一种猫冠状病毒核衣壳蛋白的鼠源单克隆抗体及其编码基因和应用制造技术

本发明专利技术公开了一种猫冠状病毒核衣壳蛋白的鼠源单克隆抗体及其编码基因和应用。本发明专利技术制备得到的单克隆抗体的特异性强，效价高，可以特异性的检测出国内FCoV毒株，可将其应用于国内FCoV毒株的检测，或用于制备检测国内FCoV毒株的产品。毒株的产品。毒株的产品。

【技术实现步骤摘要】
一种猫冠状病毒核衣壳蛋白的鼠源单克隆抗体及其编码基因和应用


[0001]本专利技术属于细胞工程
更具体地，涉及一种猫冠状病毒核衣壳蛋白的鼠源单克隆抗体及其编码基因和应用。

技术介绍

[0002]猫传染性腹膜炎是由猫冠状病毒(Feline coronavirus，FCoV)引起的猫慢性致死性疾病，以腹膜炎、大量腹水积聚为主要特征，不同年龄的猫均可感染，传染率非常高。
[0003]目前针对猫冠状病毒的检测方法包括血清抗体筛查和RT
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PCR等，上述方法需要对动物进行采血，而动物类采血存在采血困难、样本量少等问题。此外，应用RT
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PCR方法在渗出液中检测FCoV时，由于该方法诊断特异性有限，存在假阳性结果。中国专利CN 112415202A公开了一种检测猫冠状病毒的试纸条及其制备方法、试剂盒、检测方法。其所述检测试纸条的操作简单，可同时检测猫类动物的粪便、分泌物和腹水中的猫冠状病毒抗原。但FCoV在世界各地猫群中普遍存在，不同地区、饲养环境、品种的猫感染的FCoV毒株存在较大差异，给不同地区的FCoV的检测带来困难。因此，提供一种针对国内FCoV毒株进行检测的FCoV检测方法具有重要意义。

技术实现思路

[0004]本专利技术要解决的技术问题是克服现有上述技术的缺陷和不足，提供一种猫冠状病毒核衣壳蛋白的鼠源单克隆抗体及其编码基因和应用。
[0005]本专利技术的第一个目的是提供一种猫冠状病毒核衣壳蛋白的鼠源单克隆抗体。
[0006]本专利技术的第二个目的是提供所述单克隆抗体在制备猫冠状病毒检测产品的应用。
[0007]本专利技术的第三个目的是提供SEQ ID NO.5所示猫冠状病毒BS
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8毒株核衣壳蛋白在制备猫冠状病毒核衣壳蛋白的鼠源单克隆抗体中的应用。
[0008]本专利技术的第四个目的是提供SEQ ID NO.5所示猫冠状病毒BS
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8毒株核衣壳蛋白在制备猫冠状病毒检测产品中的应用。
[0009]本专利技术的第五个目的是提供编码所述猫冠状病毒核衣壳蛋白的鼠源单克隆抗体的基因。
[0010]本专利技术的第六个目的是提供包含上述基因的重组表达载体。
[0011]本专利技术的第七个目的是提供包含上述重组表达载体的宿主细胞。
[0012]本专利技术的第八个目的是提供一种检测猫冠状病毒的产品。
[0013]本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：
[0014]本专利技术首先提供了一种猫冠状病毒核衣壳蛋白的鼠源单克隆抗体，其是以猫冠状病毒BS
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8毒株的核衣壳重组蛋白为抗原制备得到，所述单克隆抗体CDR区的重链氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其轻链氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。实验表明，所述猫冠状病毒核衣壳蛋白的鼠源单克隆抗体的特异性强，效价高，使用该抗体可特异性的检测出国内
FCoV毒株。因此，本专利技术申请保护所述单克隆抗体在制备猫冠状病毒检测产品中的应用。
[0015]本专利技术还申请保护SEQ ID NO.5所示猫冠状病毒BS
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8毒株核衣壳蛋白在制备猫冠状病毒核衣壳蛋白的鼠源单克隆抗体中的应用。
[0016]本专利技术还申请保护SEQ ID NO.5所示猫冠状病毒BS
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8毒株核衣壳蛋白在制备猫冠状病毒检测产品中的应用。
[0017]本专利技术同时提供了一种编码所述猫冠状病毒核衣壳蛋白的鼠源单克隆抗体的基因，编码重链氨基酸的基因序列如SEQ ID NO.2所示，编码轻链氨基酸的序列如SEQ ID NO.4所示。
[0018]本专利技术还提供了包含上述基因的重组表达载体。
[0019]本专利技术还提供了包含上述重组表达载体的宿主细胞。
[0020]本专利技术还提供一种检测猫冠状病毒的产品，其本专利技术所述单克隆抗体。
[0021]本专利技术还提供了一种检测猫冠状病毒的腹水间接免疫荧光方法，其以本专利技术所述单克隆抗体为一抗，以羊抗鼠IgG为二抗。
[0022]优选地，所述羊抗鼠IgG为Abcam公司的Goat Anti
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Mouse IgG H&L(Alexa488)。
[0023]优选地，所述腹水间接免疫荧光方法的步骤为：
[0024]S1.取待测新鲜腹水滴于载玻片上，用盖玻片将腹水推平，再用免疫组化笔沿边缘画一圈，放入37℃烘箱中烘干；
[0025]S2.将盖玻片放到水平摇床上以最低转速用PBS洗3遍，每次3min。清洗结束后，将PBS弃掉，用4％的多聚甲醛固定10min；
[0026]S3.固定结束后，在水平摇床上以最低转速用PBS洗3遍，每次3min；
[0027]S4.清洗结束后，将PBS弃掉，用免疫荧光封闭液封闭孵育15min，弃掉封闭液；
[0028]S5.4℃孵育一抗12～14h，完毕后，回收一抗，用PBST清洗3遍，每次3min；
[0029]S6.常温避光孵育二抗1h，孵育完后，弃掉二抗，用PBST溶液清洗三次，每次3min。
[0030]本专利技术还提供了一种检测猫冠状病毒的冷冻切片间接免疫荧光方法，其以本专利技术所述单克隆抗体为一抗，以羊抗鼠IgG为二抗。
[0031]优选地，所述羊抗鼠IgG为Abcam公司的Goat Anti
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Mouse IgG H&L(Alexa488)。
[0032]优选地，所述冷冻切片间接免疫荧光方法的步骤为：
[0033]S1.用剖检病猫的小肠肠系膜做冷冻切片，放到水平摇床上最低转速用PBS洗3遍，每次3min；
[0034]S2.清洗结束后，将PBS弃掉，用4％多聚甲醛固定10min；
[0035]S3.固定结束后，在水平摇床上最低转速用PBS洗3遍，每次3min；
[0036]S4.清洗结束后，将PBS弃掉后，用免疫荧光封闭液封闭孵育15min，弃掉封闭液；
[0037]S5.4℃孵育一抗12～14h，完毕后，回收一抗，用PBST清洗3遍，每次3min；
[0038]S6.常温避光孵育二抗1h，孵育完后，弃掉二抗，用PBST溶液清洗三次，每次3min。
[0039]本专利技术具有以下有益效果：
[0040]本专利技术制备得到的单克隆抗体的特异性强，效价高，利用该抗体可以特异性的检测出国内FCoV毒株，因此，可将其应用于国内FCoV毒株的检测，或用于制备检测国内FCoV毒
株的产品。
附图说明
[0041]图1为81株阳性样品与国内猫冠状病毒毒株的氨基酸同源性分析。
[0042]图2为BS
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8毒株的核衣壳重组蛋白的电泳图，其中孔道1为未纯化的重组蛋白，孔道2为纯化的BS8
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N
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MBP重组蛋白，孔道3为未纯化蛋白的重组蛋白经Xa Factor切割后，孔道4为纯化的BS8
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种猫冠状病毒核衣壳蛋白的鼠源单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体CDR区的重链氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其轻链氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。2.权利要求1所述单克隆抗体在制备猫冠状病毒检测产品的应用。3.SEQ ID NO.5所示猫冠状病毒BS
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8毒株核衣壳蛋白在制备猫冠状病毒核衣壳蛋白的鼠源单克隆抗体中的应用。4.SEQ ID NO.5所示猫冠状病毒BS
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8毒株核衣壳蛋白在制备猫冠状病毒检测产品中的应用。5.一种编码权利要求1所述猫冠状病毒核衣壳蛋白的...

【专利技术属性】
技术研发人员：李守军，姚淙文，叶绍棠，冯慧君，徐亮，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：