具有增强的MS信号的聚糖和其它生物分子的快速荧光标记制造技术

本发明专利技术涉及具有增强的MS信号的聚糖和其它生物分子的快速荧光标记。本发明专利技术教导和描述了含有具有与胺反应的活性官能团的MS活性、荧光分子的试剂，其可用于标记生物分子如N

【技术实现步骤摘要】
具有增强的MS信号的聚糖和其它生物分子的快速荧光标记
[0001]本申请为一项专利技术专利申请的分案申请，其母案的申请日为2015年8月13日、申请号为201510768362.X、专利技术名称为“具有增强的MS信号的聚糖和其它生物分子的快速荧光标记”。
[0002]相关申请的交叉引用
[0003]本申请是美国专利申请No.14/193,418的部分连续申请，该申请是2014年2月28日提交的国际申请No.PCT/US2012/057996的连续申请，该申请要求享有2011年9月28日提交的临时申请No.61/540,306的优先权，本申请也是美国专利申请No.14/342,131的部分连续申请，该申请是2014年2月28日提交的国际申请No.PCT/US2012/057996的国家阶段，该申请要求享有临时申请No.61/540,306的权益。
[0004]关于联邦政府资助的研究或开发的声明
[0005]无。
[0006]合作研究协议各方的名称
[0007]无。
[0008]专利技术背景
[0009]N
‑
聚糖的荧光标记有益于检测聚糖，因为其改进检测的灵敏性和选择性以及聚糖的色谱性能。氨基酸分析是蛋白质研究中的基本过程并且在必须监测蛋白质的糖基化特征以确保治疗产品的一致性时对临床化学家和制药商特别重要。在用具有荧光部分的试剂衍生时，只能评估该化合物的官能团。然后需要质谱法(“MS”)识别特定化合物。
[0010]MS分析在聚糖与氨基酸分析和蛋白质组学方面已经达到高发展程度。但是，将大多数胺官能化所需的反应时间缓慢。现有技术状况利用(1)快速反应并具有良好荧光信号但差MS信号，或(2)极慢反应并产生良好MS/荧光信号的标记分子。但是，由于荧光检测是测定在数量上存在多少的非常有用的工具，MS和荧光检测的组合是合意的。另一方面，MS用于测定分子构成如何。
[0011]因此需要与生物分子快速反应并提供强质谱和荧光信号的分子。
[0012]专利技术概述
[0013]在本文中描述了可用于聚糖，如N
‑
连接聚糖和其它生物分子，包括但不限于蛋白质、肽和氨基酸的快速荧光标记的MS活性化合物。这些MS活性的荧光化合物具有三种功能组分：(a)叔氨基或其它MS活性原子；(b)高荧光部分，和(c)与胺快速反应的官能团，如异氰酸酯或琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯(succidimidylcarbamate)。该反应性官能团提供所需生物分子的快速标记，荧光部分提供强荧光信号。叔氨基取代基提供强MS信号。
[0014]特别地，本专利技术涉及具有本文所述的多种化学式的化合物。每个化合物均能用作快速荧光标记生物分子并增强MS信号传导的试剂。例如，MS活性、快速荧光标记化合物可以具有结构式IV：
[0015][0016]或其盐或溶剂化物，其中
[0017]X＝C或N；
[0018]R1独立地选自O＝C＝N
‑
、
[0019]R2独立地选自
‑
H、
‑
C1‑
C8烷基、
‑
C1‑
C8环烷基、卤素、二烷基氨基、CH2‑
二烷基氨基、氨基羰基、烷氧基羰基或烷氧基，但不是Cl或O＝C＝N
‑
；且
[0020]R3和R4独立地选自
‑
H、烷基、烷基氨基、烷基磺酸、烷基膦酸，其中R3或R4是烷基氨基、烷基膦酸或烷基磺酸，且其中R3和R4可与它们所连接的氮一起形成任选取代的5
‑
至8
‑
元饱和或部分不饱和环，但在R1是O＝C＝N
‑
时除外。
[0021]此外，MS活性、快速荧光标记化合物可以具有结构式V：
[0022][0023]或其盐或溶剂化物，其中
[0024]m＝0
‑
9；
[0025]n＝0
‑
9；
[0026]X＝C或N；
[0027]R1独立地选自O＝C＝N
‑
、S＝C＝N
‑
、
[0028]R2独立地选自亚甲基、取代氮、氧、羰基、酰胺、酯、硫、亚砜或砜；
[0029]R3和R4独立地选自
‑
H、烷基、烷基氨基、烷基磺酸、烷基膦酸，其中R3或R4是烷基氨基、烷基膦酸或烷基磺酸，且其中R3和R4可与它们所连接的氮一起形成任选取代的5
‑
至8
‑
元饱和或部分不饱和环；且
[0030]R5独立地选自
‑
H、
‑
C1‑
C8烷基、
‑
C1‑
C8环烷基、卤素、二烷基氨基、CH2‑
二烷基氨基、氨基羰基、烷氧基羰基或烷氧基，但不是Cl或O＝C＝N
‑
，并在R1是S＝C＝N时除外。
[0031]具有本文所述的化学式的化合物具有光学中心，因此可以出现不同的对映异构体和非对映异构体结构。本文描述的本专利技术包含具有此类各化学式的化合物的所有对映异构体、非对映异构体和其他立体异构体，以及外消旋化合物和外消旋混合物以及其立体异构体的其他混合物。
[0032]附图简述
[0033]图1显示用(4
‑
((2
‑
(二乙基氨基)乙基)氨基甲酰基)苯基)氨基甲酸2，5
‑
二氧代吡咯烷
‑1‑
基酯标记的由0.8μg Herceptin IgG释放的聚糖G0F、G1F和G2F的荧光和MS检测。
[0034]图2显示用(4
‑
((2
‑
(二乙基氨基)乙基)氨基甲酰基)苯基)氨基甲酸2，5
‑
二氧代吡咯烷
‑1‑
基酯标记的由0.8μg Herceptin IgG释放的聚糖G2FBS2的荧光和MS检测。
[0035]详细描述
[0036]本文提供可用于快速荧光标记聚糖，例如N
‑
连接聚糖和其他生物分子，包括但不限于蛋白质、肽和氨基酸，并增强MS信号传导的新化合物。这些化合物用于分析样品中的聚糖和/或其他生物分子。为了分析生物分子，该分子用本文所述化合物快速标记，然后施以液相色谱、质谱和荧光检测。
[0037]本文所用的术语“烷氧基”在单独或组合时是指烷基醚基团，其中术语烷基如下文定义。合适的烷基醚基团的实例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基等。
[0038]本文所用的术语“烷基”在单独或组合时是指含有1至20(包括20)，优选1至10，更优选1至6个碳原子的直链或支链烷基。烷基可任选如本文中定义被取代。烷基的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、己基、辛基、壬基等。本文中单独或组合使用的术语“亚烷基”是指衍生自在两个或更多个位置连本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.具有以下结构式的化合物：。2.具有以下结构式的化合物：。3.具有式IV
‑
A的化合物：或其盐或溶剂化物，其中X=C或N；R1为O=C=N
‑ꢀ
或R
2 独立地选自
‑
H、
‑
C1‑
C
8 烷基、
‑
C1‑
C
8 环烷基、卤素、二烷基氨基、CH2‑
二烷基氨基、氨基羰基、烷氧基羰基或烷氧基，但不是Cl或O=C=N
‑
；和R3和R
4 独立地选自
‑
H、烷基、烷基氨基、烷基磺酸、烷基膦酸，其中R3或R
4 之一为烷基氨基、烷基膦酸或烷基磺酸。4.具有式V
‑
A的化合物：或其盐或溶剂化物，其中m=0
‑
9；n=0
‑
9；X=C或NR
1 为O=C=N
‑
、S=C=N
‑
或
R
2 独立地选自亚甲基、取代的氮、氧、羰基、酰胺、酯、硫、亚砜或砜；R3和R
4 独立地选自
‑
H、烷基、烷基氨基、烷基磺酸、烷基膦酸，其中R3或R4之一为烷基氨基、烷基膦酸或烷基磺酸；和R
5 独立地选自
‑
H、
‑
C1‑
C
8 烷基、
‑
C
1 ‑
C
8 环烷基、卤素、二烷基氨基、CH2‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：DW布劳斯米歇，俞映清，M劳伯，
申请(专利权)人：沃特世科技公司，
类型：发明
国别省市：