一种缓冲液在脑特异性蛋白产物9.5检测试剂盒中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种缓冲液在脑特异性蛋白产物9.5检测试剂盒中的应用，所述的缓冲液为碳酸盐缓冲液，所述的碳酸盐缓冲液中每1000mL包括以下成分：碳酸钠0.5

【技术实现步骤摘要】
一种缓冲液在脑特异性蛋白产物9.5检测试剂盒中的应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种缓冲液在脑特异性蛋白产物9.5检测试剂盒中的应用。

技术介绍

[0002]脑特异性蛋白产物9.5(Protein gene product 9.5，PGP 9.5)也称UCH
‑
L1，是一种神经纤维中的特异性泛素羟基水解酶，也是神经轴突标记物，抗PGP9.5抗体与神经纤维结合，使用免疫荧光或免疫组织化学的方法即可标记出组织中PGP9.5阳性的神经纤维。
[0003]现有技术中已经公开，脑特异性蛋白产物9.5在创伤性脑损伤早期出现在血清和脑脊液中，因此检测脑特异性蛋白产物9.5可以作为检测创伤性脑损伤，且其敏感性和特异性比CT扫描更具优势。对于特异性蛋白产物9.5的检测方法进行改进对于创伤性脑损伤诊断具有重要意义。
[0004]Banyan Biomarkers研发的GFAP/PGP9.5脑损伤检测试剂盒Banyan BTI采用ELISA检测方法，诊断18岁及以上疑似TBI患者，具有97.6％的高灵敏性和99.6％的高度阴性预测值，优于CT扫描。
[0005]对于PGP9.5的检测，现有研究多侧重于单克隆抗体方向。
[0006]如中国专利201910719120.X中公开了一种鼠抗人泛素羧基末端水解酶
‑
1(UCH
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L1)的单克隆抗体，所述的抗体是由保藏号为CGMCC No.18188的杂交瘤细胞株UMAB244分泌产生。所述抗体的免疫原为真核细胞293T表达的UCH
‑
L1全长蛋白，可应用于检测UCH
‑
L1的各种免疫检测试剂盒的制备，包括但不限于双抗体夹心ELISA或化学发光法试剂盒的制备，为与UCH
‑
L1相关的疾病诊断提供辅助手段。
[0007]再如中国专利201780080585.4中公开了抗UCH
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L1抗体和抗GFAP抗体及其分别在来自个体的样品中的UCH
‑
L1和GFAP的体外检测中的用途，所述个体比如已知或疑似患有脑损伤或损害例如轻度创伤性脑损伤等神经损害的个体。还提供了利用上述抗体以及包含抗UCH
‑
L1抗体和抗GFAP抗体的组合物诊断个体的脑损伤或损害比如神经损害的方法、系统和试剂盒。
[0008]但在实际检测中，整个流程都会对最终的检测结果产生影响，对于抗体以外的检测部分进行优化，有利于提高PGP9.5检测试剂盒的整体性能，从而更好地应用于临床。

技术实现思路

[0009]为了解决上述问题，本专利技术提供了一种缓冲液在脑特异性蛋白产物9.5检测试剂盒中的应用，通过优化ELISA流程中的缓冲液，使脑特异性蛋白产物9.5检测试剂盒的检测性能提高。
[0010]本专利技术中，“ELISA”指将可溶性的抗原或抗体结合到固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法。该方法为本领域经典方法，操作流程中如无特别限制，本领域技术人员可以采用一般方法完成。
[0011]本专利技术中，“缓冲液”指的是多种成分的混合溶液，能在一定程度上抵消、减轻外在条件对整体实验的影响，从而保持溶液的相对稳定。
[0012]本专利技术中，“试剂盒”中可能包括用于检测流程的所有成分，但部分条件下，可能仅仅包括关键技术相关的部分，其他成分本领域技术人员可以轻易获得，且知晓具体与试剂盒的联用方式。
[0013]本专利技术中，“试剂盒的检测性能”用于衡量试剂盒针对检测目标的检测效果，其衡量标准是多方面的，可以是准确度、空白限、线性区间、重复性、批内差、批间差特异性、质控品瓶间差等。本专利技术中，各种用于验证试剂盒检测性能的实验方法，如无特别说明，均可参照本领域常规方法或者标准完成。
[0014]一方面，本专利技术提供了一种缓冲液在脑特异性蛋白产物9.5检测试剂盒中的应用。
[0015]所述的缓冲液为碳酸盐缓冲液，所述的碳酸盐缓冲液中包括以下成分：
[0016][0017][0018]所述的试剂盒中还包括HEPES缓冲液，所述的HEPES缓冲液中包括以下成分：
[0019]原料名称称取量4
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羟乙基哌嗪乙磺酸0.5
‑
7.2g氯化钠9g酪朊酸钠0.5
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5.0g甘露醇5
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30g非离子型表面活性剂2
‑
4mL防腐剂1mLpH值7.2
‑
8.0纯化水定容至1000mL
[0020]优选地，所述的碳酸盐缓冲液中包括以下成分：
[0021]原料名称称取量碳酸钠1.0
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3.0g碳酸氢钠3.0
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9.0g硫酸镁2.0
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4.0g氯化钾1.0
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2.0g
甘氨酸1.0
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5.0gpH值9.2
‑
9.8纯化水定容至1000mL
[0022]进一步优选地，所述的碳酸盐缓冲液中包括以下成分：
[0023][0024][0025]具体地，所述的HEPES缓冲液中，非离子型表面活性剂包括但不限于：吐温20；所述的防腐剂包括但不限于：Proclin300。
[0026]具体地，所述的碳酸盐缓冲液的配制方法为：称取Na2CO3、NaHCO3、MgSO4、KCl、甘氨酸加入到一定量的纯化水中搅拌至完全溶解，调试pH值并定容至1000mL。
[0027]具体地，所述的HEPES缓冲液的配制方法为：称取HEPES、NaCl、酪朊酸钠、甘露醇、非离子型表面活性剂、防腐剂加入到一定量的纯化水中搅拌至完全溶解，调试pH值在7.2
‑
8.0之间并定容至1000mL。
[0028]具体地，所述的试剂盒为ELISA试剂盒。
[0029]具体地，所述的碳酸盐缓冲液用于ELISA试剂盒中固相抗体的前处理、包被和酶标抗体偶联物的制备和/或保存。
[0030]具体地，所述的固相抗体前处理包括浓缩和/或稀释。
[0031]优选地，所述的试剂盒中还包括用于检测脑特异性蛋白产物9.5的其他试剂，所述的其他试剂包括但不限于：高碘酸钠溶液、六水合氯化镁溶液、氯化锌水溶液、乙酸水溶液、硼氢化钠水溶液、标准品、质控品、清洗浓缩液、显色液、终止液中的一种或多种。
[0032]所述的清洗浓缩液成分如下：
[0033]原料名称称取量三羟甲基氨基甲烷10
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15g氯化钠90g非离子型表面活性剂2
‑
50mLpH值7.0
‑
7.5纯化水定容至1000mL
[0034]另一方面，本专利技术提供了一种脑特异性蛋白产物9.5检测试剂盒。
[0035]具体地，所述的试剂盒中包括碳酸盐缓冲液和HEPES缓冲液；所述的碳酸盐缓冲液
中包括以下成分：
[0036]原料本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种缓冲液在脑特异性蛋白产物9.5检测试剂盒中的应用，其特征在于，所述的缓冲液为碳酸盐缓冲液，所述的碳酸盐缓冲液中包括以下成分：原料名称称取量碳酸钠0.5
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5.0g碳酸氢钠1.2
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9.6g硫酸镁1.0
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5.0g氯化钾0.5
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2.5g甘氨酸0.75
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7.5gpH值9.2
‑
9.8纯化水定容至1000mL所述的试剂盒中还包括HEPES缓冲液，所述的HEPES缓冲液中包括以下成分：原料名称称取量4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸0.5
‑
7.2g氯化钠9g酪朊酸钠0.5
‑
5.0g甘露醇5
‑
30g非离子型表面活性剂2
‑
4mL防腐剂1mLpH值7.2
‑
8.0纯化水定容至1000mL。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的碳酸盐缓冲液中包括以下成分：2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的碳酸盐缓冲液中包括以下成分：3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的碳酸盐缓冲液中包括以下成分：原料名称称取量碳酸钠2.0g碳酸氢钠8.0g硫酸镁4.0g
氯化钾2g甘氨酸5gpH值9.8纯化水定容至1000mL。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的碳酸盐缓冲液的配制方法为：称取Na2CO3、NaHCO3、MgSO4、KCl、甘氨酸加入到一定量的纯化水中搅拌至完全溶解，调试pH值并定容至1000mL。5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的HEPES缓冲液的配制方法为：称取HEPES、NaCl、酪朊酸钠、甘露醇、非离子型表面活性剂、防腐剂加入到一定量的纯化水中搅拌至完全溶解，调试pH值在7.2
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8.0之间并定容至1000mL。6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的试剂盒为ELISA试剂盒。7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的碳酸盐缓冲液用于ELISA试剂盒中固相抗体的前处理、包被和酶标抗体偶联物的制备和/或保存。8.根据权利要求7所述的应...

【专利技术属性】
技术研发人员：王法龙，李锋，刘聪，李博飞，王宁，
申请(专利权)人：北京美联泰科生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：