一种定量检测金贝口服液的LC-MS方法技术

本申请公开了一种定量检测金贝口服液的LC

【技术实现步骤摘要】
一种定量检测金贝口服液的LC
‑
MS方法


[0001]本申请涉及一种定量检测金贝口服液的LC
‑
MS方法，属于药品检测


技术介绍

[0002]中医药因其疗效显著、副作用少等优点，在临床上发挥着重要作用，已被用于防治疾病2000多年。其中，中药复方制剂不仅是中药的重要组成部分，也是临床用药的重要形式和手段。
[0003]金贝口服液是一种传统的中草药制剂，具有益气养阴、祛瘀化痰的功效。配方由12味药组成，即黄芪、党参、当归、北沙参、黄芩、川贝母、川芎、丹参、清半夏、金银花、连翘、甘草。传统上，金贝口服液主要用于治疗特发性肺纤维化(IPF)。IPF是一种严重的肺部疾病，其病理特征是肺功能大大减退、成纤维细胞过度增殖和细胞外基质沉积。目前治疗肺纤维化的主要药物为糖皮质激素和免疫抑制剂，这些药物的治疗效果显著，但其不良反应也较为常见且严重。因此，金贝口服液已被开发为一种有效治疗IPF的新药。为支持其传统功能，相关研究结果显示，金贝口服液具有良好的抗肺纤维化作用，优于单纯化学治疗组，可有效改善纤维化症状，延缓病程进展。目前，金贝口服液已获批作为医疗机构制剂并被广泛使用，也已应用于2019新型冠状病毒肺炎(coronavirusdisease2019，COVID
‑
19)。
[0004]然而，迄今为止，针对金贝口服液药理作用的生物活性组分仍不清楚。旧版《中国药典》以单一指标组分作为中药及中药复方制剂的含量测定指标。作为一种传统中药，由于化学组分复杂、多样，很难对活性物质的存在进行表征，其中许多组分的存在量有限。因此，寻找具有自身特点的中药有效组分的鉴别方法势在必行。

技术实现思路

[0005]为了解决上述问题，提供了一种定量检测金贝口服液的LC
‑
MS方法，该方法对金贝口服液主要起药理作用的31种生物活性组分进行定量分析，为金贝口服液的质量控制标准提供了依据，便于金贝口服液生产和检测的进行。
[0006]本申请提供了一种定量检测金贝口服液的LC
‑
MS方法，包括下述步骤：
[0007](1)配制金贝口服液的供试品溶液；
[0008](2)配制混合对照品溶液，所述混合对照品溶液为腺苷、鸟苷、绿原酸、马钱苷、咖啡酸、夏佛塔苷、芦丁、连翘酯苷A、阿魏酸、西贝素、贝母素乙、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、槲皮苷、迷迭香酸、丹酚酸B、甘草苷、木樨草甘、黄芩苷、染料木苷、连翘苷、甘草素、毛蕊异黄酮、佛手柑内酯、黄芩素、芒柄花素、甘草酸、甘草次酸、汉黄芩素和藁本内酯的混合溶液；
[0009](3)将步骤(2)制备的混合对照品溶液注入LC
‑
MS联用仪，确定31种组分的出峰位置、峰面积及其定性定量离子对，以峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标，绘制标准曲线，得到各组分的线性方程和相关系数；
[0010](4)将步骤(1)制备的供试品溶液注入LC
‑
MS联用仪，按照各出峰面积以及定性定
量离子对丰度比进行定量分析，按照步骤(3)所得的线性方程计算供试品溶液中31种组分的含量。
[0011]可选地，步骤(3)和步骤(4)中，供试品溶液和混合对照品溶液注入LC
‑
MS联用仪的测试条件为：
[0012]LC采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱2.1mm*100mm，1.7μm，柱温35℃，流动相0.1％甲酸
‑
乙腈溶液，梯度洗脱，流速为0.3mL/min，进样量为2μL；
[0013]MS采用正负电喷雾电离模式，离子源喷雾电压为4500V，气帘气为20.0psi，离子源气压50psi，入口电位为
±
10V，碰撞池出口电位为
±
5.5V，数据采用多反应监测模式。
[0014]可选地，步骤(3)和步骤(4)中梯度洗脱条件具体为：
[0015]0～1.0min，乙腈的体积分数为10％，0.1％甲酸的体积分数为90％；
[0016]1.0～3.0min，乙腈的体积分数为10％～20％，0.1％甲酸的体积分数为90％～80％；
[0017]3.0～5.0min，乙腈的体积分数为20％～30％，0.1％甲酸的体积分数为80％～70％；
[0018]5.0～7.0min，乙腈的体积分数为30％～40％，0.1％甲酸的体积分数为70％～60％；
[0019]7.0～9.0min，乙腈的体积分数为40％～55％，0.1％甲酸的体积分数为60％～45％；
[0020]9.0～11.0min，乙腈的体积分数为55％～70％，0.1％甲酸的体积分数为45％～30％；
[0021]11.0～14.0min，乙腈的体积分数为70％～80％，0.1％甲酸的体积分数为30％～20％；
[0022]14.0～15.0min，乙腈的体积分数为80％～85％，0.1％甲酸的体积分数为20％～15％；
[0023]15.0～16.1min，乙腈的体积分数为85％～10％，0.1％甲酸的体积分数为15％～90％；
[0024]16.1～17.0min，乙腈的体积分数为10％，0.1％甲酸的体积分数为90％。
[0025]可选地，所述供试品溶液的制备步骤为：量取10mL金贝口服液，置于具塞锥形瓶中，加入50％甲醇30mL，精密称定，超声30min后，放凉至室温，用50％甲醇补足重量，摇匀，过滤，取滤液，即得。
[0026]可选地，所述混合对照品溶液的制备步骤为：分别称量腺苷、鸟苷、绿原酸、马钱苷、咖啡酸、夏佛塔苷、芦丁、连翘酯苷A、阿魏酸、西贝素、贝母素乙、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、槲皮苷、迷迭香酸、丹酚酸B、甘草苷、木樨草甘、黄芩苷、染料木苷、连翘苷、甘草素、毛蕊异黄酮、佛手柑内酯、黄芩素、芒柄花素、甘草酸、甘草次酸、汉黄芩素和藁本内酯，分别配制浓度为100ppm的31种对照品储备液，各取上述31种对照品储备液，置于10mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液。
[0027]可选地，所述混合对照品溶液中，31种组分的浓度为0.05mg/L
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1mg/L；
[0028]优选的，所述混合对照品溶液中，31种组分的浓度相等。
[0029]可选地，所述步骤(2)之前，还包括采用LC
‑
MS联用仪对供试品溶液进行定性测试
的步骤，将所述供试品溶液注入LC
‑
MS联用仪，得到总离子色谱图，并通过二级质谱对所述供试品溶液中的组分鉴定。
[0030]可选地，所述定性测试步骤的测试条件为：
[0031]LC采用Poroshell 120SB
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C18色谱柱(2.1mm*150mm，2.7μm)，柱温30℃，流动相由0.1％甲酸
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乙腈溶液，梯度洗脱，流速为0.2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种定量检测金贝口服液的LC
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MS方法，其特征在于，包括下述步骤：(1)配制金贝口服液的供试品溶液；(2)配制混合对照品溶液，所述混合对照品溶液为腺苷、鸟苷、绿原酸、马钱苷、咖啡酸、夏佛塔苷、芦丁、连翘酯苷A、阿魏酸、西贝素、贝母素乙、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、槲皮苷、迷迭香酸、丹酚酸B、甘草苷、木樨草甘、黄芩苷、染料木苷、连翘苷、甘草素、毛蕊异黄酮、佛手柑内酯、黄芩素、芒柄花素、甘草酸、甘草次酸、汉黄芩素和藁本内酯的混合溶液；(3)将步骤(2)制备的混合对照品溶液注入LC
‑
MS联用仪，确定31种组分的出峰位置、峰面积及其定性定量离子对，以峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标，绘制标准曲线，得到各组分的线性方程和相关系数；(4)将步骤(1)制备的供试品溶液注入LC
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MS联用仪，按照各出峰面积以及定性定量离子对丰度比进行定量分析，按照步骤(3)所得的线性方程计算供试品溶液中31种组分的含量。2.根据权利要求1所述的定量检测金贝口服液的LC
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MS方法，其特征在于，步骤(3)和步骤(4)中，供试品溶液和混合对照品溶液注入LC
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MS联用仪的测试条件为：LC采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱2.1mm*100mm，1.7μm，柱温35℃，流动相0.1％甲酸
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乙腈溶液，梯度洗脱，流速为0.3mL/min，进样量为2μL；MS采用正负电喷雾电离模式，离子源喷雾电压为4500V，气帘气为20.0psi，离子源气压50psi，入口电位为
±
10V，碰撞池出口电位为
±
5.5V，数据采用多反应监测模式。3.根据权利要求2所述的定量检测金贝口服液的LC
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MS方法，其特征在于，步骤(3)和步骤(4)中梯度洗脱条件具体为：0～1.0min，乙腈的体积分数为10％，0.1％甲酸的体积分数为90％；1.0～3.0min，乙腈的体积分数为10％～20％，0.1％甲酸的体积分数为90％～80％；3.0～5.0min，乙腈的体积分数为20％～30％，0.1％甲酸的体积分数为80％～70％；5.0～7.0min，乙腈的体积分数为30％～40％，0.1％甲酸的体积分数为70％～60％；7.0～9.0min，乙腈的体积分数为40％～55％，0.1％甲酸的体积分数为60％～45％；9.0～11.0min，乙腈的体积分数为55％～70％，0.1％甲酸的体积分数为45％～30％；11.0～14.0min，乙腈的体积分数为70％～80％，0.1％甲酸的体积分数为30％～20％；14.0～15.0min，乙腈的体积分数为80％～85％，0.1％甲酸的体积分数为20％～15％；15.0～16.1min，乙腈的体积分数为85％～10％，0.1％甲酸的体积分数为15％～90％；16.1～17.0min，乙腈的体积分数为10％，0.1％甲酸的体积分数为90％。4.根据权利要求1所述的定量检测金贝口服液的LC
‑
MS方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备步骤为：量取10mL金贝口服液，置于具塞锥形瓶中，加入50％甲醇30mL，精密称定，超声30min后，放凉至室温，用50％甲醇补足重量，摇匀，过滤，取滤液，即得。5.根据权利要求1所述的定量检测金贝口服液的LC
‑
MS方法，其特征在于，所述混合对照品溶液的制备步骤为：分别称量腺苷、鸟苷、绿原酸、马钱苷、咖啡酸、夏佛塔苷、芦丁、连翘酯苷A、阿魏酸、西贝素、贝母素乙、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、槲皮苷、迷迭香酸、丹酚酸B、甘草苷、木樨草甘、黄芩苷、染料木苷、连翘苷、甘草素、...

【专利技术属性】
技术研发人员：张爱均，孟兆青，胥清翠，张良棕，姜娟娟，李泓霖，
申请(专利权)人：山东宏济堂制药集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：