新藤黄酸在制备Nrf2蛋白抑制剂中的应用制造技术

本发明专利技术属于蛋白抑制剂技术领域，本发明专利技术提供了新藤黄酸在制备Nrf2蛋白抑制剂中的应用。本发明专利技术从Nrf2蛋白与下游靶基因ARE结合的机制着手，发现新藤黄酸对Nrf2蛋白的抑制活性强且靶向性强，进一步对新藤黄酸进行抗肿瘤活性评价和靶点机制验证发现，新藤黄酸对食管鳞癌细胞集落形成具有抑制作用，可以明显促进食管鳞癌细胞的死亡和凋亡，还可以抑制食管鳞癌细胞的迁移，且新藤黄酸对食管鳞癌细胞Nrf2突变株的上述作用要明显强于食管鳞癌细胞Nrf2正常株。最终得出，新藤黄酸可作为食管鳞癌的Nrf2蛋白抑制剂发挥抗肿瘤作用，为临床开发食管磷癌靶向治疗药物奠定了基础。癌靶向治疗药物奠定了基础。癌靶向治疗药物奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】
新藤黄酸在制备Nrf2蛋白抑制剂中的应用


[0001]本专利技术涉及蛋白抑制剂
，尤其涉及新藤黄酸在制备Nrf2蛋白抑制剂中的应用。

技术介绍

[0002]食管癌是常见的消化道肿瘤，全世界每年约有30万人死于食管癌，其发病率和死亡率各国差异很大，其发病因素多与不良的饮食习惯有关。目前，食管癌患者的化学治疗仍以传统的化疗药物为主，缺乏针对食管癌的靶向药物。传统化疗药如顺铂、紫杉醇等，虽然具有抗肿瘤活性强，药效明显等优势，但同时也有毒副作用大、选择性差等缺点。因此，开发针对食管癌患者抗肿瘤活性强、选择性强的靶向小分子治疗药物具有显著意义。
[0003]研究表明，食管鳞状细胞癌的发生发展与组织细胞中抗氧化应激通路(Nrf2信号通路)过度激活密切相关，过度激活的Nrf2信号通路促进肿瘤细胞的增殖、迁移和耐药，加剧了肿瘤组织的生长和转移，大大降低了食管鳞癌患者的生存期。因此，Nrf2信号通路中的关键调控因子——Nrf2蛋白可能是一个治疗食管鳞癌患者的靶点，针对Nrf2蛋白寻找特异性抑制剂可能是开发靶向治疗食管鳞癌药物的一个可靠思路。
[0004]目前，已报道的针对Nrf2蛋白及其信号通路的抑制剂有很多种，如抑制Nrf2基因转录的化合物THZ
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1，Wogonin，抑制Nrf2蛋白翻译的化合物Brusatol，抑制Nrf2蛋白核转位的化合物Dimethylchalcone，促进Nrf2蛋白降解的化合物Trigonelline、Luteolin等。这些化合物虽然对Nrf2蛋白及其信号通路具有一定的抑制性作用，但同时存在靶向性、特异性不强等问题。例如，对Nrf2蛋白翻译有抑制性作用的化合物Brusatol，是一种广谱的蛋白翻译抑制剂，抑制Nrf2蛋白翻译的同时也抑制多种蛋白的翻译表达，因此对肿瘤细胞缺乏选择性，对正常细胞也有较大的毒副作用，不利于针对Nrf2蛋白靶向抑制剂的研发。
[0005]大多数针对Nrf2抑制剂的开发均采用Luc
‑
细胞筛选模式进行，如化合物Brusatol、Halofuginone等。这种筛选方法仅能针对Nrf2信号通路，并非Nrf2蛋白本身。研究表明，Nrf2信号通路受到多种分子机制的调节，利用Luc
‑
细胞筛选方法可能会筛选到抑制其他信号通路的化合物，存在靶向Nrf2蛋白不足的问题。目前能有效针对食管鳞癌的Nrf2蛋白抑制剂的研究，还未见报道。

技术实现思路

[0006]为克服现有技术中存在的上述缺陷，本专利技术提供了新藤黄酸在制备Nrf2蛋白抑制剂中的应用。
[0007]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0008]本专利技术提供了新藤黄酸在制备Nrf2蛋白抑制剂中的应用。
[0009]优选的，所述Nrf2蛋白来源于食管鳞癌细胞正常株或食管鳞癌细胞突变株。
[0010]优选的，所述食管鳞癌细胞正常株包括KYSE150和ECA
‑
109，所述食管鳞癌细胞突变株包括KYSE180和KYSE70。
[0011]本专利技术还提供了新藤黄酸在制备抑制食管鳞癌细胞增殖的试剂中的应用。
[0012]本专利技术还提供了新藤黄酸在制备促进食管鳞癌细胞凋亡的试剂中的应用。
[0013]本专利技术还提供了新藤黄酸在制备抑制食管鳞癌细胞迁移的试剂中的应用。
[0014]本专利技术还提供了新藤黄酸在制备治疗食管鳞癌的药物中的应用。
[0015]优选的，所述新藤黄酸通过抑制食管鳞癌细胞中Nrf2蛋白与下游靶基因ARE的结合，进而抑制下游靶基因NQO1和HO
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1的表达来发挥作用。
[0016]优选的，所述药物的剂型包括注射剂、散剂、颗粒剂、粉剂、丸剂、口服液或片剂。
[0017]优选的，所述药物还含有药学上可接受的辅料。
[0018]与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下：
[0019]本专利技术从Nrf2蛋白与下游靶基因ARE结合的机制着手，发现新藤黄酸(GNA)对Nrf2蛋白的抑制活性强且靶向性强，进一步对新藤黄酸进行抗肿瘤活性评价和靶点机制验证发现，新藤黄酸对食管鳞癌细胞集落形成具有抑制作用，可以明显促进食管鳞癌细胞的死亡和凋亡，还可以抑制食管鳞癌细胞的迁移，且新藤黄酸对食管鳞癌细胞Nrf2突变株的上述作用要明显强于食管鳞癌细胞Nrf2正常株。本专利技术的实验结果还表明，12mg/Kg新藤黄酸对KYSE150细胞裸鼠移植瘤模型有显著性的抑制作用；新藤黄酸对KYSE150和KYSE70细胞Nrf2蛋白的表达有抑制作用。综上可知，新藤黄酸可作为食管鳞癌的Nrf2蛋白抑制剂发挥抗肿瘤作用，为临床开发食管磷癌靶向治疗药物奠定了基础。
附图说明
[0020]图1为SDS
‑
PAGE凝胶电泳结果图(注：左图为Nrf2蛋白的表达；右图为MafG蛋白的表达)；
[0021]图2为凝胶柱纯化后的结果图(注：左图为Nrf2蛋白；右图为MafG蛋白)；
[0022]图3为构建Nrf2
‑
MafG结合蛋白；
[0023]图4为Nrf2
‑
MafG结合蛋白与5
’‑
FAM
‑
ARE序列的反应情况；
[0024]图5为基于Nrf2
‑
MafG与ARE结合的荧光偏振筛选体系的稳定性和溶剂对筛选体系的影响(注：左图为不同复孔间检测数据的差异；右图为溶剂DMSO对筛选体系的影响)；
[0025]图6为构建Luc
‑
ARE
‑
KYSE150食管癌细胞株(注：左图为构建好的ARE
‑
LUC
‑
KYSE150细胞株；右图为对ARE
‑
LUC
‑
KYSE150细胞和KYSE150细胞的荧光活性检测结果)；
[0026]图7为ARE
‑
LUC
‑
KYSE150细胞模型的筛选结果；
[0027]图8为74个阳性化合物蛋白荧光偏振模型的筛选结果；
[0028]图9为筛选出的9个化合物的结构和名称；
[0029]图10为新藤黄酸对ARE
‑
LUC
‑
KYSE150细胞荧光活性和细胞毒活性的检测结果(注：***表示P<0.001，与同浓度的细胞活力相比具有显著性差异)；
[0030]图11为使用凝胶迁移(EMSA)实验评价阳性化合物对Nrf2
‑
MafG结合蛋白的抑制作用结果；
[0031]图12为细胞集落形成实验结果(注：***表示P<0.001，与同株细胞的零浓度比具有显著性差异；###表示P<0.001，与同浓度处理的KYSE150细胞株比具有显著性差异)；
[0032]图13为AM/PI染色实验结果(注：***表示P<0.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.新藤黄酸在制备Nrf2蛋白抑制剂中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述Nrf2蛋白来源于食管鳞癌细胞正常株或食管鳞癌细胞突变株。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述食管鳞癌细胞正常株包括KYSE150和ECA
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109，所述食管鳞癌细胞突变株包括KYSE180和KYSE70。4.新藤黄酸在制备抑制食管鳞癌细胞增殖的试剂中的应用。5.新藤黄酸在制备促进食管鳞癌细胞凋亡的试剂中的应用。6.新藤黄酸在制备抑制食管鳞癌细...

【专利技术属性】
技术研发人员：张建革，朱玉莹，林国强，赵快乐，
申请(专利权)人：上海中医药大学，
类型：发明
国别省市：