中药有效成分对人II型肺泡细胞ACE2作用制造技术

本发明专利技术公开了中药有效成分对人II型肺泡细胞ACE2作用，包括：中药有效成分抑制人II型肺泡细胞ACE2的用途；中药有效成分抑制ACE2蛋白表达的用途；中药有效成分抑制ACE2mRNA表达的用途，中药有效成分为鞣花酸、连翘酯苷B、橙皮苷、连翘酯苷A、绿原酸、槲皮素、黄芩苷、连翘苷、苦参碱。本发明专利技术所述的中药有效成分对人II型肺泡细胞ACE2作用，通过抑制细胞增殖、ACE2蛋白合成及mRNA表达，使得2019

【技术实现步骤摘要】
中药有效成分对人II型肺泡细胞ACE2作用


[0001]本专利技术涉及病毒抑制
，特别涉及中药有效成分对人II型肺泡细胞ACE2作用。

技术介绍

[0002]新型冠状病毒肺炎，简称新冠肺炎(Corona Virus Disease 2019，COVID
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19)，显示，2019
‑
nCoV感染途径是通过其表达的S蛋白(刺突糖蛋白，Spike glycoprotein，简称S蛋白)识别人类宿主ACE2蛋白(血管紧张素转化酶2，Angiotensin Converting Enzyme 2，ACE2)从而进入细胞的。现在的新冠肺炎疫苗也是以ACE2和S蛋白为靶点进行的，从而起到预防和保护作用。
[0003]中药成分复杂多样，不像西药那样可以直接研究其在细胞水平的药理作用，若直接将复方的中药直接作用于A549细胞，其多种成分的限制，使得实验结果出现较大的误差。前期研究利用分子对接技术虚拟筛选出具有潜在靶向作用Human ACE2的抗新型冠状病毒中药小分子化合物，大大减少中药成分复杂多样带来的实验误差和试验的不确定性。MTT实验是目前用于观察体外细胞增殖抑制实验中用得较多的。其原理是利用活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性黄色的四甲基偶氮蓝(MTT)还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲并沉积在细胞中，而死细胞不产生琥珀酸脱氢酶，通过建立甲生成量与活细胞数量的关系，从而获得活细胞数量的一种测量方法，为此，我们提出中药有效成分对人II型肺泡细胞ACE2作用。

技术实现思路
/>[0004](一)解决的技术问题
[0005]针对现有技术的不足，本专利技术提供了中药有效成分对人II型肺泡细胞ACE2作用，解决上述
技术介绍
中的技术问题。
[0006](二)技术方案
[0007]为实现以上目的，本专利技术通过以下技术方案予以实现：
[0008]中药有效成分抑制人II型肺泡细胞ACE2的用途，其中，中药有效成分为鞣花酸、连翘酯苷B、橙皮苷、连翘酯苷A、绿原酸、槲皮素、黄芩苷、连翘苷、苦参碱。
[0009]中药有效成分抑制ACE2蛋白表达的用途，其中，中药有效成分为鞣花酸、连翘酯苷B、橙皮苷、连翘酯苷A、绿原酸、槲皮素、黄芩苷、连翘苷、苦参碱。
[0010]中药有效成分抑制ACE2mRNA表达的用途，其中，中药有效成分为鞣花酸、连翘酯苷B、橙皮苷、连翘酯苷A、绿原酸、槲皮素、黄芩苷、连翘苷、苦参碱。
[0011](三)有益效果
[0012]通过抑制细胞增殖、ACE2蛋白合成及mRNA表达，使得2019
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nCoV不能识别人类的宿主细胞ACE2蛋白，从而可能起到预防或治疗的作用。
附图说明
[0013]上述说明仅是本专利技术技术方案的概述，为了能够更清楚了解本专利技术的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本专利技术的较佳实施例并配合附图详细说明如后。
[0014]图1为本专利技术中药分子对A549细胞增殖的影响图；
[0015]图2为本专利技术中药分子对ACE2蛋白表达的影响图；
[0016]图3为本专利技术中药分子对ACE2mRNA基因表达的影响图。
具体实施方式
[0017]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。此外，下文为了描述方便，所引用的“上”、“下”、“左”、“右”等于附图本身的上、下、左、右等方向一致，下文中的“第一”、“第二”等为描述上加以区分，并没有其他特殊含义。
[0018]针对现有技术中存在的问题，做出如下实验验证：
[0019]1材料
[0020]1.1细胞
[0021]人非小细胞肺癌细胞A549细胞购自武汉巴菲尔生物技术服务有限公司，经STR鉴定合格。
[0022]1.2试剂
[0023]鞣花酸、连翘酯苷B、橙皮苷、连翘酯苷A、绿原酸、槲皮素、黄芩苷、连翘苷、苦参碱(纯度≥98％，货号：HY
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B0183、HY
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N0029、HY
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15337、HY
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N0028、HY
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N0055、HY
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18085、HY
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N0197、HY
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N0482、HY
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N0164，MCE公司)；噻唑蓝(MTT，货号：3580MG250，BioFroxx公司)；DMEM培养基(货号：11965
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092；Gibco公司)；胎牛血清(FBS，货号：10091
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148，Gibco公司)；青链霉素液(货号：15070
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063，Gibco公司)；EDTA胰酶(0.25％，货号：25200
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056，Gibco公司)；蛋白酶抑制剂(PMSF，货号：P105539，Aladdin公司)；磷酸酶抑制剂、RIPA裂解液、BCA蛋白浓度测定试剂盒(货号：S1873、P0013B、P0010，碧云天生物技术有限公司)；GAPDH抗体(货号：AB
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P
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R001，杭州贤至生物有限公司)；ACE2抗体(货号：66699
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Ig，武汉三鹰生物技术有限公司)；HRP标记羊抗兔二抗(货号：BA1054，武汉博士德生物工程有限公司)；ECL试剂(货号：P1050，北京普利莱基因技术有限公司)；Trizol(货号：15596
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026，Ambion公司)；HiScript II Q Select RT SuperMix for qPCR(+gDNA wiper)逆转录试剂盒(货号：R233
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01，Vazyme公司)；SYBR Green Master Mix(货号：Q111
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02，Vazyme公司)。
[0024]1.3仪器
[0025]超净工作台(型号：SW
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CJ
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1FD，苏州集团安泰空气技术有限公司)；CO2恒温培养箱(型号：MCO
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15AC，Sanyo公司)；倒置显微镜(型号：ECLIPSE Ts2，Nikon公司)；酶标仪(型号：3，Molecular Devices公司)；电泳仪、转膜仪(型号：DYY
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7C、DYCZ
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40，北京六一仪器厂)；实时荧光定量PCR仪(型号：QuantStudio 6，ABI公司)；电子天平(型号：CPA，北京赛多利斯仪器系统有限公司)；离心机(型号：HI650，湖南湘仪实验室仪器开发有限公司)。
[0026]2方法
[0027]2.1细胞培养
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.中药有效成分抑制人II型肺泡细胞ACE2的用途。2.中药有效成分抑制ACE2蛋白表达的用途。3.中药有效成分抑制ACE2mRNA表达的用途。4.根据权利要求1

【专利技术属性】
技术研发人员：庞晓军，
申请(专利权)人：庞晓军，
类型：发明
国别省市：