分离外泌体的方法技术

本发明专利技术涉及一种分离外泌体的方法。具体地，本发明专利技术涉及一种方法，所述方法包括以下步骤：提供包括外泌体的样品；鉴定所述外泌体上的细胞表面多肽；以及使用所述外泌体上的所述细胞表面多肽分离所述外泌体。可以研究通过本发明专利技术的方法分离的外泌体，以用于鉴定生物标志物、了解生物功能和疾病，并找到用治疗剂靶向它们的方法。它们的方法。它们的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】分离外泌体的方法

技术介绍

[0001]外泌体是由多种健康的和病变的细胞类型主动分泌的一类细胞源性小细胞外膜囊泡(直径50
‑
100nm)。外泌体可以在正常和病理状态下通过穿梭蛋白质、mRNA和微RNA来介导细胞、组织和器官水平的微通讯。
[0002]现在已经认识到外泌体介导体内不同细胞类型之间的细胞间通讯，从而影响正常和病理状态。外泌体中的几种生物实体诸如蛋白质、mRNA和微RNA，与大多数人类恶性肿瘤的发病机制密切相关，并且它们可以充当用于疾病诊断、预后和治疗的宝贵生物标志物。许多不同的细胞类型和组织都分泌外泌体，并且外泌体的内容物和特征因细胞类型或来源组织而异。因此，外泌体的功能和它们与给定病理的相关性可能因来源组织而异。为此，分离外泌体的组织特异性亚型变得越来越重要。
[0003]因此，外泌体纯化和分析是快速发展的研究领域，但是，尽管在外泌体纯化和分析方法方面取得了一些进展，但研究仍然面临一些挑战。
[0004]为了研究外泌体以鉴定生物标志物、了解生物学功能和疾病并找到用治疗剂靶向它们的方法，首先需要从存在于血液和其他生物流体中的大量其他分子和结构中分离这些微观结构。
[0005]因此，有必要提供一种分离外泌体的方法。

技术实现思路

[0006]根据本专利技术的第一方面，提供了一种分离外泌体的方法，所述方法包括以下步骤：
[0007](a)提供包括外泌体的样品；
[0008](b)鉴定外泌体上的细胞表面多肽；以及
[0009](c)使用外泌体上的细胞表面多肽分离外泌体；
[0010]其中细胞表面多肽是抗肌萎缩蛋白聚糖(DAG)。
[0011]任选地，所述方法包括以下步骤：
[0012](a)提供包括外泌体的样品；
[0013](b)鉴定外泌体上的细胞表面多肽；
[0014](c)为细胞表面多肽提供结合配偶体；
[0015](d)使结合配偶体与样品接触；
[0016](e)分离结合配偶体，以及
[0017](f)分离外泌体；
[0018]其中细胞表面多肽是抗肌萎缩蛋白聚糖(DAG)。
[0019]任选地，样品是生物样品。进一步任选地，样品是来自人的生物样品。
[0020]任选地，样品是生物流体样品。进一步任选地，样品是来自人的生物流体样品。
[0021]任选地，生物流体样品选自脑脊液(CSF)、腹膜液、胸膜液、羊水、间质液、血管内液、透细胞液和细胞内液。任选地，来自人的生物流体样品选自脑脊液(CSF)、腹膜液、胸膜液、羊水、间质液、血管内液、透细胞液和细胞内液。
[0022]任选地，样品是血液样品。进一步任选地，样品是来自人的血液样品。任选地，样品是全血样品。进一步任选地，样品是来自人的全血样品。任选地，样品是血清样品。进一步任选地，样品是来自人的血清样品。优选地，样品是来自人的血清样品。
[0023]任选地，样品是生物组织样品。进一步任选地，样品是来自人的生物组织样品。任选地，样品包含生物组织。进一步任选地，样品包含来自人的生物组织。
[0024]任选地，样品是生物软组织样品。进一步任选地，样品是来自人的生物软组织样品。任选地，样品包含生物软组织。进一步任选地，样品包含来自人的生物软组织。
[0025]任选地，生物组织选自内胚层组织、中胚层组织和外胚层组织。任选地，样品包含选自内胚层组织、中胚层组织和外胚层组织的生物组织。进一步任选地，样品包含来自人的选自内胚层组织、中胚层组织和外胚层组织的生物组织。
[0026]任选地，中胚层组织是轴旁中胚层组织。
[0027]任选地，中胚层组织是肌组织。
[0028]任选地，肌组织选自骨骼(横纹)肌组织；平滑(非横纹)肌组织；和心脏(半横纹)肌组织。
[0029]任选地，肌组织包含选自骨骼(横纹)肌细胞；平滑(非横纹)肌细胞；和心脏(半横纹)肌细胞的细胞。
[0030]任选地，肌组织包含选自骨骼(横纹)成肌细胞；平滑(非横纹)成肌细胞；和心脏(半横纹)成肌细胞的细胞。
[0031]任选地，肌组织包含选自骨骼(横纹)肌管；平滑(非横纹)肌管；和心脏(半横纹)肌管的细胞。优选地，肌组织包含平滑(无横纹)肌管。
[0032]任选地，细胞表面多肽是人抗肌萎缩蛋白聚糖(DAG)。
[0033]任选地，细胞表面多肽是由UniProtKB登录号Q14118定义的人抗肌萎缩蛋白聚糖(DAG)。
[0034]任选地，细胞表面多肽选自α
‑
抗肌萎缩蛋白聚糖和β
‑
抗肌萎缩蛋白聚糖。
[0035]任选地，细胞表面多肽选自人α
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抗肌萎缩蛋白聚糖和人β
‑
抗肌萎缩蛋白聚糖。优选地，细胞表面多肽是人α
‑
抗肌萎缩蛋白聚糖。
[0036]任选地，细胞表面多肽的结合配偶体能够结合细胞表面多肽。
[0037]任选地，细胞表面多肽的结合配偶体是能够结合细胞表面多肽的抗体。
[0038]任选地，抗体选自能够结合细胞表面多肽的单克隆抗体和能够结合细胞表面多肽的多克隆抗体。优选地，抗体是能够结合细胞表面多肽的单克隆抗体。
[0039]任选地，抗体是IgG同种型。进一步任选地，抗体是IgG2同种型。更进一步任选地，抗体是IgG2a同种型。更进一步任选地，抗体是MIgG2a同种型。优选地，抗体是MIgG2a同种型。
[0040]任选地，细胞表面多肽的结合配偶体包含能够结合细胞表面多肽的抗体和固体支持物。
[0041]任选地，固体支持物是珠。
[0042]任选地，固体支持物是亲水性珠。
[0043]任选地或另外地，固体支持物是pH中性珠。
[0044]任选地，固体支持物是环氧树脂珠。进一步任选地，固体支持物是环氧树脂包被的
珠。更进一步任选地，固体支持物是具有环氧基团的珠。
[0045]任选地，固体支持物是磁珠。进一步任选地，固体支持物是顺磁珠。更进一步任选地，固体支持物是超顺磁珠。优选地，固体支持物是超顺磁珠。
[0046]任选地，珠具有1.0
‑
4.5μm的直径。优选地，珠具有2.8μm的直径。
附图说明
[0047]现将参考附图来描述本专利技术的实施方案，其中：
[0048]图1是来自健康人类受试者的培养以形成分化的肌管的成肌细胞的培养基的蛋白印迹分析；
[0049]图2是来自血清的细胞培养外泌体免疫捕获的蛋白印迹分析；
[0050]图3A是分离肌肉外泌体的示意图；
[0051]图3B是被能够结合细胞表面多肽(肌膜蛋白)的抗体沉降的循环囊泡的蛋白印迹分析；并且
[0052]图4是来自健康受试者(H)的循环肌肉外泌体免疫捕获的蛋白印迹分析。
[0053]材料和方法
[0054]参与者和伦理批准
[0055]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种分离外泌体的方法，所述方法包括以下步骤：(a)提供包括外泌体的样品；(b)鉴定所述外泌体上的细胞表面多肽；(c)为所述细胞表面多肽提供结合配偶体；(d)使所述结合配偶体与所述样品接触；(e)分离所述结合配偶体，以及(f)分离所述外泌体；其中所述细胞表面多肽是抗肌萎缩蛋白聚糖(DAG)。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述样品是生物流体样品。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述样品是血清样品。4.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的方法，其中所述样品包含生物组织。5.根据权利要求1
‑
4中任一项所述的方法，其中所述样品包含选自内胚层组织、中胚层组织和外胚层组织的生物组织。6.根据权利要求5所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：S，
申请(专利权)人：阿尔斯特大学，
类型：发明
国别省市：