PDE4DIP基因在急性心梗早期检测试剂盒中的应用制造技术

本发明专利技术公开的PDE4DIP基因在急性心梗早期检测试剂盒中的应用，本发明专利技术设计和实验验证了合适长度的核酸探针能够在很短的时间内的检测心血管疾病疾病状态下基因心梗和心衰早期发病情况，以此项技术设计的试剂盒可以用于心血管疾病的早期快速诊断，当血管内皮细胞获心肌细胞处于异常血流压力，高血脂蛋白或心肌细胞受损细胞紧张时，通过检测血液中心肌肌钙蛋白的磷酸化情况和心肌细报钙离子通道变化的情况，以及联合检测其他传通的心梗心衰诊断标志物如肌红蛋白通路上分子的变化，可以早期诊断和预测心学管疾病特别是心梗和脑梗的风险。断和预测心学管疾病特别是心梗和脑梗的风险。

【技术实现步骤摘要】
PDE4DIP基因在急性心梗早期检测试剂盒中的应用


[0001]本专利技术属于生物学检测
，特别涉及PDE4DIP基因在急性心梗早期检测试剂盒中的应用。

技术介绍

[0002]临床上目前主要检测血浆MPO水平与心血管异常的发生情况如心梗，脑梗和死亡的关系，此外还有肌钙蛋白，肌红蛋白和肌酸激酶(CK)及肌酸激酶同工酶(CK—MB))等等，此类生物标记物主要发生在心肌受损和心学管症状的临床中晚期，对于心血管疾病的早期，目前尚无有效特异的早期心血管疾病的诊断方法和生物标记物。而且，检测的方法还是以酶联免疫标记和免疫发光技术为主，缺乏新颖的基因分子生物学方法。
[0003]目前酶联免疫标记和免疫发光技术的主要问题是特异性不够高，此外，肌钙蛋白，肌红蛋白和肌酸激酶(CK)及肌酸激酶同工酶(CK—MB))等标记物只能够检测到中晚期的病人，对早期心梗缺少有效性和特异性，况且检测的手断很难做到床边诊断POCT。
[0004]按照常规的方法,如果要测定心梗心衰的分子诊断标志物的话，如果是传统的肌红蛋白肌钙蛋白等标志物的话，必须到大医院去拥有免疫发光设备的科室，患者从家里走到医院，可能会耗时一个小时或者半个小时。如果要测定PDE4DIP这样的核酸标志物的话，需要三个小时以上的qPCR进行扩增方法，对于心梗心衰这样极性的致死性疾病来说，显然是缺乏时效性,因此，急需一种快速,简便和能做基层操作和实施的方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术采用目前先进的等温核酸基因扩增技术通过对45例急行心梗心衰基因组外显子测序结果的差异化表达筛选出来的自主开发的新的基因生物标志物，应用于急性心梗早期检测试剂盒，从而为心梗和心衰患者提供早期高灵敏度的基因分子诊断，特点为低成本,快速,可在15分钟内做出检测结果。
[0006]本专利技术的主要目的是提供PDE4DIP基因在急性心梗早期检测试剂盒中的应用，为心血管疾病的早期诊断提供快速特异的新的诊断方法，减少患病人群的死亡。
[0007]为实现上述目的，本专利技术一方面提出的急性心梗早期检测试剂盒，包括扩增及PDE4DIP基因。
[0008]优选地，所述的PDE4DIP基因核酸序列为：
[0009][0010]优选地，所述的PDE4DIP基因核酸序列为：
[0011][0012]优选地，急性心梗早期检测试剂盒，还包括DNA聚合酶和试剂。其中试剂包括DNA聚合酶，合成的引物，dNTP,缓冲液和纯净水。
[0013]优选地，PDE4DIP核酸扩增检测方法为：
[0014]体系1：
[0015][0016]体系2：
[0017][0018][0019]将体系1在70℃水浴5min后，冰浴2min后，与体系2混合，于37℃15min， 42℃60min，70℃10min。
[0020]本专利技术另一方面提出PDE4DIP基因在急性心梗早期检测试剂盒中的应用，通过对PDE4DIP基因设计核酸基因探针和荧光标记物，来检测潜在的急性心梗和心衰的PDE4DIP基因标志物。
[0021]本专利技术设计和实验了该PDE4DIP基因能够在很短的时间内的检测心血管疾病状态下基因心梗心衰标志物，以此项技术设计的试剂盒可以用于心血管疾病的早期快速诊断，当血管内皮细胞获心肌细胞处于异常血流压力，高血脂蛋白或心肌细胞受损细胞紧张时，通过检测血液中心肌肌钙蛋白的磷酸化情况和心肌细报钙离子通道的情况，以及联合检测其他传通的心梗心衰诊断标志物如肌红蛋白通路上分子的变化，可以早期诊断和预测心学管疾病特别是心梗和脑梗的风险。
具体实施方式
[0022]下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0023]另外，在本专利技术中涉及“第一”、“第二”等的描述仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示其相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括至少一个该特征。另外，各个实施例之间的技术方案可以相互结合，但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础，当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在，也不在本专利技术要求的保护范围之内。
[0024]本专利技术通过第一批45例心梗心衰患者的外周血样本与正常对照人群样本外显子测序，总共发现5个与急性心梗和心衰相关的基因其中1个基因，通过对这这个高表达基因设计核酸基因探针和荧光标记物，来检测这个新的潜在的急性心梗和心衰的基因标志物。
[0025]我们通过对我们用急性心梗和心衰外显子测序实验筛选出来的同时在心梗和心衰方面差异化表达出的PDE4DIP基因作为全新的心梗和心衰基因，是基于中国人群患者发现的，我们的发现不是基于染色体片段相关，而是基因外显资全序列测序得到的，在转化应用上更具有应用价值，我们设计了序列设计的探针及试剂盒，做为心梗和心衰早期诊断的探索性的方法。
[0026]在血液异常流变的状态下(如高血脂，高甘有三脂)，可以激活XBP
‑
1S 和旁路剪切，导致血管内皮细胞调亡和动脉粥样硬化的发展，根据我们的外显子NGS测序数据分析，我们已经确定了与急性心肌梗死(AMI)和冠状动脉疾病(CAD)相关的差异表达基因PDE4DIP。PDE4DIP基因通过磷酸化心肌肌球蛋白结合蛋白
‑
C(cMyBPC)和心肌肌钙蛋白(cTNI)来调节心肌收缩力,是心肌动力的关健调节元素之一。
[0027]PDE4DIP基因是位于人类1号染色体的一个具有众多功能的一个基因，主要参与细胞微管形成和细胞内高尔基体相关的功能。通过基因组学功能分析，我们也设计了相关基因表达的核酸探针和引物。
[0028]采用了Primer3软件设计了相应的基因表达引物做临床验正,设计的2对引物如下:
[0029]PDE4DIP基因核酸探针序列1
[0030][0031]PDE4DIP基因核酸探针序列2
[0032][0033]PDE4DIP核酸扩增检测方法：
[0034]体系1：
[0035][0036]体系2：
[0037][0038]将体系1在70℃水浴5min后，冰浴2min后，与体系2混合，于37℃15min， 42℃60min，70℃10min。
[0039]结果判断：PDE4DIP基因在我们急性心梗和心衰的45例病人中有显著性差异性高表达。
[0040]上述等温扩增的方法为针对目的基因的6个区域设计4条特异性引物(包括2条内引物和2条外引物)，利用一种具有链置换特性的Bst DNA聚合酶，在等温条件下高效、快速、高特异地扩增靶序列，其反应过程包括哑铃状模板合成阶段、循环扩增阶段、伸长和再循环阶段。其基本原理是靶DNA变性后，内外引物在Bst DNA聚合酶作本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.急性心梗早期检测试剂盒，其特征在于，包括扩增及PDE4DIP基因。2.根据权利要求1所述的急性心梗早期检测试剂盒，其特征在于，所述的PDE4DIP基因核酸序列为：3.根据权利要求2所述的急性心梗早期检测试剂盒，其特征在于，所述的PDE4DIP基因核酸序列为：4.根据权利要求1所述的急性心梗早期检测试剂盒，其特征在于：还包括酶和试剂。5.根据权利要求1所述的急性心梗早期检测...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨海涛，廖晓星，梁誉斌，
申请(专利权)人：中山大学深圳研究院，
类型：发明
国别省市：