GDNF蛋白作为早期胃癌血清生物标志物的应用制造技术

本申请提供了一种GDNF蛋白作为早期胃癌血清生物标志物的应用，用于非诊断目的的早期胃癌判断，提高了早期胃癌血清筛查的灵敏度和特异度。一种早期胃癌血清生物标志物试剂盒和检测方法，用于检测早期胃癌血清生物标志物。用于检测早期胃癌血清生物标志物。用于检测早期胃癌血清生物标志物。

【技术实现步骤摘要】
GDNF蛋白作为早期胃癌血清生物标志物的应用


[0001]本申请涉及一种GDNF蛋白作为早期胃癌血清生物标志物的应用。

技术介绍

[0002]胃癌是起源于胃粘膜上皮细胞的消化道恶性肿瘤，是世界上最常见的、发病率和致死率最高的癌症之一。据最新美国癌症学会发布的《Cancer statistics》显示，2019年美国预计新增胃癌患者27,510例，死亡11,140例。数据显示，接近2/3的胃癌发生在发展中国家，而其中有42％发生在中国。在我国，目前胃癌发病率居恶性肿瘤第二位，同时还具有较高的致死率。统计显示，2015年我国胃癌新发病例约为67.9万，约占全球病例的一半，死亡人数约为49.8万。胃癌病灶的高侵袭性以及强转移能力是引起患者死亡的主要原因之一。如今，绝大多数胃癌在确诊时已为晚期，中胃癌预后较差，五年生存率不高；相较之下，早期胃癌虽然预后良好，癌症治愈率远高于晚期，但因其无明显症状，故检出率较低。由此可见，早期诊断、早期治疗对于提高胃癌治疗疗效、降低病死率具有重要意义。
[0003] 目前，最常见的应用于检测早期胃癌的血清肿瘤标志物包括癌胚抗原(CEA)，糖类抗原 (CA)CA19
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9、CA72
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4、CA125、CA24
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2、CA50，胃蛋白酶原(PG)和甲胎蛋白(AFP)等，然而，这些肿瘤标志物的敏感性和特异性较差。就目前为止，尚未发现一种敏感性和特异性较高的胃癌标志物。因此对于新的胃癌肿瘤标志物的探索意义重大。

技术实现思路

>[0004]本申请的目的在于提供一种GDNF蛋白作为早期胃癌血清生物标志物的应用。
[0005]一种GDNF蛋白作为早期胃癌血清生物标志物用于非诊断目的的早期胃癌判断。
[0006]一种早期胃癌血清生物标志物，包括GDNF蛋白。
[0007]上述GDNF蛋白为人的GDNF蛋白。
[0008]一种早期胃癌血清生物标志物试剂盒，用于检测上述的早期胃癌血清生物标志物，包括GDNF蛋白的免疫球蛋白G抗体。
[0009]上述早期胃癌血清生物标志物试剂盒，还包括定量芯片、样品稀释液、20
×
洗液I、 20
×
洗液II、标准品混合物、Cy3
‑
链霉亲和素、玻片清洗和干燥器、密封条。
[0010]一种如权利上述的早期胃癌血清生物标志物的检测方法，包括以下步骤：
[0011]c)获取血清样本；
[0012]d)检测血清样本
[0013]b1)定量芯片干燥
[0014]将定量芯片从盒子中取出来，在室温放置20
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30min后，将包装袋打开，揭开密封条，然后将定量芯片放在干燥器或者室温干燥1
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2小时；
[0015]b2)标准品的配置
[0016]b21)添加500μL的样品稀释液到标准品混合物的小管中，重新溶解标准品混合物。打开小管前，先快速的离心，轻轻的上下吹打溶解粉末，标记这个小管为Std 1；
[0017]b22)分别标记6个干净的离心管为Std2、Std3、Std4、Std5、Std6、Std7，添加200μL 的样品稀释液到每个离心管中；
[0018]b23)从标记为Std 1的离心管中抽取100μL样品稀释液加入到标记为Std2的离心管中轻轻混合，然后从标记为Std 2的离心管中抽取100μL样品稀释液加入到标记为Std 3 的离心管中，依次类推，如此梯度稀释至标记为Std7的离心管中，得到标准液；
[0019]b24)从标记为Std7的离心管中抽取100μL的标准液到另一个新的离心管中，标记为CNTRL，作为阴性对照；
[0020]b3)定量芯片的操作流程
[0021]b31)在定量芯片的每个孔中加入100μL的样品稀释液，室温摇床上孵育1h，封闭定量芯片；
[0022]b32)、抽去每个孔中的样品稀释液，从标记为CNTRL的离心管中取80μL的标准液与血清样本一起添加到孔中，4℃过夜孵育；
[0023]b33)清洗定量芯片，首先用1
×
洗液I进行清洗，每孔250μL的1
×
洗液I，清洗10 次，每次震荡10s，震荡强度选择高，用去离子水稀释20
×
洗液I,然后换用1
×
洗液II对通道进行清洗，每孔250μL的1
×
洗液II，清洗6次，每次震荡10s，震荡强度选择高，用去离子水稀释20
×
洗液II；
[0024]b34)GDNF蛋白的免疫球蛋白G抗体的孵育,离心装有GDNF蛋白的免疫球蛋白G抗体的小管，然后加入1.4ml的样品稀释液，混合均匀后再次快速离心，然后添加80μL的GDNF 蛋白的免疫球蛋白G抗体到每个孔中，RT摇床上孵育2小时；
[0025]b35)清洗，同步骤b33)；
[0026]b36)Cy3
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链霉亲和素的孵育,离心装有Cy3
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链霉亲和素的小管，然后加入1.4ml的样品稀释液，混合均匀后再次快速离心，添加80μL的Cy3
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链霉亲和素到每个孔中，用铝箔纸包住定量芯片避光孵育，RT摇床上孵育1个小时；
[0027]b37)清洗，同步骤b33)；
[0028]b38)荧光检测,采用激光扫描仪扫描信号，采用Cy3或者绿色通道。
[0029]b39)采用QAH
‑
CUST的数据分析软件来进行数据分析，获得每例血清样本中GDNF蛋白的含量。
[0030]本申请的可选方案既可以作为独立的方案，也可以相互组合。本申请的任意一个方案中的结构，既可以作为独立的技术方案，也可以与其他技术方案相互组合。
[0031]本申请的有益之处在于：提供了一种GDNF蛋白作为早期胃癌血清生物标志物的应用，用于非诊断目的的早期胃癌判断中，提高了早期胃癌血清筛查的灵敏度和特异度。
附图说明
[0032]图1为本申请实施例1中各类样本中GDNF蛋白含量及差异性；
[0033]图2为本申请实施例1中健康
‑
早期胃癌患者GDNF蛋白的ROC曲线。
具体实施方式
[0034]本申请所用的术语“ROC曲线”或“ROC图”是指展示二元分类器系统的性能随着其辨别阈值的变化的图形曲线。通过在各种阈值设置下绘制真阳性率对假阳性率的曲线来创
建该曲线。真阳性率也被称为灵敏度。假阳性率计算为1
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特异性。因此，ROC曲线是一系列截断值范围内的真阳性率对假阳性率(灵敏度vs(1
‑
特异性))的图形显示以及选择最佳截断值进行临床使用的方式。将准确度表示为ROC曲线下面积(AUC)，为比较测试性能提供了有用的参数。接近1的AUC表示该测试高度灵敏并且具有高度特异性，而AUC接近0.5则表明该测试既不灵敏也不本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种GDNF蛋白，其特征在于：作为早期胃癌血清生物标志物用于非诊断目的的早期胃癌判断。2.一种早期胃癌血清生物标志物，其特征在于：包括GDNF蛋白。3.根据权利要求2所述的早期胃癌血清生物标志物，其特征在于：所述GDNF蛋白为人的GDNF蛋白。4.一种早期胃癌血清生物标志物试剂盒，用于检测如权利要求1至3任意一项所述的早期胃癌血清生物标志物，其特征在于：包括GDNF蛋白的免疫球蛋白G抗体。5.根据权利要求4所述早期胃癌血清生物标志物试剂盒，其特征在于：包括定量芯片、样品稀释液、20
×
洗液I、20
×
洗液II、标准品混合物、GDNF蛋白的免疫球蛋白G抗体、Cy3
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链霉亲和素、玻片清洗和干燥器、密封条。6.一种如权利要求1至3任意一项所述的早期胃癌血清生物标志物的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：a)获取血清样本；b)检测血清样本b1)定量芯片干燥b2)标准品的配置b3)定量芯片的操作流程b31)在定量芯片的每个孔中加入100μL的样品稀释液，室温摇床上孵育1h，封闭定量芯片；b32)、抽去每个孔中的样品稀释液，从步骤2配置的标准品中取80μL的标准液与血清样本一起添加到孔中，4℃过夜孵育；b33)清洗定量芯片，首先用1
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洗液I进行清洗，每孔250μL的1
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洗液I，清洗10次，每次震荡10s，震荡强度选择高，用去离子水稀释20
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洗液I,然后换用1
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洗液II对通道进行清洗，每孔250μL的1
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洗液II，清洗6次，每次震荡10s，震荡强度选择高，用去离子水稀释20
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洗液II；b34)GDNF蛋白的免疫球蛋白G抗体的孵育,离心装有GDNF蛋白的免疫球蛋白G抗体的小管，然后加入1.4ml的样品稀释液，混合均匀后再次快速...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙维建，沈贤，林李淼，孙璐琛，吴昊，季兴迈，叶长永，
申请(专利权)人：温州医科大学附属第二医院温州医科大学附属育英儿童医院，
类型：发明
国别省市：