一种骨源性碱性磷酸酶测定试剂盒制造技术

一种骨源性碱性磷酸酶测定试剂盒，它涉及医疗测定技术领域。它包括以下具体流程及步骤：试剂准备；调试测定条件；管体预备；加入物料；混匀并孵育；二次加入；二次混匀；读数；数值计算。本发明专利技术有益效果为：使用本测定试剂盒进行小儿骨源性碱性磷酸酶的检测，具有简便、快速、特性、敏感等优点，且该试剂的临床应用对早期发现佝偻病提供了科学的诊断依据，对指导临床治疗有很大临床意义。床治疗有很大临床意义。

【技术实现步骤摘要】
一种骨源性碱性磷酸酶测定试剂盒


[0001]本专利技术涉及医疗测定
，具体涉及一种骨源性碱性磷酸酶测定试剂盒。

技术介绍

[0002]骨源性碱性磷酸酶(BAP)是成骨细胞的表型标志物之一，它可直接反映成骨细胞的活性或功能状况，是近年来主要用于小儿佝偻病早期诊断和亚临床鉴别的特异性参考指标，也是目前用于临床评价人体骨矿化障碍的最佳指标。
[0003]佝偻病的发病过程是一个慢性过程，初期临床表现没有特异性，直至出现明显的骨骼改变时在进行治疗，将错过治疗的最佳时期，对儿童生长发育造成不利影响。因此，在临床工作中，需要有一个指标来衡量治疗水平，防止治疗不足或过量。单纯依靠症状和体征容易造成误诊和漏诊。以往的血钙、磷、全血碱性磷酸酶及X线检测灵敏度低，特异性差，不应用于早期诊断。25(OH)D3是国际公认的反映体内Vit
‑
D营养状况可靠的指标。可作为早期诊断的指标，该实验操作步骤繁琐，不适合在基层医疗保健机构中开展。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于针对现有技术中不足与缺陷，提供一种骨源性碱性磷酸酶测定试剂盒，使用本测定试剂盒进行小儿骨源性碱性磷酸酶的检测，具有简便、快速、特性、敏感等优点，且该试剂的临床应用对早期发现佝偻病提供了科学的诊断依据，对指导临床治疗有很大临床意义。
[0005]为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案是：一种骨源性碱性磷酸酶测定试剂盒，它包括以下具体流程及步骤：试剂准备：配置试剂一、试剂二、校准品及质控品；调试测定条件：调节设备的测定条件；管体预备：预备空白管、校准管及样品管；加入物料：为其空白管加入5ul纯化水与200μl试剂一，校准管内加入5ul校准品与200μl试剂一，样品管内加入5ul样品与200μl试剂一；混匀并孵育：混匀，37℃孵育5min；二次加入：为其空白管加入50μl试剂2，校准管加入50μl试剂2，样品管加入50μl试剂2；二次混匀；读数：37℃延迟1
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2分钟后再405nm处以空白管调零读取各管吸光度值，每隔30秒读一次，共读2分钟；数值计算：计算平均每分钟变化率ΔA/min。
[0006]进一步的，所述具体计算公式为：其中，
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AS/min校准管平均每分钟的吸光度变化，
△
AU/min样品管平均每分钟的吸光度变化，
△
AB/min空白管平均每分钟的吸光度变化。
[0007]进一步的，所述试剂一具体由以下几种成分组成：AMP缓冲液、乙酸镁、硫酸锌、HEDTA、肝源性碱性磷酸酶单克隆抗体及Proclin300。
[0008]进一步的，所述试剂一中各个成分的含量具体为：AMP缓冲液的含量为420mmol/L、乙酸镁的含量为2.40mmol/L、硫酸锌的含量为1.20mmol/L、HEDTA的含量为2.40mmol/L、肝源性碱性磷酸酶单克隆抗体的含量为0.025g/及Proclin300的含量为0.2％。
[0009]进一步的，所述试剂二具体由以下几种成分组成：对
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硝基苯磷酸盐、HEDT及Proclin300。
[0010]进一步的，所述试剂二中各个成分的含量具体为：对
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硝基苯磷酸盐的含量为16.3mmol/L、HEDT的含量为2.40mmol/L及Proclin300的含量为0.2％。
[0011]进一步的，所述校准品由蔗糖与骨源性碱性磷酸酶组成，所述质控品由蔗糖、骨源性碱性磷酸酶组成，且校准品与质控品的值经量值传递获得，具有溯源性。
[0012]进一步的，所述测定条件具体为：主波长为405nm与副波长为505nm，校正类型为线性，样本：试剂一：试剂二：5：200:5，血清+试剂1总时间为：5min，采用速率法，延迟时间为2min，并使用两点定标进行校正，读数时间为2min，反应方向为向上。
[0013]采用上述技术方案后，本专利技术有益效果为：使用本测定试剂盒进行小儿骨源性碱性磷酸酶的检测，具有简便、快速、特性、敏感等优点，且该试剂的临床应用对早期发现佝偻病提供了科学的诊断依据，对指导临床治疗有很大临床意义。
具体实施方式
[0014]本具体实施方式采用的技术方案是：它包括以下具体流程及步骤：试剂准备：配置试剂一、试剂二、校准品及质控品；调试测定条件：调节设备的测定条件；管体预备：预备空白管、校准管及样品管；加入物料：为其空白管加入5ul纯化水与200μl试剂一，校准管内加入5ul校准品与200μl试剂一，样品管内加入5ul样品与200μl试剂一；混匀并孵育：混匀，37℃孵育5min；二次加入：为其空白管加入50μl试剂2，校准管加入50μl试剂2，样品管加入50μl试剂2；二次混匀；读数：37℃延迟1
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2分钟后再405nm处以空白管调零读取各管吸光度值，每隔30秒读一次，共读2分钟；数值计算：计算平均每分钟变化率ΔA/min，所述具体计算公式为：其中，
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AS/min校准管平均每分钟的吸光度变化，
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AU/min样品管平均每分钟的吸光度变化，
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AB/min空白管平均每分钟的吸光度变化。
[0015]所述试剂一具体由以下几种成分组成：AMP缓冲液、乙酸镁、硫酸锌、HEDTA、肝源性碱性磷酸酶单克隆抗体及Proclin300，所述试剂一中各个成分的含量具体为：AMP缓冲液的含量为420mmol/L、乙酸镁的含量为2.40mmol/L、硫酸锌的含量为1.20mmol/L、HEDTA的含量为2.40mmol/L、肝源性碱性磷酸酶单克隆抗体的含量为0.025g/及Proclin300的含量为0.2％，所述试剂二具体由以下几种成分组成：对
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硝基苯磷酸盐、HEDT及Proclin300，所述试剂二中各个成分的含量具体为：对
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硝基苯磷酸盐的含量为16.3mmol/L、HEDT的含量为2.40mmol/L及Proclin300的含量为0.2％，所述校准品由蔗糖与骨源性碱性磷酸酶组成，所述质控品由蔗糖、骨源性碱性磷酸酶组成，且校准品与质控品的值经量值传递获得，具有溯源性。
[0016]所述测定条件具体为：主波长为405nm与副波长为505nm，校正类型为线性，样本：试剂一：试剂二：5：200:5，血清+试剂1总时间为：5min，采用速率法，延迟时间为2min，并使用两点定标进行校正，读数时间为2min，反应方向为向上。
[0017]本专利技术的工作原理：样本中的肝源性碱性磷酸酶通过单克隆抗体进行抑制不能参与下述催化反应。而未被抑制的骨源性碱性磷酸酶采用对
‑
硝基苯磷酸盐为底物，在最适反
应条件下，样本中的骨源性碱性磷酸酶催化下述转磷酸反应，反应速率与样本中骨源性碱性磷酸酶的含量成正比。在405nm处，测定吸光度的上升速率，可计算出样本中骨源性碱性磷酸酶的活力，具体计算方式为：
[0018]适用仪器：
[00本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种骨源性碱性磷酸酶测定试剂盒，其特征在于：它包括以下具体流程及步骤：1)试剂准备：配置试剂一、试剂二、校准品及质控品；2)调试测定条件：调节设备的测定条件；3)管体预备：预备空白管、校准管及样品管；4)加入物料：为其空白管加入5ul纯化水与200μl试剂一，校准管内加入5ul校准品与200μl试剂一，样品管内加入5ul样品与200μl试剂一；5)混匀并孵育：混匀，37℃孵育5min；6)二次加入：为其空白管加入50μl试剂2，校准管加入50μl试剂2，样品管加入50μl试剂2；7)二次混匀；8)读数：37℃延迟1
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2分钟后再405nm处以空白管调零读取各管吸光度值，每隔30秒读一次，共读2分钟；9)数值计算：计算平均每分钟变化率ΔA/min。2.根据权利要求1所述的一种骨源性碱性磷酸酶测定试剂盒，其特征在于：所述具体计算公式为：其中，
△
AS/min校准管平均每分钟的吸光度变化，
△
AU/min样品管平均每分钟的吸光度变化，
△
AB/min空白管平均每分钟的吸光度变化。3.根据权利要求1所述的一种骨源性碱性磷酸酶测定试剂盒，其特征在于：所述试剂一具体由以下几种成分组成：AMP缓冲液、乙酸镁、硫酸锌、HEDTA、肝源性碱性磷酸酶单克隆抗体及Proclin300。4.根据权利要求3所述的一种骨源性碱性磷酸酶测定试...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄争上，
申请(专利权)人：绍兴圣康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：