【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗囊性纤维化的组合物和方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2020年3月29日提交的题为“用于治疗囊性纤维化的组合物和方法(COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING CYSTIC FIBROSIS)”的美国临时专利申请第63/001,377号以及于2020年9月27日提交的题为“用于治疗囊性纤维化的组合物和方法(COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING CYSTIC FIBROSIS)”的美国临时专利申请第63/083,942号的优先权的权益，所述美国临时专利申请的内容以全文引用的方式并入本文中。
[0003]本专利技术属于反义寡核苷酸和反义寡核苷酸的治疗性用途领域。
技术介绍
[0004]囊性纤维化(CF)是一种由CFTR基因的突变引起的常见的、严重的常染色体隐性疾病。CFTR基因编码负责上皮细胞中氯离子转运的氯离子通道。CF主要表现在肺部，90％以上的死亡率与呼吸系统疾病有关。呼吸道疾病与气道上皮的CFTR功能不足有关。
[0005]截至目前，全世界已鉴定出大约2000种不同的破坏CFTR功能的突变。
[0006]近年来，分子和细胞生物学的基础知识帮助开发了特异性CF突变的治疗方法。目前批准的疗法包含校正CFTR蛋白加工中的缺陷(校正剂：VX
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809/鲁玛卡托(Lumacaftor)、VX
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661/替扎卡托(Tezacaftor)和VX>‑
445/依来卡托(elexacaftor))、氯离子通道功能(增效剂：VX
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770/Kalydeco)以及两种疗法的组合。然而，对于携带对可用疗法无应答的其它突变(如终止突变、错义突变等)的患者，尚无可用的疗法。
[0007]施用反义寡核苷酸(AO或ASO)是治疗遗传性病症最有前途的治疗方法之一。AO是可以退火到基序的短合成分子，所述基序预测参与前mRNA剪接。所述方法基于剪接切换。与所选位点结合的AO有望掩蔽靶区，并促进正常剪接或使得能够特异性排除或包含所选外显子。AO对其靶标具有高度特异性，并且不影响细胞中的任何其它序列。常用的几种经化学修饰的AO分子包含：2'
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O
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甲基
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硫代磷酸(20MP)、二氨代磷酸吗啉代寡聚物(PMO)、肽核酸(PNA)、2
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甲氧乙基硫代磷酸(MOE)、约束性乙基(cET)、配体缀合反义(LICA)以及交替锁核酸(LNA)。
[0008]AO修饰保持了其稳定性，提高了其靶亲和力，并提供了良好的药代动力学性质和生物稳定性。ASO作为治疗剂的潜力已在几种人类遗传疾病中得到证实。其中的疾病是脊髓性肌萎缩(SMA)，其中基因存活运动神经元2(SMN2)中包含外显子7，从而产生全功能蛋白。基于患有严重SMA的新生小鼠幼崽的研究的可喜结果，由渤健(Biogen)和伊奥尼斯(Ionis)开发的基于ASO的药物(诺西那生(nusinersen))获得了FDA的批准，其依据是在婴儿发作型SMA患者中成功完成了3期临床试验，显示出在SMA婴儿的运动功能里程碑方面的显著改善。
技术实现思路
[0009]本专利技术涉及一种包括寡核苷酸的组合物和所述组合物的使用方法，所述寡核苷酸能够与CFTR前mRNA结合，从而调节剪接并恢复或增强CFTR基因产物的功能。因此，本专利技术鉴定了所述CFTR前mRNA内的序列，所述序列被靶向以调节所述CFTR前mRNA的剪接级联。
[0010]本专利技术部分基于以下发现，即人工“反义”寡核苷酸(ASO)分子能够靶向并结合预定序列，并且这种结合可以调节前mRNA分子剪接成成熟mRNA，随后所述成熟mRNA以足够的水平翻译成功能蛋白。
[0011]根据第一方面，提供了一种用于在细胞中诱导囊性纤维化跨膜传导调节因子(CFTR)前mRNA的外显子24跳跃的方法，所述方法包括使所述细胞与有效量的合成反义寡核苷酸(ASO)接触，所述ASO包括14至24个连续的核碱基，所述ASO与衍生自由以下组成的多核苷酸序列的核酸序列的等长部分具有至少75％的互补性：GAAAGUAUUUAUUUUUUCUGGAACAUUUAGAAAAAACUUGGAUCCCUAUGAACAGUGGAGUGAUCAAGAAAUAUGGAAAGUUGCAGAUGAGGUAAGGCUGCUAACUGA(SEQ ID NO:1)，从而在所述细胞中诱导所述CFTR前mRNA的外显子24跳跃。
[0012]根据另一方面，提供了一种用于治疗有需要的受试者的囊性纤维化(CF)的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的合成反义寡核苷酸(ASO)，所述ASO包括14至24个连续的核碱基，所述ASO与衍生自由以下组成的多核苷酸序列的核酸序列的等长部分具有至少75％的互补性：GAAAGUAUUUAUUUUUUCUGGAACAUUUAGAAAAAACUUGGAUCCCUAUGAACAGUGGAGUGAUCAAGAAAUAUGGAAAGUUGCAGAUGAGGUAAGGCUGCUAACUGA，其中所述ASO诱导所述囊性纤维化跨膜传导调节因子(CFTR)前mRNA的外显子24跳跃，从而治疗所述受试者的CF。
[0013]根据另一方面，提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括：ASO，所述ASO包括14至24个连续的核碱基，所述ASO与衍生自由SEQ ID NO:1组成的多核苷酸序列的核酸序列的等长部分具有至少80％的互补性，并且所述ASO的特征在于诱导所述CFTR前mRNA的外显子24跳跃；以及药学上可接受的载体。
[0014]根据另一方面，提供了一种试剂盒，其包括：(a)至少一种ASO；以及以下中的至少一者：(b)至少一种CFTR修饰剂；或(c)至少一种CF药物，其中所述ASO选自由SEQ ID No:2
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16组成的组，并且其中所述CFTR修饰剂选自由以下组成的组：CFTR增效剂、CFTR校正剂、通读翻译药剂(Translational Read
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Through agent)和CFTR扩大剂。
[0015]在一些实施例中，所述方法进一步包括向所述受试者施用治疗有效量的一种或多种CFTR修饰剂。
[0016]在一些实施例中，所述CFTR修饰剂增加CFTR门打开的持续时间、通过所述CFTR门的氯离子流量、CFTR蛋白的正确折叠、锚定于细胞膜的CFTR的数量或其任何组合。
[0017]在一些实施例中，所述CFTR修饰剂选自由以下组成的组：增效剂、校正剂和扩大剂。
[0018]在一些实施例中，所述CFTR修饰剂是依伐卡托(ivacaftor)、鲁玛卡托、替扎卡托、依来卡托、VX
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659、VX
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152或VX
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440或其任何组合。
[0019]在一些实施例中，所述ASO包括选本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于在细胞中诱导囊性纤维化跨膜传导调节因子(CFTR)前mRNA的外显子24跳跃的方法，所述方法包括使所述细胞与有效量的合成反义寡核苷酸(ASO)接触，所述ASO包括14至24个连续的核碱基，所述ASO与衍生自由以下组成的多核苷酸序列的核酸序列的等长部分具有至少75％的互补性：GAAAGUAUUUAUUUUUUCUGGAACAUUUAGAAAAAACUUGGAUCCCUAUGAACAGUGGAGUGAUCAAGAAAUAUGGAAAGUUGCAGAUGAGGUAAGGCUGCUAACUGA(SEQ ID NO:1)，从而在所述细胞中诱导所述CFTR前mRNA的外显子24跳跃。2.一种用于治疗有需要的受试者的囊性纤维化(CF)的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的合成反义寡核苷酸(ASO)，所述ASO包括14至24个连续的核碱基，所述ASO与衍生自由以下组成的多核苷酸序列的核酸序列的等长部分具有至少75％的互补性：GAAAGUAUUUAUUUUUUCUGGAACAUUUAGAAAAAACUUGGAUCCCUAUGAACAGUGGAGUGAUCAAGAAAUAUGGAAAGUUGCAGAUGAGGUAAGGCUGCUAACUGA，其中所述ASO诱导所述囊性纤维化跨膜传导调节因子(CFTR)前mRNA的外显子24跳跃，从而治疗所述受试者的CF。3.根据权利要求2所述的方法，其进一步包括向所述受试者施用治疗有效量的一种或多种CFTR修饰剂。4.根据权利要求3所述的方法，其中所述CFTR修饰剂增加CFTR门打开的持续时间、通过所述CFTR门的氯离子流量、CFTR蛋白的正确折叠、锚定于细胞膜的CFTR的数量或其任何组合。5.根据权利要求3或4所述的方法，其中所述CFTR修饰剂选自由以下组成的组：增效剂、校正剂和扩大剂。6.根据权利要求3至5中任一项所述的方法，其中所述CFTR修饰剂是依伐卡托(ivacaftor)、鲁玛卡托(lumacaftor)、替扎卡托(tezacaftor)、依来卡托(elexacaftor)、VX
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659、VX
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152或VX
‑
440或其任何组合。7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述ASO包括选自由以下组成的组的主链：磷酸
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核糖主链、磷酸
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脱氧核糖主链、硫代磷酸
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脱氧核糖主链、2'
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O
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甲基
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硫代磷酸主链、二氨代磷酸吗啉代主链、肽核酸主链、2
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甲氧乙基硫代磷酸主链、约束性乙基主链、交替锁核酸主链、硫代磷酸主链、N3'
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P5'氨代磷酸、2'
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脱氧
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2'
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氟代
‑
β
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d
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阿拉伯糖核酸、环己烯核酸主链核酸、三环
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DNA(tcDNA)核酸主链、配体缀合反义以及其组合。8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述ASO包括17至22个碱基。9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述ASO包括选自由以下组成的组的序列：SEQ ID No:2
‑
16。10.根据权利要求2至9中任一项所述的方法，其中所述受试者包括选自由以下组成的组的至少一个突变：...
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