本发明专利技术提供一种免疫原性组合物，所述组合物由弓形虫灭活速殖子和佐剂组成。本发明专利技术还提供用于弓形虫感染预防的免疫疫苗，所述疫苗的有效成分为所述的免疫原性组合物。本发明专利技术的免疫疫苗能够有效地延长弓形虫RH速殖子和GT1速殖子急性感染BALB/c鼠的存活时间，取得了良好的免疫效果。的免疫效果。的免疫效果。
【技术实现步骤摘要】
一种用于预防弓形虫感染的全虫混合死疫苗
[0001]本专利技术涉及一种用于预防弓形虫感染的全虫混合死疫苗。
技术介绍
[0002]刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)严格有核细胞内寄生，是一种作用重要的机会致病性原虫，能够感染包括人和鸟类在内的所有温血动物。弓形虫分布广泛，感染途径多样。全球约三分之一人群被弓形虫感染，部分地区感染率更高，有速殖子、包囊和卵囊等多种感染形态，接触黏膜、受损皮肤或者误食被弓形虫污染的食物均可引起感染。更为重要的是，弓形虫危害严重，是人和动物弓形虫性脑炎、脑膜炎和弓形虫眼病的重要病原，除对免疫功能低下病人如器官移植病人、AIDS和恶性肿瘤患者以及孕妇人群影响明显外，还能造成患病家畜流产、早产、死胎、畸胎等症状，给畜牧业生产带来巨大经济损失。目前仍无治疗弓形虫病的理想药物，因此研制安全有效的抗弓形虫感染疫苗在弓形虫病的预防和治疗中尤为重要。
[0003]弓形虫分布广泛、危害严重且基因型丰富，仅ToxoDB数据库收录的弓形虫基因型就有近300种，其中VEG毒株毒力较弱，属Genotype III型，被感染宿主的临床症状一般不明显；ME49和PRU同属Genotype II型，都可在被感染宿主的脑内形成组织包囊，毒力介于III型和I型之间；RH和GT1属Genotype I型，毒力最强，也是弓形虫感染造成被感染宿主死亡的主要毒株。
技术实现思路
[0004]本专利技术提供了一种用于预防弓形虫感染的全虫混合死疫苗，具有良好的免疫效果。
[0005]本专利技术提供以下技术方案：
[0006]一种免疫原性组合物，所述组合物包括弓形虫灭活速殖子和佐剂。
[0007]作为优选方案，所述佐剂为铝佐剂。
[0008]作为另一优选方案，所述组合物中的弓形虫灭活速殖子为弓形虫RH速殖子和GT1速殖子。
[0009]作为又一优选方案，所述弓形虫RH速殖子和GT1速殖子的数目比值为：1:1。
[0010]作为又一优选方案，所述弓形虫灭活速殖子与佐剂的体积比值为：1:1。
[0011]一种用于预防弓形虫感染的全虫混合死疫苗，所述疫苗的有效成分为上述的免疫原性组合物。
[0012]一种用于预防弓形虫感染的全虫混合死疫苗的制备方法，步骤如下：
[0013](1)制备弓形虫灭活速殖子；
[0014](2)将弓形虫灭活速殖子与佐剂混合制剂，得到疫苗。
[0015]上述免疫原性组合物或免疫疫苗可应用在制备预防弓形虫感染的药物。
[0016]本专利技术将弓形虫不同毒株的灭活速殖子与铝佐剂联合应用，进行抗弓形虫急性感
染的免疫效果评估。结果显示，该全虫混合死疫苗的免疫新方案能够有效地延长弓形虫RH速殖子和GT1速殖子急性感染BALB/c鼠的存活时间，取得了较好的免疫保护性效果。
附图说明
[0017]附图用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本专利技术的实施例一起用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的限制。在附图中：
[0018]图1为BALB/c鼠血清总抗体水平变化图；
[0019]图2为BALB/c鼠血清抗RH抗体水平变化图；
[0020]图3为BALB/c鼠血清抗GT1抗体水平变化图；
[0021]图4为BALB/c鼠脾脏CD3e
+
CD4
+
T和CD3e
+
CD8a
+
T细胞流式分析图；
[0022]图5为弓形虫RH速殖子感染BALB/c鼠存活时间线形图；
[0023]图6为弓形虫GT1速殖子感染BALB/c鼠存活时间线形图。
具体实施方式
[0024]以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为市售。
[0025]实施例1
[0026](一)弓形虫速殖子的培养、收集、纯化与灭活
[0027]1、弓形虫速殖子的培养：从液氮中取出Vero细胞系，37℃水浴迅速解冻后，无菌接入T25细胞培养瓶，于37℃5％CO2条件下进行培养和传代。待传代细胞铺满瓶底时，37℃水浴法复苏弓形虫RH和GT1虫株，并分别感染Vero细胞。连续传代三次后，对弓形虫RH和GT1所得速殖子分别进行扩大培养。
[0028]2、弓形虫速殖子的收集与纯化：扩大培养过程中，待弓形虫RH和GT1感染Vero细胞约80％时，分别用细胞刮小心刮取培养物。所得产物经吹打混匀和5号针头充分破碎后，用40％Percoll/DMEM溶液和4℃3000rpm无制动梯度离心30min进行纯化。所得速殖子用无菌生理盐水和5000rpm离心3min进行洗涤，重复实验三次后，用血细胞计数板进行计数，10次/虫株。用无菌生理盐水将所得速殖子调至2.0
×
106个/mL后，备用。
[0029]3、弓形虫速殖子的灭活：将所得弓形虫RH和GT1速殖子等体积混合后，滴加分析纯级甲醛溶液至终浓度为4％，充分混匀后置4℃冰箱作用28d。期间，颠倒混匀次数不少于3次/d，每次不少于20个重复。
[0030]实施例2
[0031](二)铝佐剂和免疫原性组合物的制备
[0032]1、铝佐剂的制备：用铝粉加烧碱合成法制备铝佐剂，具体操作步骤如下：称取Al(OH)3干粉5.5g，加入6.0mL生理盐水后搅拌均匀。缓慢倾入浓硫酸约6.0mL，爆沸至棕褐色，加入温水至35.0mL，边加边搅拌。用前定容到100mL，温度约为80℃。配制8.0％NaOH溶液100mL，加温至75℃。将以上两种溶液等量加入另一耐酸容器内，熟化10min后将pH值调至6.9
±
0.1，继续熟化3min，稳定pH值为6.9。8000rpm离心5min，弃上清，加入5倍体积的生理盐水，离心弃上清，重复实验操作5次。所得沉淀用260mL无菌生理盐水充分溶解后，室温储
存备用。
[0033]2、免疫原性组合物的制备：4％甲醛溶液于4℃条件下灭活所得的弓形虫RH和GT1速殖子，经无菌生理盐水和5000rpm离心3min洗涤三次后，用无菌生理盐水调至4.0
×
106个/mL。加入等体积的所得铝佐剂，充分混匀后备用。
[0034]实验例：
[0035](三)免疫效果的评估
[0036]1、BALB/c实验鼠的分组：4
‑
6周龄BALB/c雌鼠66只购自桂林医学院实验动物中心，饲喂1w后，随机抽取3只，用眼球摘除法采血并分离血清，所得血清于
‑
20℃条件下暂存；剩余BALB/c实验鼠随机分为3组(I：Blank control；II：Al(OH)3；III：RH&GT1+Al(OH)3)，每组21只。
[0037]2、免疫方案：
[0038]第I组(Blank control)本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种免疫原性组合物，其特征在于：所述组合物包括弓形虫灭活速殖子和佐剂。2.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其特征在于：所述佐剂为铝佐剂。3.根据权利要求1或2所述的免疫原性组合物，其特征在于：所述组合物中的弓形虫灭活速殖子为弓形虫RH速殖子和GT1速殖子。4.根据权利要求3所述的免疫原性组合物，其特征在于：所述弓形虫RH速殖子和GT1速殖子的数目比值为：1:1。5.根据权利要求1或2所述的免疫原性组合物，其特征在于：所述弓形虫灭活速殖子与...
【专利技术属性】
技术研发人员：李中原，郭海婷，谭洁，何玉林，李夏，梁雪，
申请(专利权)人：桂林医学院，
类型：发明
国别省市：
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