抗CD33抗体和其用途制造技术

描述了一套新颖的抗CD33抗体。提供的抗体是在CD33的V型Ig样结构域存在或不存在下都结合C2型Ig样结构域的泛结合剂；或是仅在CD33的V型Ig样结构域不存在下结合C2型Ig样结构域的C2型特异性结合剂；或是结合CD33的V型Ig样结构域的V型结合剂。所述抗体提供了针对如急性骨髓性白血病(AML)之类CD33相关病症的新颖治疗和诊断工具。疗和诊断工具。疗和诊断工具。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗CD33抗体和其用途
[0001]相关申请的交叉参考
[0002]本申请要求2020年3月31日提交的美国临时专利申请号63/003,219的优先权，该案以引用的方式整体并入本文，就如同在本文中完整阐述一般。
[0003]关于联邦政府资助的研究或开发的声明
[0004]本专利技术是根据美国国家卫生研究院(National Institutes of Health)授予的CA234203和CA223409在政府资助下作出。政府拥有本专利技术的某些权利。
[0005]关于序列表的参考
[0006]与本申请相关的序列表是以文本格式代替纸质副本提供，并且特此以引用的方式并入本说明书中。含有序列表的文本文件的名称是F053
‑
0129PCT_ST25.txt。文本文件是232KB，于2021年3月31日创建，并且通过EFS
‑
Web以电子方式提交。


[0007]描述了一套新颖的抗CD33抗体。提供的抗体是在CD33的V型Ig样结构域存在或不存在下结合C2型Ig样结构域的泛结合剂；或是仅在CD33的V型Ig样结构域不存在下结合C2型Ig样结构域的C2型结合剂；或是结合CD33的V型Ig样结构域的V型结合剂。所述抗体提供了针对CD33相关病症如急性骨髓性白血病(AML)的新颖治疗和诊断工具。

技术介绍

[0008]根据世界卫生组织的数据，癌症是全球第二大死亡原因，并且在2018年估计有960万人因此而死亡。急性骨髓性白血病(AML)是由克隆性增殖性成髓细胞的恶变引起的一类癌症。美国每年有20,000例新增AML病例，并且每年有11,000例AML死亡病例(Siegel等人,2021,CA Cancer J Clin.71(1):7
‑
33)。尽管在年轻AML患者中利用常规化学疗法可以达到60％至80％的较高完全缓解率(等人,2017.Blood.129(4):424
‑
447)，但对于65岁或以上的老年患者的治疗结果仍然不令人满意，多达70％的患者在诊断后一年内死于其疾病(Meyers等人,Appl Health Econ Health Policy,11:275
‑
286,2013)。不幸的是，由于AML和潜在的白血病干细胞的化疗难治性，常规疗法后复发很常见(Eppert等人,2011.Nat.Med.17(9):1086
‑
1093)，而且当前的复发/难治性(R/R)AML的治疗选择并不乐观，导致12个月的总生存率低于30％。
[0009]CD33是唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素(sialic acid binding,immunoglobulin
‑
like lectin，SIGLEC)蛋白质家族的成员。它是一种67
‑
kDa的糖基化跨膜蛋白。CD33(又称为SIGLEC
‑
3)是一种髓系分化抗原，见于几乎所有AML患者的至少某些白血病细胞，而且在一些情况下，也可能见于AML干细胞。基于这种广泛的表达模式，CD33已被广泛用作AML的治疗靶标。近期由若干随机化研究得到的数据表明，CD33抗体
‑
药物缀合物吉妥珠单抗奥唑米星(gemtuzumab ozogamicin，GO)当添加至确定的患有新诊断的AML患者的亚群的化学疗法中时可提高生存率。这一数据证实CD33是AML免疫疗法的首个(也是迄今为止唯一的)靶标。在开发新的、更有效的CD33定向治疗剂(例如抗体
‑
药物缀合物、放射免疫
缀合物、双特异性抗体、嵌合抗原受体[CAR]修饰的细胞)以克服所观察到的GO的缺点的同时，人们对于CD33作为其他恶性和非恶性病症的药物靶标的兴趣日益浓厚。这些努力包括靶向GO不识别的CD33剪接变体以及靶向其他血液系统恶性病中的CD33+肿瘤细胞、多种疾病中的CD33+骨髓源性抑制细胞(MDSC)以及阿尔茨海默氏病(Alzheimer
’
s disease)中的正常CD33+小胶质细胞(Walter,Expert Opin Biol Ther.2020,20(9):955
‑
958)。
[0010]全长CD33蛋白质(CD33
FL
)的特征在于在其细胞外部分中具有氨基末端、膜远端V型免疫球蛋白(Ig)样结构域和膜近端C2型Ig样结构域(图1)。存在CD33的较短同种型。CD33的较短同种型包括一个缺少外显子2的变体，该变体编码V型结构域(CD33
ΔE2
)。至少在mRNA水平上，CD33
ΔE2
在AML患者骨髓和外周血中的骨髓细胞中广泛表达。然而，目前几乎所有商业和临床上可用的CD33抗体都识别免疫显性V型Ig样结构域。这意味着这些抗体将不识别缺少V型结构域的较短形式的CD33，例如CD33
ΔE2
。这可以解释在一项儿科AML临床试验中得到的观察结果，即，在CD33基因中具有单核苷酸多态性导致CD33
ΔE2
优先转录和CD33
FL
翻译减少的患者不会受益于强化化学疗法中吉妥珠单抗奥唑米星(该药剂也结合至CD33的V型结构域)的添加。

技术实现思路

[0011]本公开提供了抗体，该抗体结合/识别CD33蛋白质中的C2型Ig样结构域，无论是否存在V型Ig样结构域(CD33
PAN
抗体(图1)。这些抗体被称为泛结合剂。泛结合剂可以靶向大量的CD33表达细胞，因为它们可以结合表达CD33
FL
以及较短同种型如CD33
ΔE2
变体的靶标细胞。本文所公开的CD33
PAN
抗体包括：6H9、9G2、3A5、7D5、1H7和2D5。
[0012]本公开还提供了结合CD33的V型Ig样结构域的抗CD33抗体。这些V型结合剂包括5D12和8F5，它们为表达CD33
FL
的患者提供了额外的诊断和治疗选择。
[0013]本公开还提供了仅在不存在V型结构域的情况下才结合C2型结构域的抗体。这些C2型结合剂包括12B12、11D5、13E11、11D11和7E7。
[0014]本文所公开的抗体可以工程改造为多种形式，例如抗CD33抗体缀合物。抗CD33抗体缀合物是包括与基于CD33抗体的结合结构域缀合的分子的人工分子。抗CD33抗体缀合物包括抗CD33免疫毒素、抗体
‑
药物缀合物(ADC)、抗体
‑
荧光团缀合物和放射性同位素缀合物。本文所公开的抗体还可以工程改造为抗CD33多特异性抗体(例如抗CD33双特异性抗体、抗CD33三特异性抗体、抗CD33四特异性抗体等)。当呈多特异性形式时，经过工程改造的分子可以结合CD33，以及例如免疫细胞上的免疫活化表位，如CD3、CD16、CD28、CD64和/或4
‑
1BB。这些实施方案用本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含一组互补决定区(CDR)，所述CDR具有(i)具有如SEQ ID NO:20中所示序列的CDRL1，具有如SEQ ID NO:15中所示序列的CDRL2，具有如SEQ ID NO:16中所示序列的CDRL3，具有如SEQ ID NO:21中所示序列的CDRH1，具有如SEQ ID NO:22中所示序列的CDRH2，以及具有如SEQ ID NO:23中所示序列的CDRH3；(ii)具有如SEQ ID NO:254中所示序列的CDRL1，具有序列YTS的CDRL2，具有如SEQ ID NO:16中所示序列的CDRL3，具有如SEQ ID NO:254中所示序列的CDRH1，具有如SEQ ID NO:255中所示序列的CDRH2，以及具有如SEQ ID NO:23中所示序列的CDRH3；(iii)具有如SEQ ID NO:20中所示序列的CDRL1，具有如SEQ ID NO:187中所示序列的CDRL2，具有如SEQ ID NO:16中所示序列的CDRL3，具有如SEQ ID NO:291中所示序列的CDRH1，具有如SEQ ID NO:292中所示序列的CDRH2，以及具有如SEQ ID NO:293中所示序列的CDRH3；或(iv)具有如SEQ ID NO:20中所示序列的CDRL1，具有如SEQ ID NO:187中所示序列的CDRL2，具有如SEQ ID NO:16中所示序列的CDRL3，具有如SEQ ID NO:325中所示序列的CDRH1，具有如SEQ ID NO:326中所示序列的CDRH2，以及具有如SEQ ID NO:293中所示序列的CDRH3。2.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段具有具有如SEQ ID NO:40中所示序列的可变轻链和具有如SEQ ID NO:41中所示序列的可变重链，或与如SEQ ID NO:40中所示序列具有至少90％序列同一性的可变轻链和与所述具有如SEQ ID NO:41中所示序列的可变重链具有至少90％序列同一性的可变重链。3.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗原结合片段是呈VH
‑
VL取向或VL
‑
VH取向的单链可变片段(scFv)。4.如权利要求3所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述scFv具有如SEQ ID No.154或155中所示的序列。5.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段是作为具有结合CD3的第二结合结构域的双特异性抗体的一部分。6.如权利要求5所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述第二结合结构域具有具有如SEQ ID NO:138中所示序列的可变轻链和具有如SEQ ID NO:139中所示序列的
可变重链，或与如SEQ ID NO:138中所示序列具有至少90％序列同一性的可变轻链和与所述具有如SEQ ID NO:139中所示序列的可变重链具有至少90％序列同一性的可变重链。7.如权利要求5所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述双特异性抗体具有如SEQ ID NO:164或165中所示的序列。8.一种抗体或其抗原结合片段，根据IMGT、Kabat、North或Chothia所定义，所述抗体或其抗原结合片段包含6H9、9G2、1H7、2D5、5D12、3A5变体1、3A5变体2、7D5变体1、7D5变体2、8F5、12B12、11D11、7E7、11D5或13E11的互补决定区(CDR)集合。9.一种CD33靶向剂，所述靶向剂包含结合结构域，根据IMGT、Kabat、North或Chothia所定义，所述结合结构域包含6H9、9G2、1H7、2D5、3A5变体1、3A5变体2、7D5变体1、7D5变体2、5D12、8F5、12B12、11D11、7E7、11D5或13E11的互补决定区(CDR)集合，作为抗CD33免疫毒素、抗CD33抗体
‑
药物缀合物、抗体
‑
荧光团缀合物、抗CD33抗体
‑
放射性同位素缀合物、抗CD33双特异性抗体、抗CD33双特异性免疫细胞接合抗体、抗CD33三特异性抗体和/或抗CD33四特异性抗体的一部分。10.一种CD33靶向剂，所述靶向剂包含结合结构域，所述结合结构域包含6H9、9G2、1H7、2D5、3A5变体1、3A5变体2、7D5变体1、7D5变体2、5D12、8F5、12B12、11D11、7E7、11D5或13E11的可变轻链以及6H9、9G2、1H7、2D5、5D12、3A5变体1、3A5变体2、7D5变体1、7D5变体2、8F5、12B12、11D11、7E7、11D5或13E11的相应可变重链，或与所述6H9、9G2、1H7、2D5、3A5变体1、3A5变体2、7D5变体1、7D5变体2、5D12、8F5、12B12、11D11、7E7、11D5或13E11的可变轻链具有至少90％序列同一性的序列以及与所述6H9、9G2、1H7、2D5、3A5变体1、3A5变体1、7D5变体2、7D5变体2、5D12、8F5、12B12、11D11、7E7、11D5或13E11的相应可变重链具有至少90％序列同一性的序列作为抗CD33免疫毒素、抗CD33抗体
‑
药物缀合物、抗体
‑
荧光团缀合物、抗CD33抗CD33抗体
‑
放射性同位素缀合物、抗CD33双特异性抗体、抗CD33双特异性免疫细胞接合抗体、抗CD33三特异性抗体和/或抗CD33四特异性抗体的一部分。11.如权利要求9或10所述的CD33靶向剂，其中所述CD33靶向剂包含抗CD33免疫毒素，其中所述毒素包含全毒素或半毒素。12.如权利要求9或10所述的CD33靶向剂，其中所述CD33靶向剂包含抗CD33免疫毒素，其中所述毒素包含相思豆毒素、三角梅核糖体失活蛋白、异株腹泻毒蛋白1、白喉毒素(DT)、白树毒素、槲寄生凝集素、蒴莲根毒素、美洲商陆抗病毒蛋白(PAP)、假单胞菌外毒素(PE)、蓖麻毒素和/或皂草素。13.如权利要求9或10所述的CD33靶向剂，其中所述CD33靶向剂包含抗CD33抗体
‑
药物缀合物，其中所述药物包含单甲基奥瑞他汀E[MMAE]、维汀、海兔毒素、奥瑞他汀、卡奇霉素、吡咯并苯并二氮杂卓(PBD)、奈莫柔比星、PNU
‑
159682、蒽环霉素、柔红霉素、长春花生物碱、紫杉烷、单端孢菌素、CC1065、喜树碱、依利奈法德、紫杉醇、细胞松弛素B、短杆菌肽D、溴化乙锭、依米汀、丝裂霉素、依托泊苷、替诺泊苷、长春新碱、长春碱、秋水仙素、多柔比星、柔红霉素、二羟基蒽二酮、米托蒽醌、光神霉素、放线菌素D、1
‑
脱氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因、丁卡因、利多卡因和/或普萘洛尔。14.如权利要求9或10所述的CD33靶向剂，其中所述CD33靶向剂包含抗CD33抗体
‑
放射
性同位素缀合物，其中所述放射性同位素包含砷
‑
72、砷
‑
74、碘
‑
131、铟
‑
111、钇
‑
90、镥
‑
177、砹
‑
211、锕
‑
225、铋
‑
212和/或铋
‑
213。15.如权利要求9或10所述的CD33靶向剂，其中所述CD33靶向剂包含抗CD33抗体
‑
放射性同位素缀合物，其中所述放射性同位素包含225Ac、228Ac、
111
Ag、
124
Am、
72
As、
74
As、
211
At、
209
At、
194
Au、
128
Ba、7Be、
206
Bi、
245
Bk、
246
Bk、
76
Br、
11
C、
47
Ca、
254
Cf、
242
Cm、
51
Cr、
67
Cu、
153
Dy、
157
Dy、
159
Dy、
165
Dy、
166
Dy、
171
Er、
250
Es、
254
Es、
147
Eu、
157
Eu、
52
Fe、
59
Fe、
251
Fm、
252
Fm、
253
Fm、
66
Ga、
72
Ga、
146
Gd、
153
Gd、
68
Ge、
170
Hf、
171
Hf、
193
Hg、
193
mHg、
160
mHo、
130
I、
131
I、
135
I、
114
mIn、
185
Ir、
42
K、
43
K、
76
Kr、
79
Kr、
81
mKr、
132
La、
262
Lr、
169
Lu、
174
mLu、
176
mLu、
257
Md、
260
Md、
28
Mg、
52
Mn、
90
Mo、
24
Na、
95
Nb、
138
Nd、
57
Ni、
66
Ni、
234
Np、
15
O、
182
Os、
189
mOs、
191
Os、
32
P、
201
Pb、
101
Pd、
143
Pr、
191
Pt、
243
Pu、
225
Ra、
81
Rb、
188
Re、
105
Rh、

【专利技术属性】
技术研发人员：R，
申请(专利权)人：弗莱德哈钦森癌症中心，
类型：发明
国别省市：