【技术实现步骤摘要】
一种基因编辑系统及其在构建OCA
‑
1B型白化病模型猪核移植供体细胞中的应用
[0001]本专利技术属于生物
,具体属于基因编辑
,更具体基于CRISPR/Cas9系统及ssODN同源重组技术的一种基因编辑系统及其在构建OCA
‑
1B型白化病模型猪核移植供体细胞中的应用。
技术介绍
[0002]白化病(albinism)是由于黑色素合成减少或缺乏而导致的多种遗传性疾病的总称,主要表现为皮肤、毛发以及眼部的色素减退。多种基因的突变均可导致白化病的症状。根据色素缺失的部位以及有无其他系统异常,可将白化病分为非综合征性白化病和综合征性白化病两大类。非综合征白化病又可再分为只有眼部色素缺乏的眼白化病(OA)和皮肤、毛发、眼睛均有色素缺失(即具有全身症状)的眼及皮肤白化病(oculocutaneous albinism,OCA)。
[0003]OCA是一组以眼、皮肤、毛发黑色素沉着减少或缺乏为主要临床表现的常染色体隐性遗传病。超过90%的白化病患者为OCA,一般是由黑色素合成或转运相关基因突变所引起的,主要临床表现为普遍色素沉着不足,眼部改变包括黄斑中心凹发育不良、屈光不正、视力低下、畏光、虹膜半透明、眼球震颤、眼底着色不足及视觉纤维通路异常等。近年来,OCA已根据发生突变的基因进行分类:酪氨酸酶基因(TYR)突变导致OCA1,OCA2基因(曾被命名为P基因)突变导致OCA2,酪氨酸酶相关蛋白
‑
1基因(TYRP1)突变导致OCA3,SLC45A2基因( ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种试剂盒,包括TYR
‑
gRNA1、TYR
‑
gRNA5、TYR
‑
E4mut
‑
ss153和NCN蛋白;所述TYR
‑
gRNA1为sgRNA,其靶序列结合区如SEQ ID NO:18中第3
‑
22位核苷酸所示;所述TYR
‑
gRNA5为sgRNA,其靶序列结合区如SEQ ID NO:19中第3
‑
22位核苷酸所示;所述TYR
‑
E4mut
‑
ss153为SEQ ID NO:20所示的单链DNA分子;所述NCN蛋白为Cas9蛋白或具有Cas9蛋白的融合蛋白;所述试剂盒的用途为如下(a)或(b)或(c):(a)制备重组细胞;(b)制备白化病模型猪;(c)制备白化病细胞模型或白化病组织模型或白化病器官模型。2.一种试剂盒,包括TYR
‑
gRNA1、TYR
‑
gRNA5、TYR
‑
E4mut
‑
ss153和PRONCN蛋白;TYR
‑
gRNA1为权利要求1中所述的TYR
‑
gRNA1;TYR
‑
gRNA5为权利要求1中所述的TYR
‑
gRNA5;TYR
‑
E4mut
‑
ss153为权利要求1中所述的TYR
‑
E4mut
‑
ss153;所述PRONCN蛋白自上游至下游依次包括如下元件:信号肽、分子伴侣蛋白、蛋白标签、蛋白酶酶切位点、核定位信号、Cas9蛋白、核定位信号;所述试剂盒的用途为如下(a)或(b)或(c):(a)制备重组细胞;(b)制备白化病模型猪;(c)制备白化病细胞模型或白化病组织模型或白化病器官模型。3.一种试剂盒,包括TYR
‑
gRNA1、TYR
‑
gRNA5、TYR
‑
E4mut
‑
ss153和特异质粒;TYR
‑
gRNA1为权利要求1中所述的TYR
‑
gRNA1;TYR
‑
gRNA5为权利要求1中所述的TYR
‑
gRNA5;TYR
‑
E4mut
‑
ss153为权利要求1中所述的TYR
‑
E4mut
‑
ss153;所述特异质粒自上游至下游依次包括如下元件:启动子、操纵子、核糖体结合位点、PRONCN蛋白的编码基因、终止子;所述PRONCN蛋白自上游至下游依次包括如下元件:信号肽、分子伴侣蛋白、蛋白标签、蛋白酶酶切位点、核定位信号、Cas9蛋白、核定位信号;所述试剂盒的用途为如下(a)或(b)或(c):(a)制备重组细胞;(b)制备白化病模型猪;(c)制备白化病细胞模型或白化病组织模型或白化病器官模型。4.TYR
‑
gRNA1、TYR
‑
gRNA5、TYR
‑
E4mut
‑
ss153和NCN蛋白在制备试剂盒中的应用;TYR
‑
gRNA1为权利要求1中所述的TYR
‑
gRNA1;TYR
‑
gRNA5为权利要求1中所述的TYR
‑
gRNA5;TYR
‑
E4mut
‑
ss153为权利要求1中所述的TYR
‑
E4mut
‑
ss153;NCN蛋白为权利要求1中所述的NCN蛋白;所述试剂盒的用途为如下(a)或(b)或(c):(a)制备重组细胞;(b)制备白化病模型猪;(c)制备白化病细胞模型或白化病组织模型或白化病器官模型。5.TYR
‑
gRNA1、TYR
‑
gRNA5、TYR
‑
E4mut
‑
ss153和PRONCN蛋白在制备试剂盒中的应用;TYR
‑
gRNA1为权利要求1中所述的TYR
‑
gRNA1;TYR
‑
gRNA5为权利要求1中所述的TYR
‑
gRNA5;TYR
‑
E4mut
‑
ss153为权利要求1中所述的TYR
‑
E4mut
‑
ss153;所述PRONCN蛋白自上游至下游依次包括如下元件:信号肽、...
【专利技术属性】
技术研发人员:牛冬,汪滔,陶裴裴,马翔,曾为俊,王磊,程锐,赵泽英,黄彩云,段星,刘璐,
申请(专利权)人:南京启真基因工程有限公司,
类型:发明
国别省市:
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。