制备N-烷基-吡咯烷酮取代黄烷醇同分异构体的方法、饮食品及其应用技术

本发明专利技术提供了一种制备N

【技术实现步骤摘要】
制备N
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烷基
‑
吡咯烷酮取代黄烷醇同分异构体的方法、饮食品及其应用


[0001]本专利技术涉及化学
，具体涉及从发酵茶中制备或者分离备N
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烷基
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吡咯烷酮取代黄烷醇同分异构体(例如，普洱茶素 401系列化合物同分异构体)的方法、使用分离得到的同分异构体制备饮食品的应用以及包含该同分异构体的饮食品。

技术介绍

[0002]发酵茶是指在茶叶制作中有“微生物发酵”这一工序的茶的统称，茶树芽叶经过萎凋、揉切、发酵、干燥等初制工序制成毛茶后，再经微生物发酵制成的茶，就是发酵茶。发酵茶可以包括普洱茶、六堡茶、茯砖茶等等。其中，普洱茶是最重要的发酵茶之一，其是由云南省大叶种晒青毛茶制成的一种微生物发酵茶。
[0003]在微生物发酵及湿热作用下，晒青毛茶中的多酚经氧化、甲基化、酰化、糖基化等作用形成大量多酚衍生物或者多酚化合物。在这些多酚化合物中，普洱茶素系列化合物是经过研究具有很多活性的化合物。对从普洱茶发现的多酚类普洱茶素化合物的结构研究发现，一些重要的普洱茶素化合物是N
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烷基
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吡咯烷酮取代黄烷醇类化合物。经进一步研究表明，一些N
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烷基
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吡咯烷酮取代黄烷醇类化合物对高脂高糖喂养ApoE
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/
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小鼠的2型糖尿病并发高脂血症有治疗作用，证实其通过抑制肠道α
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葡萄糖苷酶活性和激活肝细胞低密度脂蛋白受体(LDLR)的表达，从而降低空腹血糖和血浆总胆固醇含量。一些N
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烷基
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吡咯烷酮取代黄烷醇类化合物可下调加速衰老小鼠4
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羟基壬烯醛和泛素化蛋白聚集体的形成及A β代谢途径，增加内源性抗氧化能力，减轻细胞缺氧，降低神经细胞凋亡率，有效保护SAMP8神经元免受氧化性损伤。
[0004]从N
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烷基
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吡咯烷酮取代黄烷醇类化合物结构中可知，其含有多个手性碳原子，因此理论推导应有多个同分异构体。但是文献中仅仅报道了从普洱熟茶中发现的少数的同分异构体化合物。发酵茶中N
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烷基
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吡咯烷酮取代黄烷醇类化合物含量低，基质复杂，同分异构体分离纯化难度大。尚无拆分N
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烷基
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吡咯烷酮取代黄烷醇类化合物同分异构体及其稳定性研究的相关报道，且少有化合物的活性及应用研究。

技术实现思路

[0005]本专利技术要解决的技术问题是填补发酵茶中N
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烷基
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吡咯烷酮取代黄烷醇系列化合物研究的不足，提供制备N
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烷基
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吡咯烷酮取代黄烷醇同分异构体(特别是普洱茶素401系列化合物)的方法、饮食品及其应用。
[0006]为达到上述专利技术创造目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0007]1.一种制备N
‑
烷基
‑
吡咯烷酮取代黄烷醇同分异构体的方法，包括下列步骤：
[0008](1)提供至少一种发酵茶的酯类溶剂萃取物；
[0009](2)将所述酯类溶剂萃取物通过大孔树脂进行分离，得到乙醇
‑
水洗脱馏分；
[0010](3)将乙醇
‑
水洗脱馏分通过硅胶纯化，得到不同氯仿
‑
甲醇洗脱馏分Pr
‑
A、Pr
‑
B、
Pr
‑
C以及Pr
‑
D；以及
[0011](4)将步骤(3)中得到的不同氯仿
‑
甲醇洗脱馏分Pr
‑
A、Pr
‑
B、 Pr
‑
C以及Pr
‑
D分别通过半制备色谱柱，从而得到纯化的多种N
‑ꢀ
烷基
‑
吡咯烷酮取代黄烷醇同分异构体。
[0012]2.根据1所述的方法，其中，所述步骤(1)包括：
[0013](11)获得所述至少一种发酵茶的水提取液；
[0014](12)将所述水提取液用萃取至少一次，从而获得水相；以及
[0015](13)用酯类溶剂萃取所述水相至少一次，从而获得酯类溶剂萃取物。
[0016]3.根据1或2所述的方法，其中，：
[0017]所述大孔树脂选自LX3020、HP20、SP825L以及CHP20大孔树脂中的至少一者；
[0018]任选地，所述乙醇
‑
水的体积比为1:9
‑
4:6，优选为2:8～3:7，更优选为3:7，以及
[0019]任选地，所述发酵茶选自普洱熟茶、六堡茶、茯砖茶中的至少一者。
[0020]4.根据1
‑
3中任意一项所述的方法，其中：
[0021]所述乙醇
‑
水洗脱馏分与硅胶的质量比为1:1
‑
1:2，
[0022]任选地，所述氯仿
‑
甲醇的体积比为1:8～1:30，
[0023]优选地，所述不同的氯仿
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甲醇洗脱馏分Pr
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A、Pr
‑
B、Pr
‑
C以及Pr
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D分别为体积比1:40～1:30的氯仿
‑
甲醇洗脱馏分，体积比 1:20～1:15的氯仿
‑
甲醇洗脱馏分，体积比1:10～1:8的氯仿
‑
甲醇洗脱馏分以及体积比1:10～1:8的氯仿
‑
甲醇洗脱馏分。
[0024]5.根据1到4中任意一项所述的方法，其中：
[0025]所述方法还包括(5)在步骤(2)之后对乙醇
‑
水洗脱馏分进行第一高效液相色谱
‑
质谱检测的步骤，其中在负离子模式下筛查到分别对应于氯仿
‑
甲醇洗脱馏分Pr
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A、Pr
‑
B、Pr
‑
C以及Pr
‑
D的4 个[M
‑
H]‑
为400.15的分子离子峰。
[0026]6.根据5所述的方法，其中：
[0027]所述第一高效液相色谱的检测参数包括:色谱柱Megres C18 柱，粒径5μm，柱长4.6
×
250mm，柱温40℃；流动相A为含2mM 乙酸铵的0.1％甲酸水溶液，流动相B为甲醇；梯度洗脱条件为:0～10min，流动相B体积保持30％，10～13min，流动相B体积升至50％，13～24min，流动相B体积升至100％；流动相的流速为1mL/min；进样量为10μL；以及柱温35℃。
[0028]7.根据5所述的方法，其中：第一质谱的分析参数包括:负离子模式，离子喷雾本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种制备N
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烷基
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吡咯烷酮取代黄烷醇同分异构体的方法，其特征在于包括下列步骤：(1)提供至少一种发酵茶的酯类溶剂萃取物；(2)将所述酯类溶剂萃取物通过大孔树脂进行分离，得到乙醇
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水洗脱馏分；(3)将乙醇
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水洗脱馏分通过硅胶纯化，得到不同氯仿
‑
甲醇洗脱馏分Pr
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A、Pr
‑
B、Pr
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C以及Pr
‑
D；以及(4)将步骤(3)中得到的不同氯仿
‑
甲醇洗脱馏分Pr
‑
A、Pr
‑
B、Pr
‑
C以及Pr
‑
D分别通过半制备色谱柱，从而得到纯化的多种N
‑
烷基
‑
吡咯烷酮取代黄烷醇同分异构体。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)包括：(11)获得所述至少一种发酵茶的水提取液；(12)将所述水提取液用非极性溶剂萃取至少一次，从而获得水相；以及(13)用酯类溶剂萃取所述水相至少一次，从而获得酯类溶剂萃取物。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述大孔树脂选自LX3020、HP20、SP825L以及CHP20大孔树脂中的至少一者；任选地，所述乙醇
‑
水的体积比为1:9
‑
4:6，优选为2:8～3:7，更优选为3:7，以及任选地，所述发酵茶选自普洱熟茶、六堡茶以及茯砖茶中的至少一者。4.根据权利要求1
‑
3中任意一项所述的方法，其特征在于：所述乙醇
‑
水洗脱馏分与硅胶的质量比为1:1
‑
1:2，任选地，所述氯仿
‑
甲醇的体积比为1:8～1:30，优选地，所述不同的氯仿
‑
甲醇洗脱馏分Pr
‑
A、Pr
‑
B、Pr
‑
C以及Pr
‑
D分别为体积比1:40～1:30的氯仿
‑
甲醇洗脱馏分，体积比1:20～1:15的氯仿
‑
甲醇洗脱馏分，体积比1:10～1:8的氯仿
‑
甲醇洗脱馏分以及体积比1:10～1:8的氯仿
‑
甲醇洗脱馏分。5.根据权利要求1到4中任意一项所述的方法，其特征在于：所述方法还包括(5)在步骤(2)之后对乙醇
‑
水洗脱馏分进行第一高效液相色谱
‑
质谱检测的步骤，其中在负离子模式下筛查到分别对应于氯仿
‑
甲醇洗脱馏分Pr
‑
A、Pr
‑
B、Pr
‑
C以及Pr
‑
D的4个[M
‑
H]
‑
为400.15的分子离子峰。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述第一高效液相色谱的检测参数包括:色谱柱Megres C18柱，粒径5μm，柱长4.6
×
250mm，柱温40℃；流动相A为含2mM乙酸铵的0.1％甲酸水溶液，流动相B为甲醇；梯度洗脱条件为:0～10min，流动相B体积保持30％，10～13min，流动相B体积升至50％，13～24min，流动相B体积升至100％；流动相的流速为1mL/min；进样量为10μL；以及柱温35℃。7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：第一质谱的分析参数包括:负离子模式，离子喷雾电压为
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4500V，去簇电压为
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80V，碰撞能量为
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35eV，离子源温度为600℃，吹扫气气压为40psi，雾化器气压为55psi，辅助气气压为55psi，离子扫描范围为100～2000AMU。8.根据权利要求1到7中任意一项所述的方法，其特征在于：所述方法还包括(6)在步骤(3)之后对所述不同的氯仿
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甲醇洗脱馏分Pr
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A、Pr
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B、Pr
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C以及Pr
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D进行第二高效液相色谱
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质谱检测的步骤。9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：
第二高效液相色谱的检测参数包括:色谱柱采用Waters Anlantis dC18柱，粒径5μm，柱长4.6

【专利技术属性】
技术研发人员：陈丹丹，刘敏，赵兴平，许芮菁，杨锐，武月琴，朱旭，李易，丁章贵，高林瑞，
申请(专利权)人：云南大益微生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：