一种有效去除杂质的噬菌体裂解酶源饲料添加剂制备方法技术

本发明专利技术涉及饲料添加剂技术领域，且公开了一种有效去除杂质的噬菌体裂解酶源饲料添加剂制备方法，包括以下步骤：S1：制备培养基，把MgSO47H2O、KH2PO4、NaCl、啤酒酵、酵母浸粉、葡萄糖、盐酸硫胺素、木质素粉和麸皮放入混合罐中搅拌混合，得到培养基；S2：制备噬菌体储备液，以制备的培养基为原料，加入氯化钙、氯化镁、香蕉泥、活性炭进行混合，制备噬菌体储备液；S3：制备辅料。本发明专利技术通过氯化钙、氯化镁、香蕉泥、活性炭的加入能够使其相互发生反应，在去除异味和杂质的同时能够使其更加有营养，提高培养效率，通过除杂处理能够控制加入原料的杂质，防止其杂质影响培养基的培养和发酵，提高除杂效果。高除杂效果。高除杂效果。

【技术实现步骤摘要】
一种有效去除杂质的噬菌体裂解酶源饲料添加剂制备方法


[0001]本专利技术涉及饲料添加剂
，具体为一种有效去除杂质的噬菌体裂解酶源饲料添加剂制备方法。

技术介绍

[0002]噬菌体是感染细菌的特异性病毒，同时也是地球上数量最多、种类最多的生物实体，据估计生物圈中噬菌体的数量高达1031，由噬菌体侵染裂解导致的细菌死亡率可占总体死亡率的20
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40％。因此，噬菌体对生物地球化学循环有相当大的影响。噬菌体的生命史包括裂解周期和溶源周期。进入裂解周期的噬菌体，在侵染宿主后，会利用宿主物质大量合成组装子代噬菌体，并裂解宿主细胞释放子代病毒。
[0003]噬菌体在宿主细胞中生长繁殖，能够引起致病菌的裂解，降低致病菌的密度，从而减少或避免致病菌感染或发病的机会，达到治疗和预防疾病的目的，即噬菌体疗法。此疗法已广泛应用于兽医、农业和食品微生物学等领域，国内养殖业尤其是养鸡业常常受到畜禽肠道腹泻病的困扰，此病主要是由大肠杆菌、沙门氏菌等致病微生物引起。随着耐药性细菌的大量出现，用具有专一性强、不易产生抗性等优点的相关噬菌体来治疗细菌疾病受到重视。Smith和Barrow等利用噬菌体疗法可以降低羊羔、仔猪和雏鸡患大肠杆菌肠道疾病的机率，目前的噬菌体裂解酶源饲料添加剂在制备的过程中存在很多杂质，影响整体使用效果，而且成本高，不能满足人们的要求，因此提出一种有效去除杂质的噬菌体裂解酶源饲料添加剂制备方法。

技术实现思路

[0004](一)解决的技术问题
[0005]针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种有效去除杂质的噬菌体裂解酶源饲料添加剂制备方法，解决了目前的噬菌体裂解酶源饲料添加剂在制备的过程中存在很多杂质，影响整体使用效果，而且成本高，不能满足人们的要求的问题。
[0006](二)技术方案
[0007]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0008]一种有效去除杂质的噬菌体裂解酶源饲料添加剂制备方法，包括以下步骤：
[0009]S1：制备培养基，把MgSO47H2O、KH2PO4、NaCl、啤酒酵、酵母浸粉、葡萄糖、盐酸硫胺素、木质素粉和麸皮放入混合罐中搅拌混合，得到培养基；
[0010]S2：制备噬菌体储备液，以制备的培养基为原料，加入氯化钙、氯化镁、香蕉泥、活性炭进行混合，并捞去漂浮在上层的漂浮物，制备噬菌体储备液；
[0011]S3：制备辅料，先培养噬菌体，噬菌体成产菌种，并对其进行裂解处理，收集裂解液备用，噬菌体储备液经过诱导后在进行灭菌处理，处理后备用，诱导时加入诱导缓冲液进行诱导，诱导缓冲液的加入量为110
‑
180mol/L的Na2HPO4、120
‑
200mmol/L CaCl2和66
‑
150mmol/L MgCl2；
[0012]S4：扩培发酵，以噬菌体裂解液和诱导灭菌后的噬菌体储备液为原料，先对菌种进行斜面扩培处理，扩培时加入噬菌体储备液，然后放入茄瓶种子中进行扩培处理，处理后放入种子发酵罐中进行发酵处理，发酵后再次放入发酵罐中二次发酵；
[0013]S5：除杂，在进行扩培发酵时每次加入噬菌体裂解液和诱导灭菌后的噬菌体储备液时均要进行过滤除杂处理，并控制加入量；
[0014]S6：离心回收，在二次发酵后对其进行离心处理，离心时采用微滤加超滤的纯化浓缩膜过滤，然后收集菌体，收集菌体剩下的离心液回收，回收液当做噬菌体储备液备用；
[0015]S7：纯化浓缩，把离心后收集的菌体进行纯化浓缩，浓缩活菌泥；
[0016]S8：混合吸附，然后进行混合吸附，吸附时采用特有载体凝胶进行配合吸附；
[0017]S9：干燥粉碎，把吸附后的物料放入干燥室中进行干燥，干燥后粉碎处理，粉碎的同时进行多次过滤除杂再粉碎处理，得到饲料添加剂成品。
[0018]作为本专利技术再进一步的方案，所述S1在制备培养基时，缓慢加入葡萄糖、盐酸硫胺素，在加入时边搅拌边加入。
[0019]进一步的，所述S2中在制备噬菌体储备液时加入BSA、香菇多糖、灵芝多糖、茶多酚进行混合。
[0020]在前述方案的基础上，所述S4中进行扩培时对其进行加热，加热温度为30
‑
40摄氏度，然后进行间歇搅拌处理。
[0021]进一步的，所述S5中除杂时通过普通过滤纱网进行过滤处理，过滤的杂质收集备用。
[0022]在前述方案的基础上，所述S6中离心液进行回收时对其进行再次过滤，去除大颗粒杂质。
[0023](三)有益效果
[0024]与现有技术相比，本专利技术提供了一种有效去除杂质的噬菌体裂解酶源饲料添加剂制备方法，具备以下有益效果：
[0025]1、本专利技术通过氯化钙、氯化镁、香蕉泥、活性炭的加入能够使其相互发生反应，在去除异味和杂质的同时能够使其更加有营养，提高培养效率。
[0026]2、本专利技术中，通过二次扩培处理能够大大提高产量，而且进行二次发酵处理，同一个发酵罐多菌种发酵工艺，解决了单一菌种发酵投资大生产效率低的问题。
[0027]3、本专利技术中，通过在进行扩培发酵时每次加入噬菌体裂解液和诱导灭菌后的噬菌体储备液时均要进行过滤除杂处理，除杂处理能够控制加入原料的杂质，防止其杂质影响培养基的培养和发酵，提高除杂效果。
[0028]4、本专利技术中，采用微滤加超滤的纯化浓缩膜过滤，能更有效的除杂和保存噬菌体的完整结构，不仅能分离溶液中的小分子蛋白及其他各种营养物质还能有效提高目标物浓度延长保质期限，经过发酵、除杂、纯化浓缩的工序能有效去除有害杂质提高目标物的含量并能长期保持生物活性，在提高生产效率的同时有效降低生产成本，采用特有载体凝胶吸附，解决了噬菌体易失活的问题，延长了噬菌体的保存期。
附图说明
[0029]图1为本专利技术提出的一种有效去除杂质的噬菌体裂解酶源饲料添加剂制备方法的
流程结构示意图。
具体实施方式
[0030]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0031]实施例1
[0032]参照图1，一种有效去除杂质的噬菌体裂解酶源饲料添加剂制备方法，包括以下步骤：
[0033]S1：制备培养基，把MgSO47H2O、KH2PO4、NaCl、啤酒酵、酵母浸粉、葡萄糖、盐酸硫胺素、木质素粉和麸皮放入混合罐中搅拌混合，得到培养基，S1在制备培养基时，缓慢加入葡萄糖、盐酸硫胺素，在加入时边搅拌边加入；
[0034]S2：制备噬菌体储备液，以制备的培养基为原料，加入氯化钙、氯化镁、香蕉泥、活性炭进行混合，并捞去漂浮在上层的漂浮物，制备噬菌体储备液，通过氯化钙、氯化镁、香蕉泥、活性炭的加入能够使其相互发生反应，在去除异味和杂本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种有效去除杂质的噬菌体裂解酶源饲料添加剂制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：制备培养基，把MgSO47H2O、KH2PO4、NaCl、啤酒酵、酵母浸粉、葡萄糖、盐酸硫胺素、木质素粉和麸皮放入混合罐中搅拌混合，得到培养基；S2：制备噬菌体储备液，以制备的培养基为原料，加入氯化钙、氯化镁、香蕉泥、活性炭进行混合，并捞去漂浮在上层的漂浮物，制备噬菌体储备液；S3：制备辅料，先培养噬菌体，噬菌体成产菌种，并对其进行裂解处理，收集裂解液备用，噬菌体储备液经过诱导后在进行灭菌处理，处理后备用，诱导时加入诱导缓冲液进行诱导，诱导缓冲液的加入量为110
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180mol/L的Na2HPO4、120
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200mmol/L CaCl2和66
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150mmol/L MgCl2；S4：扩培发酵，以噬菌体裂解液和诱导灭菌后的噬菌体储备液为原料，先对菌种进行斜面扩培处理，扩培时加入噬菌体储备液，然后放入茄瓶种子中进行扩培处理，处理后放入种子发酵罐中进行发酵处理，发酵后再次放入发酵罐中二次发酵；S5：除杂，在进行扩培发酵时每次加入噬菌体裂解液和诱导灭菌后的噬菌体储备液时均要进行过滤除杂处理，并控制加入量；S6：离心回收，在二次发酵后对其进行离心处理，离心时采用微滤加超滤的纯化浓缩膜过滤，然...

【专利技术属性】
技术研发人员：张魏魏，陈刚，董俊，戴青，陈冠雄，邹益东，
申请(专利权)人：宜兴市天石饲料有限公司，
类型：发明
国别省市：