工程化免疫细胞及其用途制造技术

本发明专利技术涉及一种工程化免疫细胞，其表达(i)特异性识别配体的细胞表面分子，(ii)一种或多种外源性的细胞因子，选自IL12、IL18、IL

【技术实现步骤摘要】
工程化免疫细胞及其用途


[0001]本专利技术属于免疫治疗领域。更具体地，本专利技术涉及一种工程化免疫细胞，其表达(i)特异性识别配体的细胞表面分子，(ii)外源性的细胞因子，其选自IL12、IL18、IL
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21、IL23和IL33，和(iii)外源性的趋化因子，其选自XCL2XCL1。更优选地，所述特异性识别配体的细胞表面分子是嵌合抗原受体。

技术介绍

[0002]肿瘤免疫治疗主要是通过调节人体免疫系统和肿瘤微环境，最终依靠自身免疫来清除肿瘤细胞。免疫系统是一个统一的整体，固有免疫在肿瘤免疫中也起到十分重要的作用。
[0003]一些抗原递呈细胞，如树突状细胞及巨噬细胞是固有免疫和获得性免疫的连接桥梁。抗原递呈细胞可以对肿瘤抗原进行识别并递呈给获得性免疫系统，激活肿瘤特异性T细胞，进而对肿瘤进行清除。因而通过增强抗原递呈过程来增加免疫系统杀伤肿瘤的效果是肿瘤免疫的重要研究方向。
[0004]CAR细胞治疗是重要的肿瘤细胞免疫疗法。CAR细胞成功控制肿瘤一般而言需要经过以下几个过程：免疫系统激活、CAR细胞的活化和扩增、活化的CAR细胞浸润肿瘤组织并杀死肿瘤细胞。然而，目前CAR细胞疗法普遍存在一个问题，即肿瘤微环境对CAR细胞有抑制作用，使得CAR细胞无法浸润肿瘤组织。因此，如何降低肿瘤微环境对CAR细胞的抑制作用，提高CAR细胞的存活时间，或者招募其他免疫细胞与CAR细胞协同作用，对于提高CAR细胞的治疗效果非常重要。
[0005]因此，需要一种改进的免疫治疗手段，可以提高肿瘤抗原提呈效率，诱导机体过继性免疫反应，解决肿瘤的异质性问题以及肿瘤微环境的抑制作用，从而提高CAR细胞治疗的疗效。

技术实现思路

[0006]在第一个方面，本专利技术提供一种新的工程化免疫细胞，其表达(i)特异性识别配体的细胞表面分子，(ii)外源性的细胞因子，其选自IL12、IL18、IL
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21、IL23和IL33，和(iii)外源性的趋化因子，其选自XCL2和XCL1。
[0007]在一个实施方案重，所述特异性识别配体的细胞表面分子是嵌合抗原受体、T细胞融合蛋白、T细胞抗原耦合器或T细胞受体，优选是嵌合抗原受体。
[0008]在一个实施方案中，所述细胞因子或趋化因子蛋白是可以抵抗蛋白酶水解的融合蛋白或者突变体。
[0009]在一个实施方案中，所述免疫细胞是选自T细胞、巨噬细胞、树突状细胞、单核细胞、NK细胞或NKT细胞。优选地，所述T细胞是CD4+/CD8+T细胞、CD4+辅助T细胞、CD8+T细胞、CD4
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CD8
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T细胞、肿瘤浸润细胞、记忆T细胞、幼稚T细胞、调节性T细胞、γδ
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T细胞或αβ
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T细胞。
[0010]在一个实施方案中，所述特异性识别配体的细胞表面分子是嵌合抗原受体，其包含配体结合结构域、跨膜结构域和胞内结构域，所述胞内结构域包含共刺激结构域和/或初级信号传导结构域。其中，配体结合结构域可以选自IgG、Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、Fd
′
、Fv、scFv、sdFv、线性抗体、单结构域抗体、纳米抗体、双体、anticalin和DARPIN。优选地，所述配体结合结构域选自scFv、Fab、单结构域抗体和纳米抗体。
[0011]在一个实施方案中，所述特异性识别配体的细胞表面分子与选自以下的靶标结合：CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD14、CD15、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD24、CD25、CD30、CD33、CD37、CD38、CD40、CD40L、CD44、CD46、CD47、CD52、CD54、CD56、CD70、CD73、CD80、CD97、CD123、CD126、CD138、CD171、CD 179a、DR4、DR5、TAC、TEM1/CD248、VEGF、GUCY2C、EGP40、EGP
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2、EGP
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4、CD133、IFNAR1、DLL3、kappa轻链、TIM3、TSHR、CD19、BAFF
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R、CLL
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1、EGFRvIII、tEGFR、GD2、GD3、BCMA、Tn抗原、PSMA、ROR1、FLT3、FAP、TAG72、CD44v6、CEA、EPCAM、B7H3、KIT、IL
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13Ra2、IL
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llRa、IL
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22Ra、IL
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2、间皮素、PSCA、PRSS21、VEGFR2、LewisY、PDGFR
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β、SSEA
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4、AFP、Folate受体α、ErbB2(Her2/neu)、ErbB3、ErbB4、MUC1、MUC16、EGFR、CS1、NCAM、Claudin18.2、c
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Met、Prostase、PAP、ELF2M、Ephrin B2、IGF
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I受体、CAIX、LMP2、gpl00、bcr
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abl、酪氨酸酶、EphA2、Fucosyl GMl、sLe、GM3、TGS5、HMWMAA、o
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乙酰基
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GD2、Folate受体β、TEM7R、CLDN6、GPRC5D、CXORF61、ALK、多聚唾液酸、PLAC1、GloboH、NY
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BR
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1、UPK2、HAVCR1、ADRB3、PANX3、GPR20、LY6K、OR51E2、TARP、WT1、NY
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ESO
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1、LAGE
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la、MAGE
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A1、MAGE
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A3、MAGE
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A6、豆荚蛋白、HPV E6、E7、ETV6
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AML、精子蛋白17、XAGE1、Tie 2、MAD
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CT
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1、MAD
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CT
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2、Fos相关抗原1、p53、p53突变体、PSA、存活蛋白和端粒酶、PCTA
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l/Galectin 8、MelanA/MARTl、Ras突变体、hTERT、肉瘤易位断点、ML
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IAP、TMPRSS2 ETS融合基因、NA17、PAX3、雄激素受体、孕酮受体、Cyclin Bl、MYCN、RhoC、TRP
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2、CYP1B 1、BORIS、SART3、PAX5、OY
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TES 1、LCK、AKAP
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4、SSX2、RAGE
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1、人端粒酶逆转录酶、RU1、RU2、肠道羧酸酯酶、mut hsp70
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2、CD79a、CD79b、CD72、LAIR1、FCAR、LILRA2、CD30本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种工程化免疫细胞，其表达(i)特异性识别配体的细胞表面分子，(ii)一种或多种外源性的细胞因子，其选自IL12、IL18、IL
‑
21、IL23和IL33，和(iii)一种或多种外源性的趋化因子，其选自XCL2和XCL1。2.权利要求1所述的工程化免疫细胞，其中所述特异性识别配体的细胞表面分子是嵌合抗原受体、T细胞融合蛋白、T细胞抗原耦合器或T细胞受体。3.权利要求2所述的工程化免疫细胞，其中所述特异性识别配体的细胞表面分子是包含以下的嵌合抗原受体：配体结合结构域、跨膜结构域和胞内结构域，所述胞内结构域包含共刺激结构域和/或初级信号传导结构域。4.权利要求1
‑
3任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述细胞因子是野生型或其变体，所述变体具有与野生型相同或相似的功能。5.权利要求4所述的工程化免疫细胞，其中所述IL
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21与SEQ ID NO：32、34或36所示的氨基酸序列具有至少90％同一性；IL12与SEQ ID NO：40或42所示的氨基酸序列具有至少90％同一性，IL18与SEQ ID NO：44或46所示的氨基酸序列具有至少90％同一性，IL23与SEQ ID NO：48或50所示的氨基酸序列具有至少90％同一性，IL33与SEQ ID NO：52、54、55、56或57所示的氨基酸序列具有至少90％同一性。6.权利要求1
‑
5任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述XCL1基因与SEQ IDNO：23或25所示的核酸序列具有至少90％同一性，或者所述XCL1基因编码的多肽与SEQ ID NO：24或26所示的氨基酸序列具有至少90％同一性，其中所述XCL2基因与SEQ ID NO：37所示的核酸序列具有至少90％同一性，或者所述XCL2基因编码的多肽与SEQ ID NO：38所示的氨基酸序列具有至少90％同一性。7.权利要求1
‑
5任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述免疫细胞选自T细胞、巨噬细胞、树突状细胞、单核细胞、NK细胞、或NKT细胞。8.权利要求7所述的工程化免疫细胞，其中所述T细胞是CD4+/CD8+T细胞、CD4+辅助T细胞、CD8+T细胞、CD4
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CD8
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T细胞、肿瘤浸润细胞、记忆T细胞、幼稚T细胞、调节性T细胞、γδ
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T细胞或αβ
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T细胞。9.权利要求3
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8任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述配体结合结构域选自IgG、Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、Fd
′
、Fv、scFv、sdFv、线性抗体、单结构域抗体、纳米抗体、双体、anticalin和DARPIN。10.权利要求3所述的工程化免疫细胞，其中所述配体结合结构域与选自以下的靶标结合：CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD14、CD15、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD24、CD25、CD30、CD33、CD37、CD38、CD40、CD40L、CD44、CD46、CD47、CD52、CD54、CD56、CD70、CD73、CD80、CD97、CD123、CD126、CD138、CD171、CD 179a、DR4、DR5、TAC、TEM1/CD248、VEGF、GUCY2C、EGP40、EGP
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2、EGP
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4、CD133、IFNAR1、DLL3、kappa轻链、TIM3、TSHR、CD19、BAFF
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R、CLL
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1、EGFRvIII、tEGFR、GD2、GD3、BCMA、Tn抗原、PSMA、ROR1、FLT3、FAP、TAG72、CD44v6、CEA、EPCAM、B7H3、KIT、IL
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13Ra2、IL
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llRa、IL
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22Ra、IL
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2、间皮素、PSCA、PRSS21、VEGFR2、LewisY、PDGFR
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β、SSEA
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4、AFP、Folate受体α、ErbB2(Her2/neu)、ErbB3、ErbB4、MUC1、MUC16、EGFR、CS1、NCAM、Claudin18.2、c
‑
Met、Prostase、PAP、ELF2M、Ephrin B2、IGF
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I受体、CAIX、LMP2、gpl00、bcr
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abl、酪氨酸酶、EphA2、Fucosyl GMl、sLe、GM3、TGS5、HMWMAA、o
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乙酰基
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GD2、Folate受体β、TEM7R、CLDN6、GPRC5D、CXORF61、ALK、多聚唾液酸、PLAC1、GloboH、NY
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BR
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1、UPK2、HAVCR1、
ADRB3、PANX3、GPR20、LY6K、OR51E2、TARP、WT1、NY
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ESO
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1、LAGE
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la、MAGE
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A1、MAGE
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A3、MAGE
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A6、豆荚蛋白、HPV E6、E7、ETV6
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AML、精子蛋白17、XAGE1、Tie2、MAD
‑
CT...

【专利技术属性】
技术研发人员：邢芸，李国坤，任江涛，贺小宏，王延宾，韩露，
申请(专利权)人：南京北恒生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：