本发明专利技术属于生物医药技术领域，具体涉及植物来源纳米颗粒在制备防治血管钙化药物中的应用。经过实验研究证实，对于高磷诱导的小鼠血管平滑肌细胞和高维生素D3诱导的小鼠血管钙化模型，本发明专利技术提供的葡萄柚来源纳米颗粒，可以有效缓解血管钙化；并且久置后粒径和膜电位并未造成显著的改变，也未对小鼠主要器官(心、肝、脾、肺、肾)造成损伤，具有较高的稳定性和较好的安全性，有望应用到血管钙化疾病的防治当中，为治疗血管钙化提供了一种新的思路和更好的防治方案。更好的防治方案。更好的防治方案。
【技术实现步骤摘要】
植物来源纳米颗粒在制备防治血管钙化药物中的应用
[0001]本专利技术属于生物医药
更具体地，涉及植物来源纳米颗粒在制备防治血管钙化药物中的应用。
技术介绍
[0002]血管钙化(vascular calcification)是钙、磷等矿物质以羟基磷灰石的形式在血管壁的异常沉积，为动脉粥样硬化、高血压、糖尿病血管病变、血管损伤、慢性肾病、衰老等疾病或过程中普遍存在的共同病理表现。主要表现为血管壁僵硬性增加，顺应性降低，且易导致心肌缺血、左心室肥大和心力衰竭，引发血栓形成、斑块破裂等症状，是心脑血管疾病高发病率和高死亡率的重要因素之一，也是动脉粥样硬化心血管事件、脑卒中和外周血管病发生的重要标志分子。
[0003]目前，血管钙化是普遍、难治的疾病之一，临床上针对血管钙化仍然缺乏有效的治疗手段。中国专利申请公开了促生长激素释放激素激动剂在制备抗血管钙化药物中的应用，GHRH
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A可以提高平滑肌细胞中cAMP水平和蛋白激酶A(PKA)活性，降低平滑肌细胞NAPDH氧化酶表达和活性，降低平滑肌细胞中ROS的水平，降低平滑肌细胞中Runx2表达和活性及细胞碱性磷酸酶(ALP)表达和活性，以及降低体内血液中无机磷的含量，从而减少主动脉中钙沉积和磷沉积，减少主动脉中ALP活性，达到治疗或预防血管钙化、动脉硬化的目的；但是该药物容易影响机体内正常激素的代谢，存在一定的安全隐患，目前还未实际应用。
技术实现思路
[0004]本专利技术要解决的技术问题是克服缺少防治血管钙化药物，且安全性存在一定隐患的缺陷和不足，提供一种安全性高的植物来源纳米颗粒在制备防治血管钙化药物中的应用。
[0005]本专利技术的目的是提供一种植物来源纳米颗粒的制备方法。
[0006]本专利技术另一目的是提供所述制备方法制备得到的植物来源纳米颗粒。
[0007]本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：
[0008]一种植物来源纳米颗粒的制备方法，具体包括以下步骤：
[0009]葡萄柚榨汁，取果汁进行差速离心，去除果渣所得上清液超高速离心，分离得到的沉淀用缓冲液重悬，利用蔗糖密度梯度离心法进行纯化，得到葡萄柚来源纳米颗粒。
[0010]进一步地，所述超高速离心为100000～160000g离心1.5～2.5h。优选地，所述超高速离心为100000g离心2h。
[0011]更进一步地，所述离心在3～5℃条件下进行。
[0012]进一步地，所述差速离心分为5个阶段，依次为：第一阶段400～600g离心8～12min，第二阶段1800～2200g离心15～25min，第三阶段4500～5500g离心30min，第四阶段8000～12000g离心1～1.5h，第五阶段80000～120000g离心1.5～2.5h。
[0013]优选地，所述差速离心分为5个阶段，依次为：第一阶段500g离心10min，第二阶段
2000g离心20min，第三阶段5000g离心30min，第四阶段10000g离心1h，第五阶段100000g离心2h。
[0014]优选地，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液(PBS)。
[0015]更进一步地，所述蔗糖密度梯度离心法为：密度为8％、30％、45％和60％的蔗糖依次加入离心管中形成蔗糖密度梯度，将悬液转移到密度为8％、30％、45％和60％的蔗糖梯度的最上层，140000～160000g离心1.5～2.5h，30％/45％条带即为纯化后的葡萄柚来源纳米颗粒。
[0016]另外的，本专利技术还提供了所述制备方法制备得到的植物来源纳米颗粒。
[0017]进一步地，所述植物来源纳米颗粒的粒径为104.5～122.3nm。
[0018]本专利技术通过特定方法制备得到的植物来源纳米颗粒(GNVs)，经过实验研究证实，对于高磷诱导的小鼠血管平滑肌细胞和高维生素D3诱导的小鼠血管钙化模型，本专利技术提供的葡萄柚来源纳米颗粒，可以有效缓解血管钙化；并且久置后粒径和膜电位并未造成显著的改变，也未对小鼠主要器官(心、肝、脾、肺、肾)造成损伤，具有较高的稳定性和较好的安全性，有望应用到血管钙化疾病的防治当中，为治疗血管钙化提供了一种新的思路和更好的防治方案。
[0019]另外的，植物来源纳米颗粒具有类脂质体结构，可以进一步修饰优化其功能。
[0020]因此，本专利技术还要求保护所述植物来源纳米颗粒在制备防治血管钙化药物中的应用。
[0021]进一步地，当应用在小鼠主动脉平滑肌细胞上时，所述植物来源纳米颗粒的浓度为5～15μg/ml。对于其他不同的作用对象，可以根据换算规则对用药剂量进行换算。
[0022]更进一步地，所述药物的剂型为口服剂、注射剂或吸入剂。
[0023]本专利技术具有以下有益效果：
[0024]本专利技术通过特定方法制备得到的植物来源纳米颗粒，经过实验研究证实，对于高磷诱导的小鼠血管平滑肌细胞和高维生素D3诱导的小鼠血管钙化模型，本专利技术提供的葡萄柚来源纳米颗粒，可以有效缓解血管钙化；并且久置后粒径和膜电位并未造成显著的改变，也未对小鼠主要器官(心、肝、脾、肺、肾)造成损伤，具有较高的稳定性和较好的安全性，有望应用到血管钙化疾病的防治当中，为治疗血管钙化提供了一种新的思路和更好的防治方案。
附图说明
[0025]图1为本专利技术实施例2中葡萄柚来源植物纳米颗粒的鉴定相关图片，其中，图1a为葡萄柚来源植物纳米颗粒标志物蛋白质印迹鉴定图，图1b为电子显微镜下葡萄柚来源植物纳米颗粒的形貌特征图，图1c为使用DLS测定葡萄柚来源植物纳米颗粒的粒径分布图，图1d为葡萄柚来源植物纳米颗粒的膜表面Zeta电位图。
[0026]图2为本专利技术实施例3中葡萄柚来源植物纳米颗粒的稳定性测定相关图片，其中图2a、2b为在含50％胎牛血清(FBS)的PBS缓冲液中葡萄柚来源植物纳米颗粒在不同时间点的粒径和Zeta电位图，图2c、2d为PBS缓冲液中葡萄柚来源植物纳米颗粒在4℃条件下不同时间点的粒径和Zeta电位图。
[0027]图3为本专利技术实施例4中CCK8测定不同浓度葡萄柚来源植物纳米颗粒对血管平滑
肌细胞活力统计图。
[0028]图4为本专利技术实施例5中不同浓度的葡萄柚来源植物纳米颗粒对高磷诱导的小鼠主动脉平滑肌细胞(MVSMCs)的抗钙化作用效果图。
[0029]图5为本专利技术实施例6中葡萄柚来源植物纳米颗粒对高维生素D3诱导的C57BL/6小鼠血管钙化模型抗血管钙化作用考察的血管染色图。
[0030]图6为本专利技术实施例7中不同浓度的葡萄柚来源植物纳米颗粒体外药物溶血率统计图。
[0031]图7为本专利技术实施例8中葡萄柚来源植物纳米颗粒对C57BL/6小鼠主要器官(心、肝、脾、肺、肾)HE染色图。
具体实施方式
[0032]以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本专利技术，但实施例并不对本专利技术做任何形式的限定。除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
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【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种植物来源纳米颗粒的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：葡萄柚榨汁，取果汁进行差速离心，去除果渣所得上清液超高速离心，分离得到的沉淀用缓冲液重悬，利用蔗糖密度梯度离心法进行纯化，得到葡萄柚来源纳米颗粒。2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述超高速离心为100000～160000g离心1.5～2.5h。3.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述离心在3～5℃条件下进行。4.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述差速离心分为5个阶段，依次为：第一阶段400～600g离心8～12min，第二阶段1800～2200g离心15～25min，第三阶段4500～5500g离心30min，第四阶段8000～12000g离心1～1.5h，第五阶段80000～120000g离心1.5～2.5h。5.根据...
【专利技术属性】
技术研发人员：区彩文，冯伟镜，陈国钦，张建武，腾尹彤，
申请(专利权)人：南方医科大学，
类型：发明
国别省市：
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