一种植物甾醇月桂酸酯辅酶Q制造技术

本发明专利技术公开了一种植物甾醇月桂酸酯辅酶Q

【技术实现步骤摘要】
一种植物甾醇月桂酸酯辅酶Q
10
复合脂质体的制备工艺


[0001]本专利技术涉及复合脂质体制备工艺
，尤其涉及一种植物甾醇月桂酸酯辅酶Q
10
复合脂质体的制备工艺。

技术介绍

[0002]植物甾醇月桂酸酯是典型的脂溶性物质，天然存在于母乳、椰子油之中，具有显著的降血液中胆固醇的功能；辅酶Q
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又被称为泛醌，分子式C
59
H
90
O4，是一种重要的脂溶性抗氧化物质。随着科学技术的不断发展，对辅酶Q
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的研究不断深入，发现该物质在众多领域内都有药用价值，。由辅酶Q
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的结构式可知，辅酶Q
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分子结构中含有不饱和键，因此很不稳定，容易被空气中的氧气氧化，见光也极不稳定，易溶于正己烷、氯仿等弱极性的有机溶剂中，水溶性差。脂质体作为极具潜力的药物载体，脂质体作为药物的载体已经取得了很多进展，尤其是在抗癌药物的应用上，能提高其治疗活性。由于脂质体具有很好的靶向性和缓释性，用脂质体包埋药物可以在一定的程度上增加药物的含量，而且毒副作用也很小，可以精准的作用于靶点；利用脂质体对辅酶Q
10
包埋，能有效改善Co Q
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的稳定性、水分散性，提高生物利用率
[0003]现有技术制备得到的脂质体，脂质体的结构分散不均匀，而且脂质体的表面质量较差，从而影响包封率，因此，设计一种植物甾醇月桂酸酯辅酶Q
10
复合脂质体的制备工艺是很有必要的。

技术实现思路

[0004]本专利技术解决的问题在于提供一种植物甾醇月桂酸酯辅酶Q
10
复合脂质体的制备工艺，通过用高效液相法对辅酶Q
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的含量测定，通过浓度与峰面积之间的关系确立了辅酶Q
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标准曲线和对应的关系式；通过对植物甾醇月桂酸酯、辅酶Q
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的量、吐温的量三个单因素实验，建立了三因素三水平的响应面设计优化方案，确立了植物甾醇月桂酸酯辅酶Q
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复合脂质体的制备工艺条件，其次对稳定性进行测试，盐溶液的稳定性、酸碱溶液的稳定性、植物甾醇月桂酸酯的量，吐温的量，辅酶Q
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的量制备得到的复合脂质体呈现球形，表面光滑，没有明显的凹陷；复合脂质体具有均匀的结构分布以及良好的表面质量，并具有良好的包封率。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：
[0006]一种植物甾醇月桂酸酯辅酶Q
10
复合脂质体的制备工艺，包括以下步骤：
[0007]步骤S1：磷酸盐缓冲溶液的配置；
[0008]用电子天平精确称取4.7991g磷酸氢二钠、1.0297g的磷酸二氢钠，8.500g的NaCl置于1L的烧杯用超纯水溶解，用1mol/L的盐酸溶液和1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH,定容至1L，得到pH值为7.4的磷酸盐缓冲液；
[0009]步骤S2：辅酶Q
10
标准曲线的绘制；
[0010]用电子天平准确称取0.0030g的辅酶Q
10
的标准品，用无水乙醇超声溶解，并定容于
25mL容量瓶中；分别移取10mL、5mL、4mL、2mL、1mL、0.5mL的辅酶Q
10
标准溶液，用无水乙醇定容于10mL的容量瓶中，得到浓度为120μg/mL、60μg/mL、24μg/mL、12μg/mL、6μg/mL的辅酶Q
10
溶液，采用高效液相色谱测量峰面积，根据不同浓度辅酶Q
10
溶液的峰面积绘制峰面积与浓度关系的标准工作曲线；
[0011]步骤S3：通过高效液相法测定辅酶Q
10
的包封率及保留率；
[0012]高效液相色谱条件：C18柱，3.9nm
×
150nm的不锈钢色谱柱，直径为4μm；流动相为甲醇：正己烷＝4：1；柱温30℃；流速为0.8ml/min；检测波长275nm；进样量10μL，
[0013][0014][0015]包埋辅酶Q
10
量＝辅酶Q
10
总含量
‑
游离辅酶Q
10
的量；
[0016]步骤S4：复合脂质体的制备；
[0017]利用电子天平准确称取40mg吐温
‑
80、80mg大豆磷脂、2mg月桂酸酯、8mg辅酶Q
10
于100mL圆底烧瓶，加入10mL有机溶剂溶解，放置30分钟以上后进行减压旋转蒸发，除去有机溶剂，旋蒸过程中控制真空泵压力，0.02MPa条件下10min，0.04MPa条件下10min，0.05MPa条件下10min，压力保持30min,在瓶壁上形成均匀的薄膜，加入10mL pH＝7.4的磷酸盐缓冲溶液，再次控制压力为0.02MPa旋蒸10min，把薄膜完全洗脱下来，用超声乳化分散器在冰水浴环境下探针式超声8min，超声功率：200w；频率：1s开/1s关，得到澄清透亮的溶液，置于冰箱冷藏备用；
[0018]步骤S5：复合脂质体的表征包括包封率的测定和粒径、多相分散系数、电位的测定；
[0019]步骤S6：复合脂质体的制备条件优化以及影响因素的考察：影响单因素的实验包括植物甾醇月桂酸酯的量、辅酶Q
10
的量、吐温
‑
80的量、缓冲溶液的pH；
[0020]步骤S7：响应面法优化实验：结合单因素试验，以辅酶Q
10
的包封率为重要参考指标，设计三因素三水平共十七组实验，植物甾醇月桂酸酯的量为因素A，辅酶Q
10
的量为因素B，吐温
‑
80的量为因素C，采用正交设计优选植物甾醇月桂酸酯辅酶Q
10
复合脂质体的制备条件处方，通过响应面实验设计方案及结果，并进行多元回归方程拟合和方差分析，得到自变量的二次多项回归方程：
[0021]Y＝93.7
‑
1.12A
‑
3.19B+5.54C+1.65AB+0.9AC+1.83BC
‑
3.84A2
‑
1.11B2
‑
3.91C2
[0022]响应面实验模型方差分析结果得出，回归模型极显著，P<0.0001；模型R2＝0.9819，表明实际结果与预测值一致，模型调整的相关系数R2＝0.9586，表明该模型中响应值的变化为95.86％由所选的自变量决定，进一步说明该模型能够准确预测出响应值与自变量之间的关系；P
失拟项
＝0.0526，不显著，表明模型误差较小，可用于预测实验结果；综上所述，该模型拟合程度良好，可以用于植物甾醇月桂酸酯辅酶Q
10
复合脂质体的制备工艺优化；
[0023]一次项B、C，二次项A2、C2对于复合脂质本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种植物甾醇月桂酸酯辅酶Q
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复合脂质体的制备工艺，其特征在于，包括以下步骤：步骤S1：磷酸盐缓冲溶液的配置；用电子天平精确称取4.7991g磷酸氢二钠、1.0297g的磷酸二氢钠，8.500g的NaCl置于1L的烧杯用超纯水溶解，用1mol/L的盐酸溶液和1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH,定容至1L，得到pH值为7.4的磷酸盐缓冲液；步骤S2：辅酶Q
10
标准曲线的绘制；用电子天平准确称取0.0030g的辅酶Q
10
的标准品，用无水乙醇超声溶解，并定容于25mL容量瓶中；分别移取10mL、5mL、4mL、2mL、1mL、0.5mL的辅酶Q
10
标准溶液，用无水乙醇定容于10mL的容量瓶中，得到浓度为120μg/mL、60μg/mL、24μg/mL、12μg/mL、6μg/mL的辅酶Q
10
溶液，采用高效液相色谱测量峰面积，根据不同浓度辅酶Q
10
溶液的峰面积绘制峰面积与浓度关系的标准工作曲线；步骤S3：通过高效液相法测定辅酶Q
10
的包封率及保留率；高效液相色谱条件：C18柱，3.9nm
×
150nm的不锈钢色谱柱，直径为4μm；流动相为甲醇：正己烷＝4：1；柱温30℃；流速为0.8ml/min；检测波长275nm；进样量10μL，正己烷＝4：1；柱温30℃；流速为0.8ml/min；检测波长275nm；进样量10μL，包埋辅酶Q
10
量＝辅酶Q
10
总含量
‑
游离辅酶Q
10
的量；步骤S4：复合脂质体的制备；利用电子天平准确称取40mg吐温
‑
80、80mg大豆磷脂、2mg月桂酸酯、8mg辅酶Q
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于100mL圆底烧瓶，加入10mL有机溶剂溶解，放置30分钟以上后进行减压旋转蒸发，除去有机溶剂，旋蒸过程中控制真空泵压力，0.02MPa条件下10min，0.04MPa条件下10min，0.05MPa条件下10min，压力保持30min,在瓶壁上形成均匀的薄膜，加入10mL pH＝7.4的磷酸盐缓冲溶液，再次控制压力为0.02MPa旋蒸10min，把薄膜完全洗脱下来，用超声乳化分散器在冰水浴环境下探针式超声8min，超声功率：200w；频率：1s开/1s关，得到澄清透亮的溶液，置于冰箱冷藏备用；步骤S5：复合脂质体的表征包括包封率的测定和粒径、多相分散系数、电位的测定；步骤S6：复合脂质体的制备条件优化以及影响因素的考察：影响单因素的实验包括植物甾醇月桂酸酯的量、辅酶Q
10
的量、吐温
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80的量、缓冲溶液的pH；步骤S7：响应面法优化实验：结合单因素试验，以辅酶Q
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的包封率为重要参考指标，设计三因素三水平共十七组实验，植物甾醇月桂酸酯的量为因素A，辅酶Q
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的量为因素B，吐温
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80的量为因素C，采用正交设计优选植物甾醇月桂酸酯辅酶Q
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复合脂质体的制备条件处方，通过响应面实验设计方案及结果，并进行多元回归方程拟合和方差分析，得到自变量的二次多项回归方程：Y＝93.7
‑
1.12A
‑
3.19B+5.54C+1.65AB+0.9AC+1.83BC
‑
3.84A2
‑
1.11B2
‑
3.91C2响应面实验模型方差分析结果得出，回归模型极显著，P<0.0001；模型R2＝0.9819，表
明实际结果与预测值一致，模型调整的相关系数R2＝0.9586，表明该模型中响应值的变化为95.86％由所选的自变量决定，进一步说明该模型能够准确预测出响应值与自变量之间的关系；P
失拟项
＝0.0526，不显著，表明模型误差较小，可用于预测实验结果；综上所述，该模型拟合程度良好，可以用于植物甾醇月桂酸酯辅酶Q
10
复合脂质体的制备工艺优化；一次项B、C，二次项A2、C2对于复合脂质体辅酶Q
10
包埋率的影响为极显著，P<0.01，一次项A；交互项AB、BC影响显著，p<0.05；步骤S8：根据模型回归方程可知复合脂质体制备的优化工艺条件：月桂酸酯2mg，辅酶Q
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为8mg，吐温
‑
80为39mg，大豆磷脂80mg，PBS缓冲溶液的体积为10mL，水浴温度为50℃，理论的包封率为95.9％；步骤S9：制备验证。2.根据权利要求1所述的植物甾醇月桂酸酯辅酶Q
10
复合脂质体的制备工艺，其特征在于，所述步骤S4中，有机溶剂选用氯仿：甲醇＝2：1的比例配制。3.根据权利要求1所述的植物甾醇月桂酸酯辅酶Q
10
复合脂质体的制备工艺，其特征在于，所述步骤S5中，包封率的测定包括：吸取1mL制备好的脂质体于试管中，加入3mL的正己烷，用Vortex
‑
1漩涡振荡机振荡3min，然后放入离心机中离心，设置参数3000r/min，温度4
‑
6℃，离心时间5min，离心完之后吸取上层清液于50mL烧瓶中，重复上述步骤两次，将两次吸取的上层清液合并在一起，用旋转蒸发仪旋干，然后用无水乙醇冲洗下来，定容于5mL棕色容量瓶中，之后用1mL的注射器吸取定容完的液体，用0.22μm的滤头过滤于棕色液相小瓶待测；粒径、多相分散系数、电位的测定包括：平均粒径的测定：运用激光纳米粒度仪检测脂质体的平均粒径及多相分散系数；设置参数为温度25℃，平衡稳定时间20s，运行次数14次,间隔时间1s，稳定时间2s；将脂质体样品用超纯水稀释100倍；每个样品重复测定3次取平均值；脂质体的粒径越小，可利用度越...

【专利技术属性】
技术研发人员：侯丽芬，孙向阳，韩小存，
申请(专利权)人：河南牧业经济学院，
类型：发明
国别省市：