本发明专利技术涉及一种微生物发酵菌肥的制备方法，本发明专利技术提供了一种利用球毛壳菌、解淀芽孢杆菌（BNCC223006）、爪哇正青霉、唐菖蒲伯克霍尔德菌，按照一定的比例进行复配，利用农作物秸秆或者酒糟为底物发酵制成，该微生物菌肥具有抗植物病原真菌、杀根结线虫、降解重金属和富集有益元素的功能。本发明专利技术将上述4种微生物菌体按照体积比1:1:1:1进行混合，并在此基础上通过微生物真菌降解农作物秸秆或酒糟等廉价生物质发酵制成复合微生物肥料。本发明专利技术的微生物菌肥不仅可以使菌体在土壤中存活，可以分解有机物质形成腐殖质，并释放出养分，为植物提供营养，还能够分泌出具有提高植物抗胁迫能力的次级代谢产物。力的次级代谢产物。力的次级代谢产物。
【技术实现步骤摘要】
一种微生物菌肥的制备方法
[0001]本专利技术涉及真菌发酵技术与微生物菌肥领域，尤其涉及一种微生物菌肥的制备方法。
技术介绍
[0002]我国是农业生产大国，为了满足人们对农产品的需求。长期以来需要大量的使用化肥、农药来大幅度提高农作物产量。然而过度的使用化肥农药会引发严重的环境污染问题。例如水体富营养化、地下水污染和土壤板结等。植物寄生线虫，特别是根结线虫，是对农作物和经济作物造成产量严重损失主要害虫之一，筛选获得拮抗真菌是防治根结线虫的有效手段。
[0003]微生物菌肥是一类含有活性微生物并在使用过程中能提高肥料利用率、改善植物营养状况、促进植物生长并提高植物抗胁迫能力的生物性肥料。传统的微生物菌肥在使用的过程中存在很多局限性，比如活性微生物对土壤环境要求较高，在土壤中的定殖效率低，导致其在田间的效果不稳定。而且传统的微生物菌肥在制备过程中所花费的成本较高，产生的作用单一，无法被广大农民接受。因此，开发出同时兼具生物防治与植物促生、抗胁迫功能的复合微生物菌肥具有重大的现实意义。
技术实现思路
[0004]为克服现有技术中存在的上述缺陷，本专利技术通过添加不同比例4种微生物（球毛壳菌DX
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THS3(Chaetomium globosum DX
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THS3),保藏编号为CCTCC NO:M 2016005,于2016年1月4日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉武汉大学、解淀芽孢杆菌（BNCC223006）、爪哇正青霉R57(Eupenicillium javanicum R57),保藏编号为CCTCC NO:M 2019831,于2019年10月17日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉武汉大学、唐菖蒲伯克霍尔德菌Fse32(Burkholderia gladioli Fse32),保藏编号为CCTCC NO:M 2014672,于2014年12月28日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉武汉大学）混合培养，提供了一种微生物菌肥的制备方法。
[0005]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种微生物菌肥的制备方法，包括如下步骤：（1）使用接种环挑取2
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3环球毛壳菌DX
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THS3置于种子培养基上进行振荡培养，得球毛壳菌DX
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THS3种子悬浮液；使用接种环挑取2
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3环爪哇正青霉R57置于种子培养基上进行振荡培养，得爪哇正青霉R57种子悬浮液。用接种环挑取2
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3环解淀粉芽孢杆菌置于营养肉汁培养基上进行振荡培养，得解淀粉芽孢杆菌种子悬浮液。使用接种环挑取唐菖蒲伯克霍尔德菌Fse32置于种子培养基上进行培养，得唐菖蒲伯克霍尔德菌Fse种子悬浮液。
[0006]（2）将上述4种种子悬浮液按照体积比1:1:1:1进行混合，置于发酵培养基上进行发酵培养，得发酵的二级种子液，所述发酵培养基的氮源包括酵母粉、牛肉膏、蛋白胨、豆粕和玉米浆粉中的一种；所述发酵培养基中氮源的浓度为2.0~9.0 g/L；
（3）将上述所得发酵的二级种子液按照8
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12% v/v体积比进行放大发酵培养，所述放大发酵培养基的碳源包括水稻秸秆粉、小麦秸秆粉、玉米秸秆粉、酒糟中的一种。放大发酵培养，获得复合微生物发酵菌肥。
[0007]优选的，步骤（1）中所述种子培养基，主要的成分为马铃薯180~220 g/L，葡萄糖18.0~22.0 g/L和酵母膏0.1~0.3 g/L。营养肉汁培养基的组分为：牛肉膏 3.0 g/L，蛋白胨 10.0 g/L，NaCl 5.0 g/L，5.0mg/L MnSO4·
H2O，pH 7.0，121 ℃，15 min灭菌。
[0008]优选的，步骤（1）中所述振荡培养的频率为120~180 rpm，所述振荡培养的温度为25~30 ℃，所述振荡培养的时间为2~4 d。
[0009]优选的，步骤（2）中所述发酵培养基以水为溶剂，包括以下浓度的组分：蔗糖4.0~6.0 g/L，KH2PO
4 3.0~4.0 g/L，氮源2.0~4.0 g/L，NaCl 0.4~0.6 g/L，MgSO4·
7H2O 0.4~0.6 g/L，ZnSO4·
7H2O 0.002~0.003 g/L，NaMoO4·
2H2O 0.0002~0.0003 g/L，MnSO4·
H2O 0.001~0.003 g/L，CaCl
2 0.01~0.02 g/L和H3BO
3 0.00002~0.00004 g/L。
[0010]优选的，步骤（2）中所述发酵培养的接种量为2~4%；所述发酵培养的温度为25~30 ℃；所述发酵培养的时间为6~10 d；所述发酵培养为振荡培养，所述振荡的频率为120~180 rpm。
[0011]优选的，步骤（3）中所述放大发酵培养的每2.5 L培养基包括蔗糖12.0~13.0 g，KH2PO
4 6.0~10.0 g，蛋白胨17.0~18.0 g，NaCl 1.0~2.0 g，MgSO4·
7H2O 1.0~2.0 g，ZnSO4·
7H2O 0.007~0.008 g，NaMoO4·
2H2O 0.0005~0.0007 g，MnSO4·
H2O 0.004~0.006 g，CaCl
2 0.03~0.04 g，H3BO
3 0.00007~0.00008 g。
[0012]优选的，步骤（3）中所述放大发酵培养过程中还包括搅拌的步骤，所述搅拌的频率为180~220 rpm，所述搅拌的曝气量为0.5~1.5 vvm。
[0013]优选的，步骤（3）中所述放大发酵培养的温度为25~30 ℃，所述放大发酵培养的时间为10~14 d。
[0014]与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下：所用菌种为实验室从东乡野生稻中分离出的内生菌，与普通野生菌种相比活性好、定殖效率高。制备过程中使用的原料为农作物秸秆或是生产废弃物酒糟等廉价原料，降低微生物菌肥的制备成本。本专利技术使用4种菌种所制得的种子悬浮液以不同比例混合培养，得到的微生物菌肥效果多样，适用于不同农业场景。本专利技术对提高植物的抗逆性，尤其是抑制核盘菌、根结线虫具有显著作用。本专利技术所制备的微生物菌肥所产生的吲哚乙酸、溶磷等促生活性物质可调节植物生长，接种后植物的干重、株高、根长等皆有显著提升（如图1，2，3，4）。
[0015]以上所述，仅为本专利技术较优的具体的实施方式，但本专利技术的保护范围并不局限于此，任何熟悉本
的技术人员在本专利技术揭露的技术范围内，凡在本专利技术的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，都应涵盖在本专利技术的保护范围之内。
附图说明
[0016]图1 复合微生物菌肥对核盘菌有良好的抑制作用的对比试验图图2 该复合微生物菌肥可代谢产生IAA
图3 本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种微生物菌肥的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）使用接种环挑取2
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3环球毛壳菌DX
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THS3置于种子培养基上进行振荡培养，得球毛壳菌DX
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THS3种子悬浮液；使用接种环挑取2
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3环爪哇正青霉R57置于种子培养基上进行振荡培养，得爪哇正青霉R57种子悬浮液；用接种环挑取2
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3环解淀粉芽孢杆菌置于营养肉汤培养基上进行振荡培养，得解淀粉芽孢杆菌种子悬浮液；使用接种环挑取唐菖蒲伯克霍尔德菌Fse32置于种子培养基上进行培养，得唐菖蒲伯克霍尔德菌Fse32种子悬浮液；（2）将上述4种种子悬浮液按照体积比1:1:1:1进行混合，置于发酵培养基上进行发酵培养，得发酵的二级种子液，所述发酵培养基的氮源包括酵母粉、牛肉膏、蛋白胨、豆粕和玉米浆粉中的一种；所述发酵培养基中氮源的浓度为2.0~9.0 g/L；（3）将上述所得发酵的二级种子液按照8
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12% v/v体积比进行放大发酵培养，所述放大发酵培养基的碳源包括水稻秸秆粉、小麦秸秆粉、玉米秸秆粉、酒糟中的一种；放大发酵培养，获得复合微生物发酵菌肥。2.根据权利要求1所述的一种微生物菌肥的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述种子培养基，以水为溶剂，包括以下浓度的组分：马铃薯180~220 g/L，葡萄糖18.0~22.0 g/L和酵母膏0.1~0.3 g/L；营养肉汁培养基的组分为：牛肉膏 3.0 g/L，蛋白胨 10.0 g/L，NaCl 5.0 g/L，5.0mg/L MnSO4·
H2O，pH 7.0，121 ℃，15 min灭菌。3.根据权利要求1所述的一种微生物菌肥的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述球毛壳菌DX
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THS3、爪哇正青霉R57为实验室前期从东乡野生稻中分离筛选获得的内生真菌，唐菖蒲伯克霍尔德菌Fse32为实验室前期从东乡野生稻中分离筛选获得的内生细菌，并将其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号分别：CCTCC NO: M 2016005，CCTCC NO: M 2019831，CCTCC NO: M 2014672；所述解淀粉芽孢杆菌为商业化菌株购置于北纳生物，编号：BNCC 223006...
【专利技术属性】
技术研发人员：商紫钦，肖依文，朱笃，张志斌，汪涯，高波良，吴文婷，罗健，
申请(专利权)人：江西科技师范大学，
类型：发明
国别省市：
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