一种测定铁皮石斛中2,4-表芸苔素内酯含量的方法技术

本发明专利技术提供了一种测定铁皮石斛中2,4

【技术实现步骤摘要】
一种测定铁皮石斛中2,4
‑
表芸苔素内酯含量的方法


[0001]本专利技术涉及农药残留检测
，尤其涉及一种测定铁皮石斛中2,4
‑
表芸苔素内酯含量的方法。

技术介绍

[0002]铁皮石斛(Dendrobium officinale KimuraetMigo)为我国最早记录的兰科草本植物之一，是一种药食两用的中药材，有“千金草”、“神仙草”之称，具有益胃生津、滋阴清热、轻身延年等功效。铁皮石斛含量成分复杂，内含多糖、黄酮以及多酚等活性成分；其主要功效具有降血糖、降血脂、保护胃肠道功能、提高机体免疫力、抗肿瘤等。因野生铁皮石斛产量低，已列入《国家重点保护野生植物名录(第一批)》，现多以人工种植为主。
[0003]芸苔素内酯的化学式为C
28
H
48
O6(如图1中的(a))是一种新型绿色环保植物生长调节剂，属于第六类植物生长调节剂，其在低浓度下，可以显著增加植物营养体生长和促进受精作用。芸苔素内酯在天然化合物中含量极低且提取工艺较为繁杂，无法满实际生产需求，因此人工合成芸苔素内酯已成为趋势。目前在我国已登记的合成芸苔素内酯中，2,4
‑
表芸苔素内酯(如图1中的(b))因合成效率高、生物活性好、成本低而应用最为广泛。
[0004]随着2,4
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表芸苔素内酯在铁皮石斛种植中广泛使用，农药滥用现象时有发生，铁皮石斛安全性问题也越来越受关注。但2,4
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表芸苔素内酯不含共轭结构以及光电响应基团，采用常规紫外检测器或荧光检测器对其含量进行检测具有诸多困难与不便。随着仪器技术不断推陈出新，高效液相色谱检测技术以及气相色谱法在分析检测领域中广泛应用，但对2,4
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表芸苔素内酯进行检测前往往需要衍生化处理，操作复杂，且柱上衍生化有时会损伤色谱柱。此外，铁皮石斛中成分复杂，受生长环境影响其品质差异较大，有关2,4
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表芸苔素内酯在铁皮石斛中残留分析目前未见报道。因此，如何实现铁皮石斛中2,4
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表芸苔素内酯的简单和灵敏检测，是目前亟需解决的问题。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种测定铁皮石斛中2,4
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表芸苔素内酯含量的方法，本专利技术提供的方法操作简单且灵敏度高。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]本专利技术提供了一种测定铁皮石斛中2,4
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表芸苔素内酯含量的方法，包括以下步骤：
[0008]将铁皮石斛、乙腈与水混合进行超声提取，将所得超声提取体系与NaCl和MgSO4混合进行涡旋提取，将所得涡旋提取体系分层得到水相与乙腈相，去除所述乙腈相中溶剂得到第一剩余物，以丙酮
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正己烷溶液为复溶剂将所述第一剩余物进行第一复溶，得到第一复溶液；
[0009]以丙酮
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正己烷溶液为洗脱剂，采用C
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固相萃取小柱对所述第一复溶液进行净化，去除所得净化液中溶剂得到第二剩余物，采用乙腈对所述第二剩余物进行第二复溶，所得
第二复溶液作为待测液；
[0010]将所述待测液进行高效液相色谱
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串联质谱检测，得到待测液的色谱图；
[0011]根据2,4
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表芸苔素内酯的铁皮石斛空白基质标准曲线以及待测液的色谱图，得到铁皮石斛中2,4
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表芸苔素内酯的含量；
[0012]所述高效液相色谱
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串联质谱检测的高效液相色谱条件包括：
[0013]流动相体系包括流动相A和流动相B，所述流动相A为甲醇，所述流动相B为甲酸
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甲酸铵
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水溶液，所述流动相B中甲酸的体积分数为0.1％，甲酸铵的浓度为2～5mmol/L；采用梯度洗脱程序，所述梯度洗脱程序为：0～0.5min，所述流动相A的体积分数保持10％；0.5～2.5min，所述流动相A的体积分数由10％增加至92％；2.5～4.0min，所述流动相A的体积分数保持92％；4.0～4.01min，所述流动相A的体积分数由92％降低至10％；4.01～5.5min，所述流动相A的体积分数保持10％。
[0014]优选地，进行所述超声提取时，所述铁皮石斛、乙腈与水的用量比为10g：(10～20)mL：(4～6)mL。
[0015]优选地，所述超声提取的温度为15～40℃，时间为13～30min，功率为220～280Hz。
[0016]优选地，所述NaCl、MgSO4与超声萃取所用乙腈的用量比为(1.3～1.7)g：(5～7)g：(10～20)mL。
[0017]优选地，所述涡旋提取的温度为15～40℃，时间为1.5～2.5min。
[0018]优选地，所述复溶剂和洗脱剂中丙酮与正己烷的体积比独立地为6:4～8:2。
[0019]优选地，所述复溶剂、洗脱剂与铁皮石斛的用量比为(1.5～2.5)mL：(20～25)mL：10g。
[0020]优选地，所述C
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固相萃取小柱为Cleanert PestiCarb/NH2小柱、Oasis HLB小柱、Cleanert PEP
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2小柱、Cleanert TPH小柱或Cleanert NANO小柱。
[0021]优选地，所述高效液相色谱条件还包括：
[0022]流动相体系的流速为0.4mL/min，色谱柱为C
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柱，柱温箱的温度为40℃，进样体积为2.0μL。
[0023]优选地，所述高效液相色谱
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串联质谱检测的质谱条件包括：
[0024]电离方式为ESI
+
，采用MRM多反应监测；毛细管电压为4.0kV；鞘气温度为350℃；鞘气气流量为11L/min。
[0025]本专利技术提供了一种测定铁皮石斛中2,4
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表芸苔素内酯含量的方法，本专利技术以乙腈与水为提取剂，将超声提取与涡旋提取联用，提取后再经固相萃取小柱净化，使样品基质效应降低，相较常规衍生化处理操作简单；本专利技术在流动相中添加适量甲酸铵，可以提高2,4
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表芸苔素内酯电离效率，进而保证所得待测液适用于高效液相色谱
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串联质谱(HPLC
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MS/MS)检测，经外标法定量检出，最终能够实现铁皮石斛中2,4
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表芸苔素内酯的简单、快速、灵敏测定，对铁皮石斛用药安全有重要意义。实施例的结果显示，采用本专利技术提供的方法对铁皮石斛中2,4
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表芸苔素内酯进行检测，2,4
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表芸苔素内酯在0.0005～1mg/L浓度范围内呈良好的线性关系，2,4
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表芸苔素内酯的平均回收率为81.9～103.2％，变异系数为1.1～9.4％，检测限为0本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种测定铁皮石斛中2,4
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表芸苔素内酯含量的方法，包括以下步骤：将铁皮石斛、乙腈与水混合进行超声提取，将所得超声提取体系与NaCl和MgSO4混合进行涡旋提取，将所得涡旋提取体系分层得到水相与乙腈相，去除所述乙腈相中溶剂得到第一剩余物，以丙酮
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正己烷溶液为复溶剂将所述第一剩余物进行第一复溶，得到第一复溶液；以丙酮
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正己烷溶液为洗脱剂，采用C
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固相萃取小柱对所述第一复溶液进行净化，去除所得净化液中溶剂得到第二剩余物，采用乙腈对所述第二剩余物进行第二复溶，所得第二复溶液作为待测液；将所述待测液进行高效液相色谱
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串联质谱检测，得到待测液的色谱图；根据2,4
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表芸苔素内酯的铁皮石斛空白基质标准曲线以及待测液的色谱图，得到铁皮石斛中2,4
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表芸苔素内酯的含量；所述高效液相色谱
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串联质谱检测的高效液相色谱条件包括：流动相体系包括流动相A和流动相B，所述流动相A为甲醇，所述流动相B为甲酸
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甲酸铵
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水溶液，所述流动相B中甲酸的体积分数为0.1％，甲酸铵的浓度为2～5mmol/L；采用梯度洗脱程序，所述梯度洗脱程序为：0～0.5min，所述流动相A的体积分数保持10％；0.5～2.5min，所述流动相A的体积分数由10％增加至92％；2.5～4.0min，所述流动相A的体积分数保持92％；4.0～4.01min，所述流动相A的体积分数由92％降低至10％；4.01～5.5min，所述流动相A的体积分数保持10％。2.根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆兰菲，张昌朋，王强，赵学平，方楠，王晓梅，雷圆，叶会，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：