一种无甘油保存保护剂及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种无甘油保存保护剂及其应用，无甘油保存保护剂的组成选自以下组：a)四氢嘧啶；b)四氢嘧啶以及山梨醇；c)四氢嘧啶以及葡聚糖；d)四氢嘧啶、山梨醇以及葡聚糖；本发明专利技术的保存保护剂无添加甘油，提升了核酸诊断试剂冻干制品的成品率和稳定性；本发明专利技术中的四氢嘧啶具有很强的水分子络合能力，能使细胞内的游离水结构化，能为酶、DNA等生物分子提供保护，且能对抗紫外线对生物活性物质的伤害，修复紫外线导致的细胞DNA损伤。复紫外线导致的细胞DNA损伤。

【技术实现步骤摘要】
一种无甘油保存保护剂及其应用


[0001]本专利技术涉及体外诊断及生物活性肽
，尤其涉及一种无甘油保存保护剂及其应用。

技术介绍

[0002]目前，冠状病毒核酸检测试剂主要基于荧光PCR、环介导等温扩增技术 (LAMP)、转录介导扩增技术(TMA)及重组酶扩增技术(RPA)等；(1) 荧光定量PCR法是利用逆转录酶AMV或MMLV对RNA进行逆转录合成 cDNA，cDNA在Taq DNA聚合酶作用下进行扩增和检测；(2)LAMP技术检测冠状病毒主要是逆转录酶RTX和Bst DNA聚合酶完成；(3)TMA(转录介导扩增技术)是以RNA为模板进行扩增，利用T7 DNA聚合酶和逆转录酶对转录生成的RNA产物进行分析检测；(4)RPA技术(重组酶扩增技术)由能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA 聚合酶完成。
[0003]上述这些核酸检测技术所用到的原料都需要用20％～50％甘油作为保护剂，在
‑
20℃才能长期稳定保存；然而含甘油成份的酶，会影响核酸诊断试剂冻干制品的成品率和稳定性。
[0004]因此，亟需一种无甘油保存保护剂。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是针对现有技术中的不足，提供一种无甘油保存保护剂及其应用。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案是：
[0007]依克多因(Ectoine)的化学式为2
‑
甲基
‑
1,4,5,6,
‑
四氢嘧啶
‑4‑
羧酸，又称四氢嘧啶，是一种于1985年发现的新型水溶两性离子的氨基酸衍生物；通过核磁共振法和质谱法鉴定并分离出Ectoine；在高盐浓度下，Ectoine作为透压补偿溶质在某些嗜盐细菌内大量的累积，以抵抗外界环境高渗透压的改变。
[0008]本专利技术的第一方面是提供一种无甘油保存保护剂，包括：所述无甘油保存保护剂的组成选自以下组：
[0009]a)四氢嘧啶；
[0010]b)四氢嘧啶以及山梨醇；
[0011]c)四氢嘧啶以及葡聚糖；
[0012]d)四氢嘧啶、山梨醇以及葡聚糖。
[0013]优选地，所述四氢嘧啶的浓度为0.2wt％～30wt％，所述山梨醇的浓度为 1wt％～30wt％，所述葡聚糖的浓度为0.1wt％～5wt％。
[0014]更优选地，所述四氢嘧啶的浓度为1wt％～25wt％，所述山梨醇的浓度为 3wt％～25wt％，所述葡聚糖的浓度为0.5wt％～5wt％。
[0015]更优选地，所述四氢嘧啶的浓度为2wt％～20wt％，所述山梨醇的浓度为 5wt％～20wt％，所述葡聚糖的浓度为1wt％～3wt％。
[0016]本专利技术的第二方面是提供一种上述无甘油保存保护剂在制备核酸诊断原料或核酸诊断试剂的冻干制品中的应用。
[0017]优选地，所述核酸诊断原料包括：DNA聚合酶A类、DNA聚合酶B类、逆转录酶、RNA聚合酶、恒温扩增DNA聚合酶、来源于病毒的聚合酶、核酸酶以及尿嘧啶
‑
DNA糖基化酶及连接酶中的至少一种。
[0018]更优选地，所述DNA聚合酶A类为Taq DNA聚合酶、TtH DNA聚合酶、 Z05 DNA聚合酶、Tfl DNA聚合酶等所有A类DNA聚合酶；所述DNA聚合酶 B类为Pfu DNA聚合酶、KOD1 DNA聚合酶等所有B类DNA聚合酶；所述逆转录酶为AMV、MMLV、RTX等逆转录聚合酶；所述RNA聚合酶为T7 RNA 聚合酶、SP6 RNA聚合酶等；所述恒温扩增DNA聚合酶为Bst、Bsu、phi29等；所述来源于病毒的聚合酶为HIV聚合酶、3173DNA聚合酶、M1608 DNA聚合酶等；所述核酸酶为核酸内切酶及外切酶。
[0019]优选地，所述核酸诊断试剂包括：PCR预混液、多重PCR预混液、荧光定量PCR预混液、RT
‑
PCR预混液、重组酶扩增技术预混液、环介导等温扩增技术预混液以及转录介导扩增技术预混液。
[0020]本专利技术采用以上技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：
[0021]本专利技术的保存保护剂无添加甘油，提升了核酸诊断试剂冻干制品的成品率和稳定性；本专利技术中的四氢嘧啶具有很强的水分子络合能力，能使细胞内的游离水结构化，能为酶、DNA等生物分子提供保护，且能对抗紫外线对生物活性物质的伤害，修复紫外线导致的细胞DNA损伤。
具体实施方式
[0022]下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0023]需要说明的是，在不冲突的情况下，本专利技术中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
[0024]下面结合具体实施例对本专利技术作进一步说明，但不作为本专利技术的限定。
[0025]实施例1
[0026]本实施例提供一种无甘油保存保护剂及其在MMLV逆转录酶保存中的应用；配方如表1所示；
[0027]表1
[0028]组份甘油组阴性对照组1组2组3组4组5Tris10mM10mM10mM10mM10mM10mM10mMKCl50mM50mM50mM50mM50mM50mM50mMTween 2.00.2％0.2％0.2％0.2％0.2％0.2％0.2％NP
‑
400.4％0.4％0.4％0.4％0.4％0.4％0.4％四氢嘧啶
‑‑
3.5％18％
‑‑
3.5％山梨醇
‑‑‑‑
5％20％5％
葡聚糖
‑‑‑‑‑‑
1％甘油50％
‑‑‑‑‑‑
[0029]分别将MMLV逆转录酶置于上述5组缓冲液中，按200U/μL保存，大约浓度为0.05μg/μL；将上述5组酶放置于37℃环境下，加速老化，分别于第0、1、3、5、7、10天测试酶的活性；结果如表2所示；
[0030]表2
[0031]37℃天数甘油组阴性对照组1组2组3组4组50100％100％100％100％100％100％100％1100％0100％100％91％100％100％39.5％083％100％63％100％100％50037％100％16％83％100％700092％047％65％1000065％0015％
[0032]甘油组在第3天开始，酶活性开始降低，第3天活性下降明显，超过90％；阴性对照组在第1天，酶已无活性。
[0033]四氢嘧啶能极大的提高酶的稳定性，无甘油保存液中添加3.5％四氢嘧啶(组 1)，第3天酶活性稍有下降，且不超过20％；第5天酶活性下降超过50％。
[0034]当四氢嘧啶浓度提高到18％，第5天酶活性变化；在第10天，活性下降不超过本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种无甘油保存保护剂，其特征在于，所述无甘油保存保护剂的组成选自以下组：a)四氢嘧啶；b)四氢嘧啶以及山梨醇；c)四氢嘧啶以及葡聚糖；d)四氢嘧啶、山梨醇以及葡聚糖。2.根据权利要求1所述的无甘油保存保护剂，其特征在于，所述四氢嘧啶的浓度为0.2wt％～30wt％，所述山梨醇的浓度为1wt％～30wt％，所述葡聚糖的浓度为0.1wt％～5wt％。3.根据权利要求2所述的无甘油保存保护剂，其特征在于，所述四氢嘧啶的浓度为1wt％～25wt％，所述山梨醇的浓度为3wt％～25wt％，所述葡聚糖的浓度为0.5wt％～5wt％。4.根据权利要求3所述的无甘油保存保护剂，其特征在于，所述四氢嘧啶的浓度为2wt％～20wt％，所述山梨醇的浓度为5wt％～20wt％，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴菊，
申请(专利权)人：常州可尔生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：