基于可溶性CLEC-2与血小板数的血小板活化测定方法技术

本发明专利技术开发了一种更好地反映生物体内的血小板活化的生物标志物，并且提供一种能够用于血栓止血疾病的检查等的辅助掌握血小板活化状态的方法。所述辅助掌握血小板活化状态的方法包括：(1)测定来自受试对象的受试样本中的可溶性CLEC

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】基于可溶性CLEC
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2与血小板数的血小板活化测定方法


[0001]本专利技术涉及一种基于可溶性CLEC
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2与血小板数的血小板活化测定方法及血栓止血疾病的检查方法。

技术介绍

[0002]认为形成于血管内的血栓是广范的人类疾病中与生死相关的重大病因。血小板造成的血栓增大或血小板聚集的加剧会引起严重的心肌梗塞、慢性不稳定型心绞痛、一过性脑缺血、外围血管疾病、动脉血栓症、闭塞性动脉硬化症、肺血栓栓塞症、以及支架内再狭窄之类的疾病。在发达国家确认到血栓造成的冠状动脉闭塞或脑循环疾病占死因的上位，治疗血栓症成为了世界性的紧迫课题。此外，在发生自然灾害时，会呼吁人们预防灾害避难时的深静脉血栓及肺栓塞(静脉血栓随血流流动而阻塞肺动脉的疾病)，其防治对策也受到重视。在血小板内存在颗粒且在血小板表面存在大量膜糖蛋白，在血小板中，随着血小板活化会发生颗粒的释放或膜糖蛋白的结构改变，其中的一部分被用作血小板活化标志物。
[0003]血小板因子4(PF4)及β
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血小板球蛋白(βTG)包含于血小板的α颗粒中，其随着血小板的活化而被释放，因此一直以来被用作血小板活化标志物。然而，由于即使是采血等轻微的刺激，颗粒中的物质也会被释放，因此对采血操作或试样处理的限制较多，例如，必须经过使用添加有血小板活化抑制剂混合物的专用采血管与20G以上的较粗的采血针，并以不用止血带的方式进行采血后立即进行冰冷却之类的繁杂过程等，除此以外，从数据可靠性的角度出发，几乎不将其应用于临床。
[0004]此外，近年来，随着血小板的活化而被蛋白酶切断的膜糖蛋白作为血小板活化标志物的利用价值正逐步提高。具体而言，可列举出作为代表性的分子的血管性血友病因子(vWF)受体GPIba或胶原蛋白受体GPVI，但与其临床意义相关的知识均较少，此外，由于其为依赖于某种配体(ligand)的释放反应，因此就其能否准确地反映血小板的活化状态而言仍存在诸多不明确之处。
[0005]CLEC
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2(C
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type lectin
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like receptor 2，C型凝集素样受体2)为井上等人于2006年鉴定出的属于C型凝集素家族的血小板活化受体(专利文献1、2)。此外，根据近年来的研究成果，有报告显示CLEC
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2会随着血小板活化而从膜表面游离，成为可溶性而被释放(非专利文献1、专利文献3)。此外，出版了在数种病情下测定可溶性CLEC
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2的文献，但关于其临床应用仍存在诸多不明之处(非专利文献2)。
[0006]现有技术文献
[0007]专利文献
[0008]专利文献1：日本专利第4961595号公报
[0009]专利文献2：日本特开2007
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070359号公报
[0010]专利文献3：日本专利第6078845号公报
[0011]非专利文献
[0012]非专利文献1：Platelets 2015；26(8)：711
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719
[0013]非专利文献2：Thrombosis Research，2019，Vol.178，p.54
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技术实现思路

[0014]本专利技术要解决的技术问题
[0015]本专利技术的技术问题在于开发一种更好地反映生物体内的血小板活化的生物标志物，并将其用于血栓止血疾病的检查等。
[0016]解决技术问题的技术手段
[0017]本申请的专利技术人为了解决所述技术问题而进行了深入研究。其结果发现，已有报告的血浆中的可溶性CLEC
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2(以下，有时称作sCLEC
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2)的浓度虽然会反映生物体中的血小板活化的程度，但仅通过该浓度未必能够实施准确的诊断。sCLEC
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2为在血小板活化时，从血小板释放到血浆中的分子，曾期待测定血浆中的sCLEC
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2的浓度的操作会反映血小板的活化程度。然而，使用处于各种病情的血液实施研究时发现，血浆中sCLEC
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2浓度虽可在一定程度上反映血小板的活化，但该浓度与血液中的血小板数也呈正相关。血液中的血小板数因人而异，而且有时也会因病情而增减。在血小板发生活化但血小板数少的情况下，血浆中sCLEC
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2浓度也会降低，反之，在血小板的活化较弱但血小板数增加的情况下，血浆中sCLEC
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2浓度也会升高，从而发现血浆中sCLEC
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2浓度有时未必反映出生物体中的血小板的活化程度。在此情况下，本申请的专利技术人想到用血浆中sCLEC
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2浓度除以血小板数可得知每个血小板的sCLEC
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2释放量，将其作为指标时可更好地反映出血小板的活化，进而进行了深入研究。其结果发现，血浆中sCLEC
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2浓度/血小板数比血浆中sCLEC
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2浓度本身更能够反映血栓性疾病的病情，还发现该指标也能够用于血栓止血疾病的检查。根据以上的发现，完成了本专利技术。
[0018]本专利技术提供以下的方案：
[0019][1]一种辅助掌握血小板活化状态的方法，其包括：
[0020](1)测定来自受试对象的受试样本中的可溶性CLEC
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2浓度与血小板数的工序；及
[0021](2)根据所述可溶性CLEC
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2浓度及所述血小板数，掌握血小板活化状态的工序。
[0022][2]一种辅助掌握血小板活化状态的方法，其包括：
[0023](1)测定来自受试对象的受试样本中的可溶性CLEC
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2浓度与血小板数的工序；及
[0024](2)通过用所述可溶性CLEC
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2浓度除以所述血小板数，从而计算可溶性CLEC
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2浓度/血小板数的值的工序。
[0025][3]根据[2]所述的方法，其进一步包括：与使用来自健康对象的受试样本得到的可溶性CLEC
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2浓度/血小板数的值进行比较的工序。
[0026][4]根据[2]或[3]所述的方法，其中，所述可溶性CLEC
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2浓度/血小板的值为反映血栓止血疾病的病情的标志物。
[0027][5]根据[4]所述的方法，其中，所述血栓止血疾病为弥散性血管内凝血综合征(DIC)、心肌梗塞、心绞痛、脑梗塞、闭塞性动脉硬化症、深静脉血栓、肺血栓栓塞症、心源性脑梗死、抗磷脂综合征、败血症中的任一种。
[0028][6]根据[1]～[5]中任一项所述的方法，其将血栓止血疾病患者作为对象，被用作监控该血栓止血疾病的预后或治疗过程的方法。
[0029][7]一种用于掌握血小板活化状态的系统，其包括：
[0030](1)能够记录来自受试对象的受试样本中的可溶性CLEC
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种辅助掌握血小板活化状态的方法，其包括：(1)测定来自受试对象的受试样本中的可溶性CLEC
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2浓度与血小板数的工序；及(2)根据所述可溶性CLEC
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2浓度及所述血小板数，掌握血小板活化状态的工序。2.一种辅助掌握血小板活化状态的方法，其包括：(1)测定来自受试对象的受试样本中的可溶性CLEC
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2浓度与血小板数的工序；及(2)通过用所述可溶性CLEC
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2浓度除以所述血小板数，从而计算可溶性CLEC
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2浓度/血小板数的值的工序。3.根据权利要求2所述的方法，其进一步包括：与使用来自健康对象的受试样本得到的可溶性CLEC
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2浓度/血小板数的值进行比较的工序。4.根据权利要求2或3所述的方法，其中，所述可溶性CLEC
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2浓度/血小板的值为反映血栓止血疾病的病情的标志物。5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述血栓止血疾病为弥散性血管内凝血综合征(DIC)、心肌梗塞、心绞痛、脑梗塞、闭塞性动脉硬化症、深静脉血栓、肺血栓栓塞症、心源性脑梗死、抗磷脂综合征、败血症中的任一种。6.根据权利要求1～5中任一项所述的方法，其将血栓止血疾病患者作为对象，被用作监控该血栓止血疾病的预后或治疗过程的方法。7.一种用于掌握血小板活化状态的系统，其包括：(1)能够记录来自受试对象的受试样本中的可溶性CLEC
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2浓度与血小板数的记录机构；(2)通过用所述可溶性CLEC

【专利技术属性】
技术研发人员：石仓宏恭，川村雅英，
申请(专利权)人：美迪恩斯生命科技株式会社，
类型：发明
国别省市：