一种黑牛肝菌诱变菌株的快速筛选方法技术

本发明专利技术提供一种黑牛肝菌诱变菌株的快速筛选方法，该方法包括以下步骤：(1)将由黑牛肝菌诱变菌株的菌丝接种至初筛培养基，所述初筛培养基为以木屑为唯一碳源的琼脂培养基；(2)将经所述初筛培养基培养后的菌丝转接于复筛培养基，所述复筛培养基为以木聚糖为唯一碳源的琼脂培养基；(3)筛选所需菌株。采用本方法能够快速地从黑牛肝菌诱变菌株中筛选到对栽培基质中木质纤维素利用率提升的菌株，提高诱变菌株筛选的效率。菌株筛选的效率。

【技术实现步骤摘要】
一种黑牛肝菌诱变菌株的快速筛选方法


[0001]本专利技术涉及食用菌菌种育种领域，具体而言，尤其涉及一种黑牛肝菌诱变菌株的快速筛选方法。

技术介绍

[0002]黑牛肝菌(Phlebopus portentosus)学名暗褐脉柄牛肝菌，又名暗褐网柄牛肝菌，隶属于牛肝菌目(Boletales)，小牛肝菌科(Boletinellaceae)，脉柄牛肝菌属(Phlebopus)。黑牛肝菌的人工驯化，从初期的实验室探索阶段，到工厂化栽培的发展阶段，取得了长足的进步。
[0003]目前由于黑牛肝菌人工驯化历史较短，真正能在生产中使用的菌株较少，且亲缘关系较近，这直接导致了在黑牛肝菌的菌种选育工作中所能使用的优良亲本较少，阻碍了优良菌株选育工作的开展。在过去的一系列研究中，人们已经发现黑牛肝菌具有利用木质纤维素中的木聚糖的能力，只是此能力较弱，则可以引入诱变育种方法，通过诱变手段提高菌株利用此能力，故而如何快速地从黑牛肝菌诱变菌株中筛选到对栽培基质中木质纤维素利用率提升的菌株成为亟需解决的难题。

技术实现思路

[0004]本专利技术鉴于解决上述技术问题，提供了一种黑牛肝菌诱变菌株的快速筛选方法，能够快速地从黑牛肝菌诱变菌株中筛选到对栽培基质中木质纤维素利用率提升的菌株，提高诱变菌株筛选的效率。
[0005]为达到上述目的，本专利技术主要提供如下技术方案：
[0006]一种黑牛肝菌诱变菌株的快速筛选方法，包括以下步骤：
[0007](1)将由黑牛肝菌诱变菌株的菌丝接种至初筛培养基，所述初筛培养基为以木屑为唯一碳源的琼脂培养基；
[0008](2)将经所述初筛培养基培养后的菌丝转接于复筛培养基，所述复筛培养基为以木聚糖为唯一碳源的琼脂培养基；
[0009](3)筛选所需菌株。
[0010]具体地，步骤(1)中，包括：
[0011](a)制备以木屑为唯一碳源的琼脂培养基，作为初筛培养基；
[0012](b)将上述培养基切块，并将每一小块翻转后置于无菌培养皿中，使其含木屑较多的一面朝上；
[0013](c)将由黑牛肝菌诱变菌株的菌丝块分别接种于步骤(b)中的培养基小块表面，28
‑
30℃下避光培养。
[0014]具体地，步骤(2)中，包括：
[0015](d)制备以木聚糖为唯一碳源的琼脂培养基，作为复筛培养基；
[0016](e)经步骤(1)培养后，由初筛培养基上筛选出长势好、菌丝壮的菌落，挑取菌丝块
转接于所述复筛培养基，28
‑
30℃下避光培养。
[0017]具体地，步骤(2)中，还包括：测定由所述复筛培养基培养的菌落生长速度。
[0018]具体地，步骤(3)中，包括：
[0019](f)经步骤(2)培养后，筛选出长势好、菌丝壮、生长速度佳的菌株，保存备用。
[0020]具体地，步骤(b)中，初筛培养基切块大小为(5
‑
10)mm
×
(5
‑
10)mm；
[0021]和/或，
[0022]步骤(c)中，挑取的菌丝块大小为(2
‑
3)mm
×
(2
‑
3)mm。
[0023]具体地，步骤(e)中，挑取的菌丝块远离原接种点，大小为(2
‑
3)mm
×
(2
‑
3)mm。
[0024]具体地，步骤(1)中，所述初筛培养基组分包括：木屑粉末20
‑
30g，酵母膏1
‑
2g，酒石酸铵1
‑
2g，MgSO
4 1
‑
2g，KH2PO
4 1
‑
2g，琼脂粉15
‑
20g，加水定容至1L。
[0025]具体地，步骤(1)中，所述初筛培养基经115
‑
121℃灭菌20
‑
30min后，未凝固前倒入无菌培养皿，所述初筛培养基厚度为5mm
‑
10mm。
[0026]具体地，步骤(2)中，所述复筛培养基组分包括：木聚糖10
‑
30g，酵母膏1
‑
2g，酒石酸铵1
‑
2g，MgSO
4 1
‑
2g，KH2PO
4 1
‑
2g，琼脂粉15
‑
20g，加水定容至1L。
[0027]具体地，步骤(1)中，所述黑牛肝菌诱变菌株是通过黑牛肝菌原生质体经诱变处理后，于再生培养基上进行再生培养得到的。
[0028]本专利技术实施例提供一种黑牛肝菌诱变菌株的快速筛选方法，黑牛肝菌诱变菌株的菌丝依次通过以木屑为唯一碳源的琼脂培养基、以木聚糖为唯一碳源的琼脂培养基进行培养，然后可以筛选出所需要的长势好、菌丝壮、生长速度佳的菌株。该黑牛肝菌诱变菌株的快速筛选方法能够实现快速地从黑牛肝菌诱变菌株中筛选到对栽培基质中木质纤维素利用率提升的菌株，提高诱变菌株筛选的效率，节省人力物力，利用诱变育种方法，有效解决黑牛肝菌在生产中出现的木质纤维素利用率低、生物转化率低、抗污染能力弱、菌株退化等一系列问题。
具体实施方式
[0029]下面结合具体实施例来进一步描述本专利技术，本专利技术的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本专利技术的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本专利技术的精神和范围下可以对本专利技术技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本专利技术的保护范围内。
[0030]所用试剂或仪器等，如无特殊说明，均为可以通过市购获得的常规产品。
[0031]实施例1
[0032]本专利技术实施例提供一种黑牛肝菌诱变菌株的快速筛选方法，包括以下步骤：
[0033](1)将由黑牛肝菌诱变菌株的菌丝接种至初筛培养基，所述初筛培养基为以木屑为唯一碳源的琼脂培养基；
[0034](2)将经所述初筛培养基培养后的菌丝转接于复筛培养基，所述复筛培养基为以木聚糖为唯一碳源的琼脂培养基；
[0035](3)筛选所需菌株。
[0036]其中，黑牛肝菌诱变菌株可以采用不同的诱变处理，如紫外诱变处理或者化学诱变处理等。
[0037]本专利技术实施例中，黑牛肝菌诱变菌株的菌丝依次通过以木屑为唯一碳源的琼脂培养基、以木聚糖为唯一碳源的琼脂培养基进行培养，然后可以筛选出所需要的长势好、菌丝壮、生长速度佳的菌株。该黑牛肝菌诱变菌株的快速筛选方法能够实现快速地从黑牛肝菌诱变菌株中筛选到对栽培基质中木质纤维素利用率提升的菌株，提高诱变菌株筛选的效率，节省人力物力，利用诱变育种方法，有效解决黑牛肝菌在生产中出现的木质纤维素利用率低、生物转化率低、抗污染能力弱、菌株退化等一系列问题。
[0038]实施例2
[0039]本实施例示出了实施本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种黑牛肝菌诱变菌株的快速筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将由黑牛肝菌诱变菌株的菌丝接种至初筛培养基，所述初筛培养基为以木屑为唯一碳源的琼脂培养基；(2)将经所述初筛培养基培养后的菌丝转接于复筛培养基，所述复筛培养基为以木聚糖为唯一碳源的琼脂培养基；(3)筛选所需菌株。2.根据权利要求1所述的黑牛肝菌诱变菌株的快速筛选方法，其特征在于，步骤(1)中，包括：(a)制备以木屑为唯一碳源的琼脂培养基，作为初筛培养基；(b)将上述培养基切块，并将每一小块翻转后置于无菌培养皿中，使其含木屑较多的一面朝上；(c)将由黑牛肝菌诱变菌株的菌丝块分别接种于步骤(b)中的培养基小块表面，28
‑
30℃下避光培养。3.根据权利要求1所述的黑牛肝菌诱变菌株的快速筛选方法，其特征在于，步骤(2)中，包括：(d)制备以木聚糖为唯一碳源的琼脂培养基，作为复筛培养基；(e)经步骤(1)培养后，由初筛培养基上筛选出长势好、菌丝壮的菌落，挑取菌丝块转接于所述复筛培养基，28
‑
30℃下避光培养。4.根据权利要求1所述的黑牛肝菌诱变菌株的快速筛选方法，其特征在于，步骤(2)中，还包括：测定由所述复筛培养基培养的菌落生长速度。5.根据权利要求1所述的黑牛肝菌诱变菌株的快速筛选方法，其特征在于，步骤(3)中，包括：(f)经步骤(2)培养后，筛选出长势好、菌丝壮、生长速度佳的菌株，保存备用。6.根据权利要求2所述的黑牛肝菌诱变菌株的快速筛选方法，其特征在于，步骤(b)中，初筛培养基切块大小为(5
‑
10)mm
×
(5
‑
10)mm；和/或，步骤(c)中，挑取的菌丝块大小为(2
‑
3)mm
×
(2
‑
3)mm。7.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹旸，刘霄，纪开萍，纪光燕，罗顺珍，刀明晶，纪光玉，
申请(专利权)人：景洪宏臻农业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：