EDA-A2蛋白作为结直肠癌血清生物标志物的应用制造技术

本申请提供了一种EDA

【技术实现步骤摘要】
EDA
‑
A2蛋白作为结直肠癌血清生物标志物的应用


[0001]本申请涉及一种EDA
‑
A2蛋白作为结直肠癌血清生物标志物的应用。

技术介绍

[0002]目前，结直肠癌筛查的方式主要为肠镜、CT检查、磁共振检查等。其中肠镜是临床上常用的结直肠癌筛查方式，通过肠镜可以明确了解结直肠肠壁的情况，同时配合对病变部位进行的病理活检可以明确诊断。但是肠镜检查需要专业的仪器设备和专门的操作人员，且费用贵，检查前要求多。而CT检查存在射线，磁共振检查价格较高，且对于早期体积较小的肿瘤容易漏诊，因此，CT和磁共振检查不适用于反复检查和人群普查。此外，还有一些其他筛查结直肠癌的方法，如癌胚抗原(CEA)、CA199、CA724、CA125等，但由于其假阳性率高、灵敏度低，目前仍需进一步研究。
[0003]血清肿瘤标志物是指伴随肿瘤出现，含量增加的糖类抗原、激素、受体、酶或代谢产物形式的蛋白质、癌基因、抑癌基因及其相关产物。这些成分由肿瘤细胞产生和分泌到血清中而被检测到，能在一定程度上反映体内肿瘤的存在。这些标志物可以用于癌症的筛查、诊断和预后监测。临床上用于结直肠癌诊断的生物标志物缺乏，尤其是非侵入性的生物标志物的发现意义重大。

技术实现思路

[0004]本申请的目的在于提供一种EDA
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A2蛋白作为结直肠癌血清生物标志物的应用。
[0005]本申请的目的是通过以下技术方案实现的：
[0006]一种EDA
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A2蛋白作为结直肠癌血清生物标志物用于非诊断目的的结直肠癌判断。
[0007]一种结直肠癌血清生物标志物，包括EDA
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A2蛋白。
[0008]上述EDA
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A2蛋白为人的EDA
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A2蛋白。
[0009]一种结直肠癌血清生物标志物试剂盒，用于检测上述的结直肠癌血清生物标志物，包括EDA
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A2蛋白的免疫球蛋白G抗体。
[0010]上述结直肠癌血清生物标志物试剂盒，还包括定量芯片、样品稀释液、20
×
洗液I、20
×
洗液II、标准品混合物、Cy3
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链霉亲和素、玻片清洗和干燥器、密封条。
[0011]一种如权利上述的结直肠癌血清生物标志物的检测方法，包括以下步骤：
[0012]a)获取血清样本；
[0013]b)检测血清样本
[0014]b1)定量芯片干燥
[0015]将定量芯片从盒子中取出来，在室温放置20
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30min后，将包装袋打开，揭开密封条，然后将定量芯片放在干燥器或者室温干燥1
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2小时；
[0016]b2)标准品的配置
[0017]b21)添加500μL的样品稀释液到标准品混合物的小管中，重新溶解标准品混合物。打开小管前，先快速的离心，轻轻的上下吹打溶解粉末，标记这个小管为Std 1；
[0018]b22)分别标记6个干净的离心管为Std2、Std3、Std4、Std5、Std6、Std7，添加200μL的样品稀释液到每个离心管中；
[0019]b23)从标记为Std 1的离心管中抽取100μL样品稀释液加入到标记为Std2的离心管中轻轻混合，然后从标记为Std 2的离心管中抽取100μL样品稀释液加入到标记为Std 3的离心管中，依次类推，如此梯度稀释至标记为Std7的离心管中，得到标准液；
[0020]b24)从标记为Std7的离心管中抽取100μL的标准液到另一个新的离心管中，标记为CNTRL，作为阴性对照；
[0021]b3)定量芯片的操作流程
[0022]b31)在定量芯片的每个孔中加入100μL的样品稀释液，室温摇床上孵育1h，封闭定量芯片；
[0023]b32)、抽去每个孔中的样品稀释液，从标记为CNTRL的离心管中取80μL的标准液与血清样本一起添加到孔中，4℃过夜孵育；
[0024]b33)清洗定量芯片，首先用1
×
洗液I进行清洗，每孔250μL的1
×
洗液I，清洗10次，每次震荡10s，震荡强度选择高，用去离子水稀释20
×
洗液I,然后换用1
×
洗液II对通道进行清洗，每孔250μL的1
×
洗液II，清洗6次，每次震荡10s，震荡强度选择高，用去离子水稀释20
×
洗液II；
[0025]b34)EDA
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A2蛋白的免疫球蛋白G抗体的孵育,离心装有EDA
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A2蛋白的免疫球蛋白G抗体的小管，然后加入1.4ml的样品稀释液，混合均匀后再次快速离心，然后添加80μL的EDA
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A2蛋白的免疫球蛋白G抗体到每个孔中，RT摇床上孵育2小时；
[0026]b35)清洗，同步骤b33)；
[0027]b36)Cy3
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链霉亲和素的孵育,离心装有Cy3
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链霉亲和素的小管，然后加入1.4ml的样品稀释液，混合均匀后再次快速离心，添加80μL的Cy3
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链霉亲和素到每个孔中，用铝箔纸包住定量芯片避光孵育，RT摇床上孵育1个小时；
[0028]b37)清洗，同步骤b33)；
[0029]b38)荧光检测,采用激光扫描仪扫描信号，采用Cy3或者绿色通道；
[0030]b39)采用QAH
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CUST的数据分析软件来进行数据分析，获得每例血清样本中EDA
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A2蛋白的含量。
[0031]本申请的可选方案既可以作为独立的方案，也可以相互组合。本申请的任意一个方案中的结构，既可以作为独立的技术方案，也可以与其他技术方案相互组合。
[0032]本申请的有益之处在于：提供了一种EDA
‑
A2蛋白作为结直肠癌血清生物标志物的应用，用于非诊断目的的结直肠癌判断中，提高了结直肠癌血清筛查的灵敏度和特异度。
附图说明
[0033]图1为本申请实施例1中各类样本中EDA
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A2蛋白含量及差异性；
[0034]图2为本申请实施例1中健康
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晚期结直肠癌患者EDA
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A2蛋白的ROC曲线。
具体实施方式
[0035]本申请所用的术语“ROC曲线”或“ROC图”是指展示二元分类器系统的性能随着其辨别阈值的变化的图形曲线。通过在各种阈值设置下绘制真阳性率对假阳性率的曲线来创
建该曲线。真阳性率也被称为灵敏度。假阳性率计算为1
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特异性。因此，ROC曲线是一系列截断值范围内的真阳性率对假阳性率(灵敏度vs(1
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特异性))的图形显示以及选择最佳截断值进行临床使用的方式。将准确度表示为ROC曲线下面积(AUC)本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种EDA
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A2蛋白，其特征在于：作为结直肠癌血清生物标志物用于非诊断目的的结直肠癌判断。2.一种结直肠癌血清生物标志物，其特征在于：包括EDA
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A2蛋白。3.根据权利要求2所述的结直肠癌血清生物标志物，其特征在于：所述EDA
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A2蛋白为人的EDA
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A2蛋白。4.一种结直肠癌血清生物标志物试剂盒，用于检测如权利要求1至3任意一项所述的结直肠癌血清生物标志物，其特征在于：包括EDA
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A2蛋白的免疫球蛋白G抗体。5.根据权利要求4所述结直肠癌血清生物标志物试剂盒，其特征在于：包括定量芯片、样品稀释液、20
×
洗液I、20
×
洗液II、标准品混合物、EDA
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A2蛋白的免疫球蛋白G抗体、Cy3
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链霉亲和素、玻片清洗和干燥器、密封条。6.一种如权利要求1至3任意一项所述的结直肠癌血清生物标志物的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：获取血清样本；检测血清样本b1)定量芯片干燥b2)标准品的配置b3)定量芯片的操作流程b31)在定量芯片的每个孔中加入100μL的样品稀释液，室温摇床上孵育1h，封闭定量芯片；b32)、抽去每个孔中的样品稀释液，从步骤2配置的标准品中取80μL的标准液与血清样本一起添加到孔中，4℃过夜孵育；b33)清洗定量芯片，首先用1
×
洗液I进行清洗，每孔250μL的1
×
洗液I，清洗10次，每次震荡10s，震荡强度选择高，用去离子水稀释20
×
洗液I,然后换用1
×
洗液II对通道进行清洗，每孔250μL的1
×
洗液II，清洗6次，每次震荡10s，震荡强度选择高，用去离子水稀释20
×
洗液II；b34)EDA
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A2蛋白的免疫球蛋白G抗体的孵育,离心装有EDA
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【专利技术属性】
技术研发人员：孙维建，俞耀军，沈贤，易永东，毛晨晨，陈健，
申请(专利权)人：温州医科大学附属第二医院温州医科大学附属育英儿童医院，
类型：发明
国别省市：