新的抗可溶性CD14亚型抗体及其应用制造技术

一种抗可溶性CD14亚型单克隆抗体或其抗原结合性抗体片段，其特异性地识别由SEQ ID No.42的氨基酸序列构成的表位。还涉及一种用于检测可溶性CD14亚型的试剂盒、一种用于检测可溶性CD14亚型的方法以及相应的应用。可溶性CD14亚型的方法以及相应的应用。

【技术实现步骤摘要】
新的抗可溶性CD14亚型抗体及其应用


[0001]本申请涉及一种抗可溶性CD14亚型单克隆抗体或其抗原结合性抗体片 段、一种用于检测可溶性CD14亚型的试剂盒、一种用于检测可溶性CD14亚 型的方法以及相应的应用。

技术介绍

[0002]脓毒血症(sepsis)是感染引起宿主反应失调导致的危及生命的器官功能 障碍。文献资料报道脓毒血症发病率逐年上升，且病死率居高不下，已严重 威胁到人类的生命健康。根据脓毒血症治疗指南，早期诊断是提高脓毒血症 患者存活率的有效途径。在脓毒血症的诊断中，血培养是诊断的“金标准”，但 血培养的阳性率低且培养时间长，亟需寻找高度特异性和灵敏的生物标志物 对脓毒血症进行早期诊断和准确预测。
[0003]对于脓毒血症的诊断标准也不断的更新。脓毒血症最新的诊断标准 (Sepsis 3.0)强调感染以及其导致的机体的反应失控和器官的功能损伤。虽 然对于Sepsis 3.0仍然存在不少争议，但其反应了临床研究和诊断的进步，也 反应了脓毒血症的复杂性和临床诊断的重要性。目前在诊断脓毒血症方面， 临床广泛的应用的生物标志物有白介素6(Interleukin 6，IL
‑
6)、C反应蛋白 (C reactive protein，CRP)和降钙素原(procalcitonin，PCT)。CRP是由肝脏 合成的急性期蛋白，对细菌性感染有较强的敏感度，但特异度不高、半衰期 长、与脓毒症的病情进展没有明确的相关性。IL
‑
6峰值出现早，可以在临床 症状出现之前升高，有利于脓毒症的早期诊断，但是敏感度不高。PCT广泛 应用于感染以及脓毒血症的诊断。PCT在非细菌性的感染中往往不会升高。 PCT在某些感染类型，如皮肤软组织感染中增高往往不明显。PCT不适用于 判断围手术期腹腔感染脓毒性休克感染的预后。此外，在一些非感染性疾病 中，也会伴随着PCT的升高。虽然PCT已经证明与感染有明显的相关性，但 在如外伤、手术、烧伤等情况下，很容易出现假阳性诊断。因此，PCT并不 是感染以及脓毒血症诊断的完美标志物，仅用PCT来诊断感染和脓毒血症是 不可靠的。
[0004]CD14是脂多糖
‑
脂多糖结合蛋白复合体的高亲和力受体，以糖基磷脂酰 肌醇锚定于细胞表面。CD14主要存在于单核细胞和巨噬细胞膜表面。CD14 的存在形式包括膜结合性CD14(mCD14)和可溶性CD14(sCD14)。膜结合 性CD14主要表达在单核/巨噬细胞表面。可溶性CD14分布于血浆中，是 CD14从细胞膜脱落后释放人血的那部分LPS
‑
LBF
‑
CD14复合物，主要介导内 皮细胞和上皮细胞对LPS的应答。
[0005]可溶性CD14亚型(soluble CD14 subtype，简称sCD14
‑
ST或Presepsin) 是脓毒血症的新生物学指标，在脓毒血症的诊断、预后以及指导抗菌药物的 使用方面有着潜在的应用价值，是近几年脓毒血症标志物研究的热点。 Shirakawa等通过建立家兔内毒素休克模型和盲肠结扎穿孔模型(CLP模型) 发现，前者并未能引起Presepsin浓度升高，而CLP模型显著升高。故认为 Presepsin的升高是由细菌感染引起的细胞吞噬引起，而并非生理性抗炎导致。 Presepsin是sCD14在血浆中被组织蛋白酶D等蛋白酶切割后N端的片段，其 相对分子量约为13kDa。目前Presepsin被认为在评估脓毒症严重程度及预后 方面具有高敏感
和特异性，并能准确的指导脓毒症抗菌药的应用。
[0006]迄今一直在尝试如何对脓毒血症进行高度特异性和灵敏地检测、早期诊 断和准确预测。

技术实现思路

[0007]因此，本申请的一个目的是提供一种抗可溶性CD14亚型单克隆抗体或 其抗原结合性抗体片段，其适合用于检测样本中的可溶性CD14亚型。此外， 本申请的另一目的是提供一种用于检测可溶性CD14亚型的试剂盒、一种用于 检测可溶性CD14亚型的方法以及相应的应用。
[0008]本申请第一方面涉及一种抗可溶性CD14亚型单克隆抗体或其抗原结合 性抗体片段，其特异性地识别由SEQ ID No.42的氨基酸序列构成的表位，该 抗可溶性CD14亚型单克隆抗体或其抗原结合性抗体片段包括：
[0009](i)重链可变区(VH)互补性决定区(CDR)：
[0010]VH CDR1：X1X2X3MX4；
[0011]VH CDR2：YIX5X6ADX7；
[0012]VH CDR3：X8X9X
10
AX
11
；
[0013]和
[0014](ii)轻链可变区(VL)互补性决定区(CDR)：
[0015]VL CDR1：KX
12
X
13
X
14
N；
[0016]VL CDR2：LX
15
X
16
；
[0017]VL CDR3：VX
17
X
18
X
19
；
[0018]其中X1至X
19
是下列作为选择项记载的1个或多个氨基酸序列：
[0019]X1＝任意一个氨基酸；
[0020]X2＝F或V；X3＝A、E或K；X4＝A或L；
[0021]X5＝SYMGS、SSGSS、AYTMY、TYSGS或SSKSS；
[0022]X6＝GAYY、TIYY、AKYY、TKAS或SNLA；
[0023]X7＝AKLG、TVKG、SYTA、MTKG或YGNT；
[0024]X8＝A或Q；X9＝G或Q；X
10
＝Q或F；X
11
＝M、Y或V；
[0025]X
12
＝YYAS、SSAT、SSQS或SGSS；
[0026]X
13
＝AAKL、LLAT、LLYS或KAAS；
[0027]X
14
＝YRNIKL、TWAKGN、NGKTYL或YTNGAL；
[0028]X
15
＝VQS、KTS、QTS或VSK；
[0029]X
16
＝LAS、LDS、LTA或DSK；
[0030]X
17
＝G、A、S或Q；
[0031]X
18
＝GTH、GNT、GTA或TAI；
[0032]X
19
＝FITA、FPRT、YGHV或NYGH。
[0033]本申请第二方面涉及一种用于检测可溶性CD14亚型的试剂盒，该用于 检测可溶性CD14亚型的试剂盒至少包含根据本申请第一方面的抗可溶性 CD14亚型单克隆抗体或其抗原结合性抗体片段。
[0034]本申请第三方面涉及一种用于检测可溶性CD14亚型的方法，所本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗可溶性CD14亚型单克隆抗体或其抗原结合性抗体片段，其特异性地识别由SEQ ID No.42的氨基酸序列构成的表位，其包括：(a)包含由序列编号1的氨基酸序列构成的VH CDR1、由序列编号12的氨基酸序列构成的VH CDR2和由序列编号17的氨基酸序列构成的VH CDR3的VH，以及包含由序列编号21的氨基酸序列构成的VL CDR1、由序列编号32的氨基酸序列构成的VL CDR2和由序列编号33的氨基酸序列构成的VL CDR3的VL；(b)包含由序列编号2的氨基酸序列构成的VH CDR1、由序列编号12的氨基酸序列构成的VH CDR2和由序列编号20的氨基酸序列构成的VH CDR3的VH，以及包含由序列编号22的氨基酸序列构成的VL CDR1、由序列编号30的氨基酸序列构成的VL CDR2和由序列编号37的氨基酸序列构成的VL CDR3的VL；(c)包含由序列编号5的氨基酸序列构成的VH CDR1、由序列编号13的氨基酸序列构成的VH CDR2和由序列编号18的氨基酸序列构成的VH CDR3的VH，以及包含由序列编号21的氨基酸序列构成的VL CDR1、由序列编号30的氨基酸序列构成的VL CDR2和由序列编号39的氨基酸序列构成的VL CDR3的VL；(d)包含由序列编号4的氨基酸序列构成的VH CDR1、由序列编号12的氨基酸序列构成的VH CDR2和由序列编号16的氨基酸序列构成的VH CDR3的VH，以及包含由序列编号23的氨基酸序列构成的VL CDR1、由序列编号30的氨基酸序列构成的VL CDR2和由序列编号33的氨基酸序列构成的VL CDR3的VL；或(e)包含由序列编号6的氨基酸序列构成的VH CDR1、由序列编号13的氨基酸序列构成的VH CDR2和由序列编号20的氨基酸序列构成的VH CDR3的VH，以及包含由序列编号22的氨基酸序列构成的VL CDR1、由序列编号30的氨基酸序列构成的VL CDR2和由序列编号38的氨基酸序列构成的VL CDR3的VL。2.根据权利要求1所述的抗可溶性CD14亚型单克隆抗体或其抗原结合性抗体片段，其中，所述抗可溶性CD14亚型单克隆抗体或其抗原结合性抗体片段为由保藏号为CGMCC NO.18536的杂交瘤细胞株分泌产生的抗可溶性CD14亚型单克隆抗体或其抗原结合性抗体片段。3.根据权利要求1所述的抗可溶性CD14亚型单克隆抗体或其抗原结合性抗体片段，其中所述抗可溶性CD14亚型单克隆抗体或其抗原结合性抗体片段不与高分子量可溶性CD14特异性地结合。4.根据权利要求1所述的抗可溶性CD14亚型单克隆抗体或其抗原结合性抗体片段，其中所述抗原结合性抗体片段是选自Fab、Fab
’
、F(ab
’
)2、单链抗体(scFV)、二聚体化V区(二聚抗体)、二硫键稳定性V区(dsFv)、sc(Fv)2、包含CDR的多肽、包含重链可变区的多肽以及包含轻链可变区的多肽组成的组中的抗原结合性抗体片段。5...

【专利技术属性】
技术研发人员：于丽娜，李可，何建文，
申请(专利权)人：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司，
类型：发明
国别省市：