基于病理形态学特征鉴定KA和cSCC的标志物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种基于病理形态学特征鉴定KA和cSCC的标志物及其应用，属于生物技术领域。本发明专利技术通过对42例KA和31例cSCC进行临床及组织病理资料分析、研究，首次发现基于病理形态学特征鉴定KA和cSCC的标志物——C

【技术实现步骤摘要】
基于病理形态学特征鉴定KA和cSCC的标志物及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种基于病理形态学特征鉴定KA和cSCC的标志物及其应用。

技术介绍

[0002]角化棘皮瘤（Keratoacanthoma，KA）是一种快速生长的鳞状上皮增殖性皮肤肿瘤，其具有自发消退现象，多见于老年人，主要发生于日光暴露部位，特别是面部较为常见。根据KA的临床变现，KA的生物学发展可以分为增殖期，稳定期，消退期，部分具有进展为鳞状细胞癌（Cutaneous Squamous Cell Carcinoma, cSCC）倾向以及完全进展为鳞状细胞癌的角化棘皮瘤。目前KA的皮肤镜检查与cSCC有一些共同特征，因此不能用于明确区分这两种实体肿瘤，组织病理诊断仍是最主要的方法。
[0003]稳定期的角化棘皮瘤多呈现为火山口状结构。分化良好的鳞状小叶/毛囊分化，伴有围绕着中心角蛋白核心的层状角化。角化周围两侧表皮呈现唇型，癌变瘤体的基底部及侧缘鳞状细胞异型性增生，呈浸润性生长，可见病理性核分裂像，KA临床形态学与组织病理学与cSCC十分相似。两者较难区分。部分学者建议将KA归属于cSCC之中。但目前对于角化棘皮瘤的定义仍极具争议，KA与cSCC间存在基因组学差异，并且预后、转移率的不同均表明KA和cSCC不属于同一类划分。与此同时，报告估计KA的发病率为每10万人100至150例；然而由于将KA误诊为cSCC、漏报或诊断前KA已自发消退，所以KA的发病率可能被严重低估。因此两者的鉴别诊断至关重要，但目前临床病理中仍缺乏特异性高的鉴别标记物，也为治疗的精准性增加了难度。

技术实现思路

[0004]针对上述问题，本专利技术提供一种基于病理形态学特征鉴定KA和cSCC的标志物及其应用。本专利技术首次公开C
‑
Myc在KA中的表达倾向于肿瘤浸润前端细胞核阳性，而cSCC倾向于弥漫细胞核阳性，这一特殊的免疫组织化学表达模式有助于较好地区分病理形态学通常非常相似的KA与cSCC。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案。
[0006]本专利技术提供了一种检测组织中C
‑
Myc病理形态特征的试剂在鉴别KA和cSCC的产品中的应用。
[0007]进一步地，所述的鉴别KA和cSCC的产品以C
‑
Myc基因作为标记物。
[0008]进一步地，所属产品通过免疫组织化学染色检测组织中C
‑
Myc病理形态特征。
[0009]进一步地，所述C
‑
Myc病理形态特征为C
‑
Myc在KA中的表达倾向于肿瘤浸润前端细胞核阳性，在cSCC倾向于弥漫细胞核阳性。
[0010]进一步地，所述产品中含有C
‑
Myc特异性结合的抗体。
[0011]进一步地，所述产品为芯片、制剂或试剂盒。
[0012]本专利技术还提供了一种基于病理形态学特征鉴定KA和cSCC的方法，其特征在于，所
述方法为采用免疫组织化学染色鉴定C
‑
Myc在KA或cSCC细胞中的病理形态学特征。
[0013]进一步地，所述C
‑
Myc在KA或cSCC细胞中的病理形态学特征为C
‑
Myc在KA中的表达倾向于肿瘤浸润前端细胞核阳性，在cSCC倾向于弥漫细胞核阳性。
[0014]与现有技术相比本专利技术的有益效果。
[0015]本专利技术首次提出基于病理形态学特征鉴定KA和cSCC的标志物——C
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Myc，通过免疫组织化学染色检测组织中C
‑
Myc病理形态特征，C
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Myc在KA中的表达倾向于肿瘤浸润前端细胞核阳性，而cSCC倾向于弥漫细胞核阳性，这一特殊的免疫组织化学表达模式有助于较好地区分病理形态学通常非常相似的KA与cSCC，具有重大的临床意义。
[0016]本专利技术提出关于C
‑
Myc在对于病理形态学通常非常相似的KA和cSCC中的鉴别诊断更倾向于表达模式的直接判读，而不强调表达强弱、及软件辅助分析，具有极高的临床应用价值。
附图说明
[0017]图1. C
‑
Myc在角化棘皮瘤中的表达模式：主要表现为肿瘤浸润前端细胞核阳性（箭头）。
[0018]图2. C
‑
Myc在皮肤鳞状细胞癌中的表达模式：主要表现为肿瘤区域弥漫细胞核阳性。
具体实施方式
[0019]下面结合具体实施例对本专利技术做详细的说明。以下实施例将有助于对本专利技术的了解，但这些实施例仅为了对本专利技术加以说明，本专利技术并不限于这些内容。在实施例中的操作方法均为本
常规操作方法。
[0020]实施例1。
[0021]研究对象：收集中国医科大学附属第一医院2016年01月至2021年05月手术切除的皮肤角化棘皮瘤组织42例，皮肤高分化鳞状细胞癌30例。72例患者中，男38例，女24例，患者术前未进行放、化疗及生物治疗。本实验获得患者知情同意，符合赫尔辛基宣言，通过中国医科大学附属第一医院伦理委员会审批。
[0022]免疫组织化学：组织石蜡切片于65℃，烤片12h。按照浸蜡脱蜡透明剂（I）15min、浸蜡脱蜡透明剂（II） 15min、100%乙醇（I） 5min、100%乙醇（II） 5min、95%乙醇 5min、85%乙醇 5min 和75%乙醇 5min常规浸蜡脱蜡，梯度酒精脱蜡至水。抗原修复：按照抗体说明书的建议选择柠檬酸钠抗原修复液或EDTA修复液。高压锅内放入装有修复液的染缸，水沸后，放入切片。修复液应没过切片上的组织，避免干片。高压锅喷气后开始计时，约1.5
‑
2min，冰水中冷却10min，立即PBS洗3次，每次5min。3% H2O2滴加在组织切片上，室温孵育15min，PBS洗3次，每次5min。滴加10%山羊血清封闭液，室温静置30min，倾去勿洗。利用含1%BSA的PBS稀释一抗兔C
‑
Myc单克隆抗体(cat.No:GT220607, Gene Tech)，比例参照具体的抗体说明书。免疫组画笔绕组织外缘画圈，滴加50μL稀释好的一抗于组织切片上，避免液体外溢。切片放置于湿盒，4℃过夜。取出过夜湿盒，37℃复温1h，PBS洗3次，每次5min。滴加50μL二抗，37℃孵育25min，PBS洗3次，每次5min。滴加50μL链霉素
‑
POD，37℃孵育25min，PBS洗3次，每次5min。DAB显色：20
×
DAB显色A液和B液混合，去离子水稀释成1
×
工作液。镜下DAB显色，显色时间
约1
‑
2min，立即蒸馏水终止显色。自来水冲洗10min。切片上滴加适量苏木精复染30s，立即蒸馏水终止，自来水冲洗10min。最后，逆浓度梯度乙醇脱水，透明剂透明。中性树脂封片，显微镜下拍照，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测组织中C
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Myc病理形态特征的试剂在鉴别KA和cSCC的产品中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的鉴别KA和cSCC的产品以C
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Myc基因作为标记物。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所属产品通过免疫组织化学染色检测组织中C
‑
Myc病理形态特征。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述C
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Myc病理形态特征为C
‑
Myc在KA中的表达倾向于肿瘤浸润前端细胞核阳性，在cSCC倾向于弥漫细胞核阳性。5.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：范馨允，黄波，齐瑞群，张涛，牛雪丽，
申请(专利权)人：中国医科大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：