用于培养一牛祖细胞的无血清培养基制造技术

一种培养一牛祖细胞的方法，包括以下步骤：在用于培养一牛祖细胞的一无血清培养基中培养一牛祖细胞，其中所述无血清培养基包含一白蛋白；及一成纤维细胞生长因子。及一成纤维细胞生长因子。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于培养一牛祖细胞的无血清培养基


[0001]本专利技术属于用于动物细胞培养的无血清培养基的领域，更具体地，是用于培养一牛祖细胞(bovine progenitor cell)，包括(骨骼)肌肉组织衍生的数个祖细胞及脂肪组织衍生的数个祖细胞。本专利技术还涉及使用本专利技术的一培养基来培养数个牛祖细胞的方法。更具体而言，本专利技术的无血清培养基可用于这种祖细胞的增殖(扩增)。

技术介绍

[0002]来自不同来源的血清已被用作动物细胞培养基中的一重要成分，因为它提供了多种重要的数个营养物质、数个维生素、数个生长因子及数个粘附蛋白等成分。然而，血清是细菌、支原体、病毒及朊病毒等污染物的潜在来源，而后者是最近引起关注的来源，因为它们是人类及其他动物传染性神经退行性疾病的病原体，而血清最常获得自这些其他动物，例如获得自牛。尤其是当动物细胞类型被培养用于食品应用时，例如基于细胞培养的肉类生产供人类食用，这些考虑因素扮演重要角色。
[0003]此外，血清代表了生物过程的高成本，并且由于血清的批次间差异而引入了性能的可变性。如果在细胞培养应用中使用血清，动物福祉将成为另一个令人担忧的问题。
[0004]因此，需要避免在细胞培养应用中使用血清(即，使用一无血清培养基)，同时在细胞增殖方面仍能达到可接受的性能，例如细胞生长速率或寿命(细胞总数倍增)，所述可接受的性能最好与含血清培养基进行比较。
[0005]尤其对于用于人类消费的基于细胞培养的肉制品生产，需要允许牛肌肉组织衍生的及牛脂肪组织衍生的祖细胞增殖而不是分化的无血清培养基。此类扩增的祖细胞群随后可在分化培养基中培养，以将所述祖细胞分化成肌肉细胞及肌肉纤维或脂肪组织细胞，其可掺入基于细胞培养的肉制品中以供人类食用。不幸的是，目前用于牛祖细胞增殖的无血清培养基是有限的，并且可用培养基的性能通常不能令人满意。

技术实现思路

[0006]本专利技术人发现了一种无血清培养基，所述无血清培养基可用于非人哺乳动物祖细胞，尤其是牛祖细胞(bovine progenitor cells)，例如牛肌肉组织衍生的祖细胞及牛脂肪组织衍生的祖细胞的培养及增殖(扩增)。
[0007]因此，本专利技术在一第一方面提供了一种培养一牛祖细胞的方法，包括以下步骤：在用于培养一牛祖细胞的一无血清培养基中培养一牛祖细胞，其中所述无血清培养基包含一白蛋白(albumin)；一成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor，FGF)。
[0008]以同样的方式，本专利技术提供了一种用于培养一牛祖细胞的一无血清培养基，其包含一白蛋白；一成纤维细胞生长因子(FGF)。
[0009]本专利技术人的发现之一是所述数个牛祖细胞在无血清培养时强烈依赖于白蛋白及成纤维细胞生长因子的存在，以用于增殖(扩增)目的。图4显示在无血清培养基中缺乏白蛋白及FGF的情况下将强烈影响牛祖细胞增殖率。这是一个新的见解。
[0010]以同样的方式，本专利技术还提供了一种用于培养一牛祖细胞的无血清培养基，包含一白蛋白；如本文所述的一生长因子及/或一细胞因子，优选为一成纤维细胞生长因子(FGF)。
[0011]专利技术人的另一重要成就是他们能够化学地定义一无血清培养基，所述无血清培养基可用于增殖祖细胞，尤其是牛祖细胞。本专利技术的一无血清培养基的数个优点是它不含血清并且优选也不含动物成分。与含有血清的培养基相比，这种无血清培养基的生产成本显着降低，这是获得基于活细胞培养的肉制品的必要条件。此外，出人意料地确定了牛祖细胞在本专利技术的无血清培养基中的生长(曲线)比所述细胞在含血清培养基中的生长(曲线)更稳定，因为在本专利技术的无血清培养基中的生长速率后者逐渐减少，直到细胞生长停止(参见图3)。图3还显示牛祖细胞在本专利技术的无血清培养基中的生长速率是有利的，并且至少与使用含血清培养基达到的生长速率相当。实验数据进一步表示出，用于人类消费的基于细胞培养的肉类生产的牛祖细胞在一系列浓度的培养基成分中表现出良好的性能(图2及图4)。
[0012]因此，在本专利技术的无血清培养基或其中使用本专利技术的无血清培养基的本专利技术的培养方法的一优选实施例中，所述培养基进一步包含：一或多种维生素及/或激素，选自由抗坏血酸(ascorbic acid)或其一衍生物、一胰岛素、一生长激素及一氢化可的松(hydrocortisone)所组成的群组；及一或多种细胞因子及/或生长因子，选自由一血小板衍生生长因子(platelet
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derived growth factor，PDGF)、一胰岛素样生长因子(insulin
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like growth factor，IGF)、一血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、一肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor，HGF)及一白细胞介素6(interleukin 6，IL
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6)所组成的群组。
[0013]在本专利技术的无血清培养基或其中使用本专利技术的无血清培养基的本专利技术的培养方法的另一优选实施例中，所述培养基进一步包含：一或多种维生素及/或激素，选自由抗坏血酸或其一衍生物、一胰岛素、一生长激素及一氢化可的松所组成的群组；及/或一或多种细胞因子及/或生长因子，选自由一血小板衍生生长因子(PDGF)、一胰岛素样生长因子(IGF)、一血管内皮生长因子(VEGF)、一肝细胞生长因子(HGF)及一白细胞介素6(IL
‑
6)所组成的群组。
[0014]在本专利技术的无血清培养基或其中使用本专利技术的无血清培养基的本专利技术的培养方法的另一优选实施例中，所述无血清培养基包含以下以作为所述一或多种细胞因子及/或生长因子：一IL
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6；一IL
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6及一IGF；一IL
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6、一IGF及一HGF；一IL
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6、一IGF、一HGF及一PDGF；一IL
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6、一IGF及一VEGF；一IL
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6、一IGF及一PDGF；一IL
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6、一PDGF及一VEGF；一IL
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6、一IGF、一PDGF及一VEGF；或一IL
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6、一IGF、一HGF、一PDGF及一VEGF。优选地，本专利技术的无血清培养基中所含的一或多种细胞因子及/或生长因子至少是FGF；FGF+IL
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6、FGF+IGF、FGF+HGF、FGF+PDGF、FGF+VEGF；更优选为至少FGF+IL
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6+IGF+HGF或FGF+IL
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6+IGF+VEGF+PDGF；最优选为FGF+IL
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6+IGF+VEGF或FGF+IL
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6+IGF+HGF，或FGF+IL
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6+IGF1+HGF+PDGF+VEGF。
[0015]在本专利技术的无血清培养基或其中使用本专利技术的无血清培养基的本专利技术的培本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种培养一牛祖细胞的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：在用于培养一牛祖细胞的一无血清培养基中培养一牛祖细胞，其中所述无血清培养基包含：一白蛋白；及一成纤维细胞生长因子。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述无血清培养基进一步包含：一或多种维生素及/或激素，选自由抗坏血酸或其一衍生物、一胰岛素、一生长激素及一氢化可的松所组成的群组；及一或多种细胞因子及/或生长因子，选自由一血小板衍生生长因子、一胰岛素样生长因子、一血管内皮生长因子、一肝细胞生长因子及一白细胞介素6所组成的群组。3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述无血清培养基包含以下以作为所述一或多种细胞因子及/或生长因子：一白细胞介素6；一白细胞介素6及一胰岛素样生长因子；一白细胞介素6、一胰岛素样生长因子及一肝细胞生长因子；一白细胞介素6、一胰岛素样生长因子、一肝细胞生长因子及一血小板衍生生长因子；一白细胞介素6、一胰岛素样生长因子及一血管内皮生长因子；一白细胞介素6、一胰岛素样生长因子及一血小板衍生生长因子；一白细胞介素6、一血小板衍生生长因子及一血管内皮生长因子；一白细胞介素6、一胰岛素样生长因子、一血小板衍生生长因子及一血管内皮生长因子；或者一白细胞介素6、一胰岛素样生长因子、一肝细胞生长因子、一血小板衍生生长因子及一血管内皮生长因子。4.如前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述无血清培养基包含：抗坏血酸或其一衍生物；一胰岛素；一生长激素；及一氢化可的松；以及一血小板衍生生长因子、一血管内皮生长因子、一肝细胞生长因子、一胰岛素样生长因子及一白细胞介素6。5.如前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述无血清培养基进一步包含：一基础培养基；一葡萄糖源；一谷氨酰胺源；一脂肪酸源；一铁源或一铁转运体；及/或亚硒酸钠。6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述基础培养基包括(i)DMEM及/或汉姆氏F12培养基，优选为DMEM及汉姆氏F12培养基，例如分别1:10至10:1的比例，更优选为分别1：1的比例，(ii)RPMI培养基及/或(iii)α
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MEM培养基。7.如权利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述脂肪酸源包括α
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亚麻酸。8.如前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述无血清培养基还包含一蛋
白质水解物，优选为一大豆蛋白质水解物。9.如前述权利要求中任一项所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：帕纳吉奥塔，
申请(专利权)人：莫萨米特有限公司，
类型：发明
国别省市：