一种骨碎补组培繁育的方法技术

本发明专利技术涉及骨碎补繁育技术领域，具体公开了一种骨碎补组培繁育的方法。本发明专利技术方法包括以下步骤：（1）外植体的选择及处理；（2）灭菌处理；（3）诱导培养；（4）继代培养；（5）生根培养。本发明专利技术方法收集骨碎补野生种质资源，以农艺性状、有效成分含量等指标进行综合评定，选育出株型大、长势旺盛、有效成分含量等指标达到《中华人民共和国药典》规定的优良种质，采集优良种质的根状茎进行组培繁育，可获得遗传稳定性好、苗相一致、移栽成活率高的种苗，可实现工厂化快速繁育，生产成本低，解决种苗繁育难题。解决种苗繁育难题。

【技术实现步骤摘要】
一种骨碎补组培繁育的方法


[0001]本专利技术属于骨碎补繁育
，特别涉及一种骨碎补组培繁育的方法。

技术介绍

[0002]水龙骨科植物槲蕨[Drynaria fortunei（Kunze）J.Sm.]，药材名为骨碎补。《本草纲目》记载：骨碎补，足少阴经药也，故能入骨，入牙，及久泄痢。《中华人民共和国药典》认定：其味苦，温，归肝、肾经，具有疗伤止痛，补肾强骨，外用消风祛斑的功效，主治跌扑闪挫、筋骨折伤、肾虚腰痛、筋骨痿软、耳鸣耳聋、牙齿松动等症。
[0003]骨碎补是我国历代中医方剂的常用药材，是一百多个中成药的核心原料。现代研究表明：骨碎补具有良好的抗骨质疏松、促进骨折愈合、促软骨再生、促进牙齿生长、肾保护作用、抗炎、降血脂、防治中毒性耳聋等活性，还具有延缓衰老、美容养颜等作用，显现出巨大的开发应用前景。
[0004]当前，骨碎补药材基本来源于野生资源，由于市场需求量大，加之骨碎补附生于树上、石壁上，生长缓慢，采挖困难，价格一路飙涨，民间疯狂采挖，导致野生资源日见稀少，其他类似植物的根茎也被充当骨碎补出售，造成了用药的安全隐患，亟需快速繁育出种苗，进行规模化种植。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于选育出株型大、长势旺盛、有效成分含量等指标达到《中华人民共和国药典》要求的优良种质；然后进行种苗繁育，以获得遗传稳定性好、苗相一致、移栽成活率高的种苗，实现工厂化快速繁育，生产成本低，解决种苗繁育难题。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供了一种骨碎补组培繁育的方法，包括如下步骤：（1）分别从广西、贵州、湖南、湖北、江西等地收集骨碎补野生种质资源，以农艺性状、有效成分含量等指标进行综合评定，选育出株型大、长势旺盛、有效成分含量等指标达到《中华人民共和国药典》要求的优良种质；（2）外植体的选择及处理：选择优良种质的幼嫩根状茎作为外植体，将带有生长点的根茎切下，用水冲洗表面泥沙，去除表面绒毛，得到无绒毛的外植体；（3）灭菌处理：用0.1wt％升汞对步骤（2）所述的无绒毛的外植体进行灭菌处理，灭菌时间8～10min，得到灭菌的外植体；（4）诱导培养：将灭菌的外植体转接到诱导培养基中进行培养，培养过程中，每隔9～12天将外植体表面坏死的组织刮掉，并将外植体转接到新的诱导培养基中，直至外植体长出无菌芽；所述诱导培养基为包括1.0～1.5mg/ml BA、0.1mg/mlNAA、30g/L糖、4.0～5.5g/L琼脂的MS培养基；（5）继代培养：将步骤（4）中诱导获得的无菌芽转接到继代培养基中培养25～30天，诱导形成丛生芽；所述继代培养基为包括0.5～1.0mg/ml BA、0.5mg/mlNAA的MS培养基；（6）生根培养：将步骤（5）中诱导形成的丛生芽切分成多个单株，转接到生根培养
基中培养45～60天，即得骨碎补生根苗；所述生根培养基为包括0.2mg/mlIBA、0.5mg/mlNAA、30g/L糖、4.0～5.5g/L琼脂、0.2g/L活性炭的1/2MS培养基。
[0007]进一步地，所述步骤（1）中选择株型大、长势旺盛、有效成分含量等指标达到《中华人民共和国药典》优良种质的幼嫩根状茎作为外植体。
[0008]进一步地，所述步骤（2）中去除外植体表面绒毛前，先在外植体分布有绒毛的位置喷洒绒毛软化去除剂，放置5～8min，再用水冲洗掉外植体表面的绒毛即可；所述绒毛软化去除剂由以下重量份的组分组成：碳酸氢钠6～8份、海藻糖12～15份、氯化钠1～3份、乙醇6～10份、丙醇5～7份、蒸馏水100～120份。
[0009]进一步地，所述步骤（2）中所述绒毛软化脱除剂由以下重量份的组分组成：碳酸氢钠7～8份、海藻糖13～15份、氯化钠2～3份、乙醇7～10份、丙醇6～7份、蒸馏水110～120份。
[0010]进一步地，所述步骤（3）中用0.1wt％升汞对所述的无绒毛的外植体进行灭菌处理，灭菌时间8～10min，得到灭菌的外植体。
[0011]进一步地，所述步骤（4）中将灭菌的外植体转接到诱导培养基中进行培养，培养过程中，每隔9～12天将外植体表面坏死的组织刮掉，并将外植体转接到新的诱导培养基中，直至外植体长出无菌芽；所述诱导培养基为包括1.2～1.5mg/mlBA、0.1mg/mlNAA、30g/L糖、4.5～5.5g/L琼脂的MS培养基。
[0012]进一步地，所述步骤（5）中将步骤（4）中诱导获得的无菌芽转接到继代培养基中培养27～30天，诱导形成丛生芽；所述继代培养基为包括0.7～1.0mg/mlBA、0.5mg/mlNAA的MS培养基。
[0013]进一步地，所述步骤（6）中将丛生芽切分成多个单株，转接到生根培养基中培养48～60天，即得骨碎补生根苗；所述生根培养基为包括0.2mg/mlIBA、0.5mg/mlNAA、30g/L糖、4.7～5.5g/L琼脂、0.2g/L活性炭的1/2MS培养基。
[0014]与现有的技术相比，本专利技术具有如下有益效果：1.本专利技术方法分别从广西、贵州、湖南、湖北、江西等地收集骨碎补野生种质资源，以农艺性状、有效成分含量等指标进行综合评定，选育出株型大、长势旺盛、有效成分含量等指标达到《中华人民共和国药典》要求的优良种质，采集优良种质的根状茎进行组培繁育，可获得遗传稳定性好、苗相一致、移栽成活率高的种苗，可实现工厂化快速繁育，生产成本低，解决种苗繁育难题。
[0015]2.本专利技术的种苗繁育方法不受天气等自然因素的影响，一年四季都可培育种苗，具有很高的推广应用价值。
[0016]本专利技术一种骨碎补组培繁育的方法，去除外植体表面绒毛前，先在外植体分布有绒毛的位置处喷洒绒毛软化去除剂，绒毛软化去除剂由多糖、混合醇、碳酸氢钠等组分组成，可温和作用于绒毛根部，起到软化绒毛、脱除绒毛的作用，外植体表面的绒毛去除得更干净，且能最大限度降低去除绒毛对生长点造成的伤害，提升外植体萌发率，且绒毛软化去除剂具备一定抑菌的效果，提高无菌芽得率。
附图说明
[0017]图1是本专利技术实施例1中继代培养的图片；图2是本专利技术实施例1中丛生芽的图片；
图3是本专利技术实施例1中生根培养的图片。
[0018]图4是本专利技术实施例1中工厂化繁育种苗图片。
具体实施方式
[0019]下面的实施例可以帮助本领域的技术人员更全面地理解本专利技术，但不能以任何方式限制本专利技术。
[0020]本专利技术一种骨碎补组培繁育的方法，下述实施例所用外植体是从广西桂林、贵州毕节、湖南怀化、湖北宜昌、江西赣州收集得到的骨碎补野生种质资源选育的优良种质，其优良种质株型大、长势旺盛、有效成分含量等指标达到了《中华人民共和国药典》要求。
[0021]实施例1一种骨碎补组培繁育的方法，包括如下步骤：（1）外植体的选择及处理：从广西桂林的野生骨碎补中选择株型大、长势旺盛、有效成分含量等指标达到《中华人民共和国药典》要求的优良种质的幼嫩根状茎作为外植体，将带有生长点的根茎切下，用水冲洗表面泥沙，去除外植体表面绒毛本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种骨碎补组培繁育的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）外植体的选择及处理：选择骨碎补幼嫩根状茎作为外植体，将带有生长点的根茎切下，用水冲洗表面泥沙，去除表面绒毛，得到无绒毛的外植体；（2）灭菌处理：用0.1wt％升汞对所述的无绒毛的外植体进行灭菌处理，灭菌时间7～10min，得到灭菌的外植体；（3）诱导培养：将灭菌的外植体转接到诱导培养基中进行培养，培养过程中，每隔9～12天将外植体表面坏死的组织刮掉，并将外植体转接到新的诱导培养基中，直至外植体长出无菌芽；所述诱导培养基为包括1.0～1.5mg/mlBA、0.1mg/mlNAA、30g/L糖、4.0～5.5g/L琼脂的MS培养基；（4）继代培养：将步骤（3）中诱导获得的无菌芽转接到继代培养基中培养25～30天，诱导形成丛生芽；所述继代培养基为包括0.5～1.0mg/mlBA、0.5mg/mlNAA的MS培养基；（5）生根培养：将步骤（4）中诱导形成的丛生芽切分成多个单株，转接到生根培养基中培养45～60天，即得到骨碎补生根苗；所述生根培养基为包括0.2mg/mlIBA、0.5mg/mlNAA、30g/L糖、4.0～5.5g/L琼脂、0.2g/L活性炭的1/2MS培养基。2.根据权利要求1所述的一种骨碎补组培繁育的方法，其特征在于，所述步骤（1）中选择株型大、长势旺盛、有效成分含量等指标达到《中华人民共和国药典》要求的优良种质的幼嫩根状茎作为外植体。3.根据权利要求1所述的一种骨碎补组培繁育的方法，其特征在于，所述步骤（1）中去除外植体表面绒毛前，先在外植体分布有绒毛的位置喷洒绒毛软化去除剂，放置5～8min，再用水冲洗掉外植体表面的绒毛即可；所述绒毛软化去除剂由以下重量份的组...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏钰琴，莫燕兰，蒋臻韬，唐林军，谭忠珍，赵峰，刘娟妤，蒋杰，杨洪元，蒋向军，
申请(专利权)人：桂林亦元生现代生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：