一种快速分离鉴定苹果属植物叶片中类黄酮物质的方法技术

本发明专利技术提供了一种快速分离鉴定苹果属植物叶片中类黄酮物质的方法，包括如下步骤：利用超声波萃取技术提取不同苹果属植物叶片中的类黄酮物质；通过超高液相色谱飞行时间质谱联用技术检测类黄酮组分；建立苹果属植物类黄酮组分的标准图谱；对需鉴定的苹果属植物叶片进行前两步的操作，之后与第三步骤中得到的标准图谱进行比对，进而完成分离鉴定。本发明专利技术可以有效的提取和检测苹果属植物中复杂的类黄酮物质，减少同分异构体离子干扰的影响。本申请提取检测方法可靠，快速高效，图谱清晰，重复性好，结果可靠，可检测低浓度样本，高通量复杂样本分析，为苹果属植物代谢组学研究提供技术范畴，是一套适用于苹果属植物类黄酮物质分析的检测技术。的检测技术。的检测技术。

【技术实现步骤摘要】
一种快速分离鉴定苹果属植物叶片中类黄酮物质的方法


[0001]本专利技术涉及植物天然代谢产物分析
，尤其是涉及一种快速分离鉴定苹果属植物叶片中类黄酮物质的方法。

技术介绍

[0002]苹果属(Malus Mill.)植物是蔷薇科(Rosaceae)中经济价值比较高的一类植物，苹果属植物中具有丰富的类黄酮物质，这些类黄酮物质有着很好的生物活性，如抗氧化、抗炎和抗癌等功效。到目前为止，快速分离准确鉴定苹果属植物叶片观赏海棠类黄酮物质生物活性成分的研究较少。本专利选取不同地区的原产中国苹果属植物观赏海棠作为实验材料，利用UPLC
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Q
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TOF
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MS技术，专利技术了一种快速分离鉴定苹果属植物叶片中类黄酮物质的方法，同时建立了苹果属植物的标准图谱。该研究方法不仅为苹果属植物资源利用提供有力的数据支持，而且还能为苹果属植物在食品、医药和保健品开发方面的研究提供理论依据和实践价值。
[0003]公开于该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在加深对本专利技术的总体
技术介绍
的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域技术人员所公知的现有技术。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种快速分离鉴定苹果属植物叶片中类黄酮物质的方法，以解决现有技术中存在的问题。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0006]本专利技术提供一种快速分离鉴定苹果属植物叶片中类黄酮物质的方法，包括如下步骤：
>[0007]S1：利用超声波萃取技术提取不同苹果属植物叶片中的类黄酮物质；
[0008]S2：通过超高液相色谱飞行时间质谱联用技术检测类黄酮组分；
[0009]S3：建立苹果属植物类黄酮组分的标准图谱；
[0010]S4：对需鉴定的苹果属植物叶片进行步骤S1和步骤S2的操作，之后与步骤S3中得到的所述标准图谱进行比对，进而完成分离鉴定。
[0011]优选地，所述超声波萃取技术中样品量与提取液的比例为：1g样品使用4mL提取液；所述提取液的体积配比为甲醇：甲酸：水＝80:1:19；超声波萃取水浴温度为45℃，时间为60min。
[0012]优选地，步骤S2中检测类黄酮组分时样品温度为15℃；柱温为40℃；流速为0.5mL/min；进样量为0.4μL。
[0013]优选地，步骤S2中流动相A采用体积比为0.1％的甲酸水；流动相B采用色谱纯乙腈：0min 10％B，4.5min 19％B，9.5min 32％B，10.5min35％B，11.5min 65％B，14min 95％B。
[0014]优选地，步骤S2中分析柱平衡时间为1min；平衡：14min 95％B；15min，10％B；检测
波长为：200nm
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400nm。
[0015]优选地，步骤S2的检测条件为：离子源模式为电喷雾离子源；毛细管电压为0.45Kv，数据采集质量范围为100
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1200m/z，扫描时间为0.2s，采用高纯的氮气作为辅助喷雾电离与脱溶剂气体，氮气干燥温度：500℃，氮气流速：800L/h，雾化气压：241.3kPa；毛细管电压：2kV，毛细管出口电压：40V；八级射频电压振幅：150Vpp；skim 1电压：37.5V，skim 2电压：6.0V；cap exit offset,74.3V。
[0016]采用上述技术方案，本专利技术具有如下有益效果：
[0017]本专利技术可以有效的提取和检测苹果属植物中复杂的类黄酮物质，减少同分异构体离子干扰的影响。本申请提取检测方法可靠，快速高效，图谱清晰，重复性好，结果可靠，可检测低浓度样本，高通量复杂样本分析，为苹果属植物代谢组学研究提供技术范畴，是一套适用于苹果属植物类黄酮物质分析的检测技术。
附图说明
[0018]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单的介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0019]图1为山定子叶片的类黄酮组分的图谱；
[0020]图2为毛山定子叶片的类黄酮组分的图谱；
[0021]图3为丽江山定子叶片的类黄酮组分的图谱；
[0022]图4为锡金海棠叶片的类黄酮组分的图谱。
具体实施方式
[0023]下面将结合附图对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0024]本专利技术材料的采集为：试材选自从全国范围内采的苹果属植物的叶片，放入液氮中冷冻，然后置于
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80℃冰箱保存，用于类黄酮组分测定。
[0025]本专利技术实验主要仪器与设备如下：
[0026]ACQUITY超高效液相色谱(UPLC)分析系统，购自美国Waters公司；Xevo G2
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S QTof高分辨四级杆飞行时间质谱仪，配有lockspray接口(美国Waters公司)、电喷雾离子源(ESI源)，购自美国Waters公司；ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1
×
100mm，1.7μm)，购自美国Waters公司。
[0027]本专利技术样品的制备方法如下：
[0028]将经液氮速冻后的苹果属植物叶片放入研钵中，加入液氮迅速研磨成粉末；将所述粉末使用千分之一的电子天平称取1g转入4mL离心管中，加入花色苷提取液1mL(体积比：甲醇：甲酸：水：80:1:19)，之后在45℃的水浴中超声提取60min,(注意先预热到45℃)；将提取的所述花色苷提取液进行纯化处理，使用离心机(12000转速/min)离心10min，得到上清液后，使用0.22μm微孔滤膜对上清液进行过滤后待测。
[0029]超高液相色谱检测条件如下：
[0030]样品温度15℃；柱温40℃；流速0.5mL/min；进样量为0.4μL；流动相梯度，其中流动相A采用0.1％(体积比)甲酸水；流动相B采用色谱纯乙腈：0min 10％B，4.5min 19％B，9.5min 32％B；10.5min 35％B；11.5min 65％B；14min 95％B；柱子平衡时间1min；平衡：14min 95％B；15min，10％B。检测波长：350nm；280nm，200nm
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400nm。(甲酸、乙腈均为100％色谱纯，用水为18.2M的去离子水)
[0031]飞行时间质谱检测条件：
[0032]Q
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Tof
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MS的检测条件为：离子源模式为，电喷雾离子源(ESI
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速分离鉴定苹果属植物叶片中类黄酮物质的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：利用超声波萃取技术提取不同苹果属植物叶片中的类黄酮物质；S2：通过超高液相色谱飞行时间质谱联用技术检测类黄酮组分；S3：建立苹果属植物类黄酮组分的图谱；S4：对需鉴定的苹果属植物叶片进行步骤S1和步骤S2的操作，之后与步骤S3中得到的所述图谱进行比对，进而完成分离鉴定。2.根据权利要求1所述的快速分离鉴定苹果属植物叶片中类黄酮物质的方法，其特征在于，所述超声波萃取技术中样品量与提取液的比例为：1g样品使用4mL提取液；所述提取液的体积配比为甲醇：甲酸：水＝80:1:19；超声波萃取水浴温度为45℃，时间为60min。3.根据权利要求1所述的快速分离鉴定苹果属植物叶片中类黄酮物质的方法，其特征在于，步骤S2中检测类黄酮组分时样品温度为15℃；柱温为40℃；流速为0.5 mL/min；进样量为0.4μL。4.根据权利要求1所述的快速分离鉴定苹果属植物叶片中类黄酮物质的方法，其特征在于，步骤S2中流动相A采用体积比为0.1％的甲酸水；流动相B采用色谱纯乙腈：0 min ...

【专利技术属性】
技术研发人员：姚允聪，秦晓晓，邢云峰，张杰，孙悦，赵静雅，
申请(专利权)人：北京农学院，
类型：发明
国别省市：