养于带开口的容器中，用透气封口膜封口后置于光照培养箱中，保持温度18

【技术实现步骤摘要】
一种半叶马尾藻中国变种亲本同步促熟及幼苗保存方法


[0001]本专利技术属于大型海藻研究领域，具体涉及一种半叶马尾藻中国变种亲本同步促熟及幼苗保存方法。

技术介绍

[0002]半叶马尾藻中国变种(Sargassum hemiphyllum var.chinense)属于褐藻门、褐藻纲、墨角藻目、马尾藻科、马尾藻属，是我国东海和南海沿岸常见的大型海藻，自然分布于浙江南麂岛至海南文昌沿岸海域，生长在低潮线附近或潮下带的岩石上。半叶马尾藻中国变种的藻体为黄褐色，枝叶状体，通常高80～100cm，分为固着器、主枝、分枝、叶片和气囊，固着器呈假根状，雌雄异株，繁殖的方式分为有性生殖和以假根再生植株的营养繁殖两种。半叶马尾藻中国变种繁茂时期的高大藻体及巨大的生物量可为其它生物提供食物来源及栖息庇护场所，是海藻场生态系统的重要建群物种，具有重要的生态价值；同时，半叶马尾藻中国变种富含多种活性物质，如多糖、酚类、岩藻黄素等，是开发海洋食品、海洋药物的重要海藻资源。但由于受到全球气候变化和人类活动干扰的影响，我国南方海区半叶马尾藻中国变种的资源量已经日益减少，影响到海区海藻场的分布与维持，需要对半叶马尾藻中国变种开展资源保护和藻场修复工作。由于自然生境中，不同地区分布的半叶马尾藻中国变种因所在环境因素的差异而呈现发育及成熟不同步现象，且藻体在高温的夏季会凋零衰败。因此，半叶马尾藻中国变种的亲本同步促熟及幼苗保存的技术，对于开展人工育苗、杂交选育及苗种保存具有重要价值，是进行半叶马尾藻中国变种海藻场构建的关键技术。
[0003]半叶马尾藻中国变种在自然生境下存在发育及成熟不同步的问题，是开展人工育苗的技术难题。开展半叶马尾藻中国变种的人工育苗，需要提前进行亲本采集，在进行野生亲本采集时会因为藻体发育及成熟的不同步而无法顺利采集到成熟度较高的亲本，需要进行多次野外调查才能获得足量的发育成熟的亲本；或在进行不同地理群体的杂交育苗时，因为某一亲本已成熟而另一亲本未成熟而无法开展杂交育苗。对藻体成熟的生殖托进行雌雄鉴别、对受精卵进行收集培养及对幼苗保存是开展半叶马尾藻中国变种人工育苗、苗种度夏及苗种保存的必要技术。例如中国专利号为2015103241502的专利公开了一种半叶马尾藻幼苗的度夏培育方法，该专利中通过阴干刺激处理具有成熟生殖托的藻体使其上的受精卵脱落于水体中，通过在培养水体中添加磷营养盐达到强化半叶马尾藻幼苗、防治杂藻的目的。该专利选取具有成熟生殖托的藻体作为亲本，所收集的受精卵为在藻体被采集前已受精的挂托卵，幼苗培养需调配培养水体的营养盐浓度。该专利未涉及到雌雄藻体的同步促熟，对亲本选择的要求高，采集运输过程中易对亲本上挂托的受精卵造成损伤，苗种成活率降低，使得采苗效率较为低下。
[0004]目前马尾藻属海藻的常规育种方法中都是采用提供附着基质供藻体幼苗附着，附着基质为网帘、布帘、砖块、水泥板等材料，幼苗附着之后需在水槽、水箱或水池等大水体中进行保种培育，培育过程占用空间大、需大量换水或采用流水、易受到杂藻污染。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种半叶马尾藻中国变种亲本同步促熟及幼苗保存方法，通过在海区筏架栽培半叶马尾藻中国变种亲本，藻体定植于海面水下，藻体一直处于水中不受潮汐影响而干出，较自然生境下的生长发育速度快，并可促使雌雄藻体同步成熟，采集成熟藻体排放的受精卵培养于光照培养箱中进行幼苗保存，克服了野外来源的亲本成熟不同步、受精卵采集效率低、藻种保存困难的缺点。
[0006]一种半叶马尾藻中国变种亲本同步促熟及幼苗保存方法，包括：以栽培筏架将采集的半叶马尾藻中国变种的亲本定植于海面水下，进行藻体栽培促熟，采集同步成熟的雌雄藻株的生殖托共培养于装有过滤海水的水槽中，过滤收集受精卵。
[0007]进一步的，所述半叶马尾藻中国变种亲本同步促熟方法，包括以下步骤：
[0008](1)亲本的采集与清洗：于12月至次年2月的大潮期间落潮时到海区低潮带进行半叶马尾藻中国变种亲本的采集，尽快带回避免损伤及干燥；将采集的半叶马尾藻中国变种亲本在过滤海水中刷洗，并置于过滤海水中暂养；采集时从假根处将藻体整株采下，优选用毛刷于过滤海水中清除藻体的泥沙及杂质、附着的动物和杂藻；
[0009](2)亲本的选取：选取长度为15
‑
70cm、生长状态良好、假根健壮的半叶马尾藻中国变种亲本作为栽培促熟的亲本；
[0010](3)定植及同步促熟：将步骤(2)挑选的栽培促熟的亲本的假根夹于苗绳的绳股间，挂于海区筏架，苗绳处于水面下20
‑
40cm，经过70
‑
90天海区栽培，雌雄藻株可同步达到成熟长出生殖托；
[0011](4)雌雄藻株鉴别：通过外观形态观察、切片显微观察鉴别半叶马尾藻中国变种雌雄藻株；优选使用不锈钢刀片对成熟健康的生殖托进行横切制作横切面水封徒手切片，使用10
×
10倍光学显微镜进行观察，根据横切面的结构差别可方便地鉴别雌雄生殖托；
[0012](5)受精卵收集：采集栽培筏架上成熟的半叶马尾藻中国变种雌雄亲本按照雄株：雌株＝1：1
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5共培养于装有过滤海水的水槽中，于10
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12小时后过滤收集释放于水体中的受精卵。
[0013]本专利技术实验发现，半叶马尾藻中国变种的雌雄生殖托在发育成熟后在海水中可陆续排出卵细胞、精子，将雌雄亲本按照雄株：雌株＝1：1
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5的比例共培养于过滤海水中，雌生殖托可多次排出卵细胞挂于生殖托上，受精后发育为受精卵，受精卵或挂托或掉落水体中，成熟的雌雄亲本共培养于过滤海水中可多次进行受精卵收集。雌雄亲本按照雄株：雌株＝1：1
‑
5的比例共培养时受精效果最佳，雄株数量过少时会使雌株的部分卵细胞未能受精，雄株数量过多时会影响水质也不利于卵细胞受精。
[0014]进一步的，步骤(3)中栽培促熟的亲本的间距为30
‑
50cm，苗绳间距为1.5
‑
2.5m，苗绳的两端绑挂于海区栽培筏架上。优选直径为3cm的混纺海带苗绳作为苗绳，苗绳长度为4m。
[0015]进一步的，雌雄藻株鉴别方法为：通过外观形态观察及制作徒手切片于10
×
10倍光学显微镜下镜检判断雌雄，雄生殖托呈圆柱形、相对细长，徒手切片显微观察其横切面可见生殖托内部有密集的短棒状结构；雌生殖托呈圆柱形、相对粗短、部分末端有小分枝，有时可见卵细胞或受精卵挂托，徒手切片显微观察其横切面可见生殖托内部有卵圆形的卵细胞。
[0016]进一步的，受精卵的过滤收集方法为：将水槽中的海水先用80目筛绢滤去脱落的叶片、生殖托及杂质，再用260目筛绢过滤收集水体中的受精卵。若收集的受精卵数量不足，将带雌雄生殖托的亲本再次置于过滤海水中进行培养，待卵细胞从雌生殖托排出、挂托受精后，每日早晨搅拌水体、过滤收集受精卵。海水中会掉落藻体的碎屑和其他未除去的生物，用80目筛绢可以截留除去这些大尺寸的杂质，卵细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种半叶马尾藻中国变种亲本同步促熟方法，其特征在于，包括：以栽培筏架将采集的半叶马尾藻中国变种的亲本定植于海面水下，进行藻体栽培促熟，采集同步成熟的雌雄藻株的生殖托共培养于装有过滤海水的水槽中，过滤收集受精卵。2.根据权利要求1所述半叶马尾藻中国变种亲本同步促熟方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)亲本的采集与清洗：于12月至次年2月的大潮期间落潮时到海区低潮带进行半叶马尾藻中国变种亲本的采集，尽快带回避免损伤及干燥；将采集的半叶马尾藻中国变种亲本在过滤海水中刷洗，并置于过滤海水中暂养；(2)亲本的选取：选取长度为15
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70cm、生长状态良好、假根健壮的半叶马尾藻中国变种亲本作为栽培促熟的亲本；(3)定植及同步促熟：将步骤(2)挑选的栽培促熟的亲本的假根夹于苗绳的绳股间，挂于海区筏架，苗绳处于水面下20
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40cm，经过70
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90天海区栽培，雌雄藻株可同步达到成熟长出生殖托；(4)雌雄藻株鉴别：通过外观形态观察、切片显微观察鉴别半叶马尾藻中国变种雌雄藻株；(5)受精卵收集：采集栽培筏架上成熟的半叶马尾藻中国变种雌雄亲本按照雄株：雌株＝1：1
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5共培养于装有过滤海水的水槽中，10
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12小时后过滤收集释放于水体中的受精卵。3.根据权利要求2所述半叶马尾藻中国变种亲本同步促熟方法，其特征在于，步骤(3)中栽培促熟的亲本的间距为30
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50cm，苗绳间距为1.5
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2.5m，苗绳的两端绑挂于海区栽培筏架上。4.根据权利要求2所述半叶马尾藻中国变种亲本同步促熟方法，其特征在于，雌雄藻株鉴别方法为：通过外观形态观察及制作徒手切片于10
×
10倍光学显微镜下镜检判断雌雄，雄生殖托呈圆柱形、相对细长，徒手...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈伟洲，陈泽攀，杜虹，
申请(专利权)人：汕头大学，
类型：发明
国别省市：