一种病毒保护剂及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物检测技术领域，具体涉及一种病毒保护剂及其应用，具体为在流行病学检测中的应用。该病毒保护剂，包括以下质量百分比的原料：蔗糖1～10％、氯化锌0.01～0.1％、吐温20 0.1～0.3％、D

【技术实现步骤摘要】
一种病毒保护剂及其应用


[0001]本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种病毒保护剂及其应用，具体为在流行病学检测中的应用。

技术介绍

[0002]RNA病毒是一种不具细胞结构，只含一种核酸，必须寄生于活细胞内的非细胞生物，容易发生变异，往往有多种不同的基因型。以轮状病毒为例，病毒基因组由11段分节段的dsRNA组成，分别编码6种结构蛋白(VP)和6种非结构蛋白(NSP)，有三层蛋白衣壳，最外层由VP4和VP7蛋白组成，是RV主要的中和抗原，根据VP4和VP7核苷酸序列的差异，RV的分型是根据P基因型(VP4，蛋白酶敏感)和G基因型(VP7，糖蛋白)来进行分型。目前已经发现的有36种G基因型，51种P基因型。
[0003]目前，世界范围内流行的G
‑
P基因型组合的流行株主要是G1P[8]、G2P[4]、G3P[8]、G4P[8]、G9P[8]和G12P[8]。在我国，因腹泻住院的5岁以下的婴幼儿轮状病毒检测阳性率约为50％，灭活轮状病毒疫苗是一种安全有效地预防儿童因感染轮状病毒所引起疾病的疫苗，疫苗在接种后应该对流行地区的大多数流行株都具有保护作用，因此，对不同地区的RV进行持续的监测十分必要，尤其是引入疫苗之后，也应随时检测流行病学，检测其是否因为疫苗发生血清型的改变与迁移，是否会产生新的血清型。
[0004]在持续的监测过程中，经常会涉及到样品的保存，而现有的病毒保护剂保存时间过久时，样品容易发生降解，一般只能保存几个小时或者几天，远远难以满足流行病监测过程中样本的保存时间，因此，开发一种病毒保护时间长的保护剂对于病毒性流行病的监测具有重要意义。

技术实现思路

[0005]针对现有技术所存在的技术问题，本专利技术的目的之一在于提供一种病毒保护剂，该病毒保护剂能够在常温下保存样品达半年之久，且不影响高通量检测结果。
[0006]本专利技术采用如下技术方案来实现上述技术目的：
[0007]本专利技术提供一种病毒保护剂，包括以下质量百分比的原料：蔗糖1～10％、氯化锌0.01～0.1％、吐温20 0.1～0.3％、D
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山梨醇质量百分比为10％的HBSS溶液8～15％，余量为水。
[0008]可选的，包括以下重量百分比的原料：蔗糖2～5％、氯化锌0.02～0.05％、吐温20 0.2～0.3％、D
‑
山梨醇质量百分比为10％的HBSS溶液15％，余量为水。
[0009]本专利技术的目的之二在于保护上述病毒保护剂在流行病学检测中的应用。
[0010]本专利技术的目的之三在于保护上述病毒保护剂在轮状病毒腹泻样本处理中的应用。
[0011]其中，所述病毒保护剂添加在粪便悬浮液离心后得到的上清中，病毒保护剂的添加量为1
‑
2mL。
[0012]本专利技术的目的之四在于保护一种轮状病毒腹泻样本病毒血清型鉴定方法，包括以
下步骤：步骤一，制备粪便悬浮液，离心，收集上清；步骤二，向上清中加入病毒保护剂；步骤三，采用高通量测序的方法进行测序并分析病毒血清型。
[0013]可选的，还包括采用ELISA试剂盒初步鉴定的步骤，所述ELISA试剂盒鉴定时采用的是步骤一中得到的上清，和/或采用一代测序进行鉴定的步骤，所述一代测序采用的是步骤一中得到的上清或者步骤二中得到的添加了病毒保护剂的上清。
[0014]在流行病学的检测时，可先采用ELISA试剂盒进行第一步的初筛鉴定，之后再采用一代测序技术进行初步分型检测，对于未分型的样品则进一步采用高通测序技术集合生物信息学方法分析，既避免了一代测序通量低，样品要求高，检出效率低的问题，又避免了完全采用高通量测序费用高的问题。
[0015]该方法的准确性已经得到验证确定，将其应用于流行病学监测中，有利于在流行病学监测中发现罕见血清型、罕见血清型组合或新的血清型论病毒，具有良好的应用前景。
[0016]可选的，所述粪便悬浮液为采用TNC缓冲液得到的悬浮液。1
×
TNC(Tris
‑
NaCl
‑
CaCl2)缓冲液配制如下：10mL 1M CaCl2溶液，2.24g Tris(0.02M)和16.38g NaCl(0.28M),使用DEPC水定容至2L，高温灭菌后备用。
[0017]可选的，当步骤一中的粪便来自于尿不湿或尿布时，向其上加入TNC缓冲液，静置后震荡，得到混悬液，使用细胞筛网过滤后即得到粪便悬浮液。其中细胞筛网为100um，BeyoGold
TM
细胞过滤器100μm孔径，采用独立纸塑包装，无菌。
附图说明
[0018]图1、图2为本专利技术实施例1部分样品VP7蛋白基因电泳结果。
具体实施方式
[0019]下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的详细说明，以使本领域的技术人员更加清楚地理解本专利技术。
[0020]以下各实施例，仅用于说明本专利技术，但不止用来限制本专利技术的范围。基于本专利技术中的具体实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的情况下，所获得的其他所有实施例，都属于本专利技术的保护范围。
[0021]在本专利技术实施例中，若无特殊说明，所有原料组分均为本领域技术人员熟知的市售产品；在本专利技术实施例中，若未具体指明，所用的技术手段均为本领域技术人员所熟知的常规手段。
[0022]实施例1
[0023]本实施例提供一种轮状病毒临床样本的基因检测及分型方法，包括以下步骤：
[0024](1)参与Ⅲ期临床试验的205份腹泻病例的粪样或尿不湿样品的收集及处理
[0025]粪样的处理：取适量粪便样品置于离心管中，加入1
×
TNC缓冲液，制备得到10％(质量/体积)的粪便悬浮液，漩涡震荡，5000rpm离心5min，收集上清至冻存管中；
[0026]尿不湿样品的处理：将盛放有尿不湿/尿不湿样品的粪便收集盒从冷冻冰箱中取出，向各个粪便盒中加入1
×
TNC缓冲液5～10mL，旋紧粪便盒盖后静止放置10min，将粪便盒放置在漩涡震荡仪上震荡1min，使粪便盒内呈混悬液状态(使用无菌镊子或者无菌注射器等对溶胀后的尿不湿样品进行挤压)，使用一次性细胞筛网过滤，将粪便盒内的混悬液通过
筛网进入到离心管中，5000rpm离心5min，取上清。
[0027](2)通过ProSpecT
TM
轮状病毒ELISA检测试剂盒检测，收集并整理呈轮状病毒阳性的样品。
[0028](3)样品RNA提取及一代测序
[0029]使用病毒RNA提取试剂盒QIAamp Viral RNAMini Kit(购于美国QIAGEN公司，货号：52906)抽提各临床样品的病毒总RNA；使用一步法逆转录PCR试剂盒PrimeScript II High Fidelity One Step RT
‑
PCR Kit(购于Takara公司，货号：R026A)进行一步本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种病毒保护剂，其特征在于，包括以下质量百分比的原料：蔗糖1～10％、氯化锌0.01～0.1％、吐温20 0.1～0.3％、D
‑
山梨醇质量百分比为10％的HBSS溶液8～15％，余量为水。2.根据权利要求1所述的病毒保护剂，其特征在于，包括以下重量百分比的原料：蔗糖2～5％、氯化锌0.02～0.05％、吐温20 0.2～0.3％、D
‑
山梨醇质量百分比为10％的HBSS溶液15％，余量为水。3.权利要求1～2任一项所述的病毒保护剂在流行病学检测中的应用。4.权利要求1～2任一项所述的病毒保护剂在轮状病毒腹泻样本处理中的应用。5.根据权利要求4所述的病毒保护剂在轮状病毒腹泻样本处理中的应用，其特征在于，所述病毒保护剂添加在粪便悬浮液离心后得到的上清中。6.根据权利要求5所述的病毒保护剂在轮状病毒腹泻样本处理中的应用，其特征在于，病毒保护剂的添加量为1
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：杨晓明，邹文琪，王英，李庆亮，石晨，陈红，阮波，白萱，杨彪，张久威，姜志军，董犇，段凯，李新国，王泽鋆，徐葛林，
申请(专利权)人：武汉生物制品研究所有限责任公司，
类型：发明
国别省市：