一种反复性偏头痛动物模型的构建方法技术

本发明专利技术提供一种反复性偏头痛动物模型的构建方法，包括注射戊巴比妥钠进行麻醉、钻孔、借助玻璃离子水门汀将套管基座固定在颅骨上、测定机械痛阈和温度痛阈进行纳入与剔除、注射CGRP等步骤。本发明专利技术提供的动物模型以大鼠为基础，构建成功率高，且具有实际的药效检测意义，适用于偏头痛药物的药效检测。适用于偏头痛药物的药效检测。适用于偏头痛药物的药效检测。

【技术实现步骤摘要】
一种反复性偏头痛动物模型的构建方法


[0001]本专利技术属于动物模型构建领域，具体涉及一种反复性偏头痛动物模型的构建方法。

技术介绍

[0002]偏头痛是一种临床常见的慢性神经血管性疾患，可发生于多个年龄段。偏头痛是一种原发性头痛，为一种发作性疾病，表现为发作性头痛，有些在头痛前有眼前闪光或视野缺损，麻木等先兆症状，多数无先兆，常伴有恶心、呕吐、畏光、怕声等症状。
[0003]偏头痛是临床常见病、多发病，病因复杂，多认为与遗传、内分泌及代谢紊乱、情绪紧张、睡眠障碍、精神刺激、气候变化等有关。大多数学者认为偏头痛是一种由三叉神经血管系统功能紊乱所引起的头痛，但其发病机制至今尚未阐明。
[0004]对于治疗偏头痛的药物也是层出不叠，药物能否实际应用就需要进行药效检测，而偏头痛动物模型建立是药效检测中必不可少的一个环节。目前对偏头痛的发病机理尚不十分清楚，缺乏标准化、相似性、重复性、适用性、经济性的实验动物模型，对偏头痛的病因病机、防治方法难以进行客观与深入的研究，尤其在研究抗偏头痛药物的治疗效果时，多应用现代技术方法检测相关蛋白及基因水平，缺乏客观、特异性强的偏头痛相关行为症状学指标。
[0005]现有技术中，偏头痛模型多采用皮下注射硝酸甘油(NTG)注射剂复制实验性大鼠偏头痛模型。如对大川芎方
[1]、超微川芎茶调散
[2]、青藤碱
[3]、麻芎舒痛方
[4]等药物的药效检测均选用了硝酸甘油注射大鼠模型。硝酸甘油注射大鼠模型的优点在于：既具有人类偏头痛发作的相似性，又有较好的重复性、适用性及易操作性；缺点在于：硝酸甘油型偏头痛模型动物种属单一，而且不同种属间的剂量也不相同，模型筛选标准模糊
[5]，另外还有研究表明硝酸甘油模型造模后象征性指标出现较晚(60min后)
[6]。
[0006]现有技术中对反复性偏头痛动物模型的构建公开的方法中包括：利用10％水合氯醛麻醉；颅中线左侧旁开2mm与人字缝前2mm交叉处钻孔；将套管边缘涂上502胶水，插入置管孔内，使其边缘与清洁干燥的颅骨表面紧密结合。然后将小螺丝拧入螺丝孔，勿穿透颅骨，防止损伤硬脑膜。待胶水与颅骨结合牢固后，将调好的牙科水泥涂抹在套管、螺纹处、螺钉及颅骨表面
[7]。但该模型构建方式存在的问题在于：选用水合氯醛麻醉仅有镇静作用，而无镇痛作用，并且易致气管分泌物增多，还会导致显著的呼吸抑制，不推荐存活动物实验使用水合氯醛腹腔麻醉。应用502胶水、螺钉固定操作时间长，难度较高。
[0007]对于反复性偏头痛药物的效果检测，需要对模型进行筛选优化，使偏头痛动物模型的建立逐步走向规范化、标准化，以便更好地进行偏头痛的相关实验研究。
[0008]参考文献：
[0009][1]郑琴,魏韶锋,伍振峰,等.大川芎方对偏头痛大鼠模型血浆中CGRP及ET的影响[J].中药药理与临床,2011,27(4):3.
[0010][2]李丹丹,姚红艳,孙凯.超微川芎茶调散对偏头痛模型大鼠β
‑
EP,CGRP的影响
[J].现代医学与健康研究电子杂志,2020,4(3):3.
[0011][3]杨丽,罗国标,刘晓丽,等.青藤碱对偏头痛模型大鼠血浆CGRP、SP含量及脑干5
‑
HT表达的影响[J].中风与神经疾病杂志,2013,30(1):4.
[0012][4]郭宇博.不同配伍中药方剂对偏头痛大鼠血清和脑组织中5
‑
HT含量的影响[J].中国中医基础医学杂志,2010(3):3.
[0013][5]周永红,王新陆,胡怀强,等.硝酸甘油型实验性偏头痛大鼠模型建立与评价[J].中国神经免疫学和神经病学杂志,2005,12(2):2.
[0014][6]付先军,宋旭霞,周永红,等.硝酸甘油型实验性偏头痛大鼠模型行为症状学评价[J].中华神经医学杂志,2005,4(5):3.
[0015][7]黄倩.CGRP诱导神经源性炎症偏头痛模型大鼠行为学的研究[D].吉林大学,2015.

技术实现思路

[0016]为了解决上述问题，本专利技术提供了一种反复性偏头痛动物模型的构建方法，通过优化操作步骤和药物选择，使大鼠偏头痛模型制备更为简便，对偏头痛药物的药效检测提供了更好的选择。
[0017]一方面，本专利技术提供了一种反复性偏头痛动物模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
[0018]腹腔注射2％戊巴比妥钠将大鼠麻醉；
[0019]于大鼠颅中线与冠状缝交叉点旁左1.5mm，后1.5mm颅骨处钻孔；
[0020]借助玻璃离子水门汀将套管基座固定在颅骨上；
[0021]在套管周围缝合皮肤；
[0022]大鼠术后第5
‑
7天，每天于固定时间测量机械痛阈和温度痛阈，于第7天痛阈恢复至基础痛阈水平者纳入研究，剔除导管脱落、体重显著下降、死亡以及痛阈未恢复到基础痛阈的大鼠；
[0023]术后第8天开始至实验结束，每天于固定时间用微量注射器通过套管向大鼠硬脑膜匀速注射CGRP；
[0024]在每次经套管给药后2h，进行机械痛阈和温度痛阈测定。
[0025]优选地，所述的2％戊巴比妥钠的注射用量为50mg/kg。
[0026]具体地，所述的颅骨处钻孔直径为1mm。
[0027]具体地，所述的CGRP的注射量为6μg；作为优选，所述的CGRP的注射体积为20μL。
[0028]具体地，所述的CGRP的注射时长为5分钟。
[0029]具体地，所述的CGRP的注射时间为术后第8天开始至实验结束，频率为1次/天，天数为7天。
[0030]具体地，目的检测物的给药时间为术后第5天至实验结束，频率为1次/天，天数为10天。
[0031]所述的目的检测物为治疗偏头痛的药物，所述的药物为口服药物或注射药物。
[0032]在一些实施例中，所述的药物为芎芷地龙汤、芎芷地龙汤(去内风药)、芎芷地龙汤(去外风药)或奥塞吉泮。
[0033]所述的机械痛阈测量方法为：
[0034]使用电子机械测痛仪，将电子测试探头垂直作用于大鼠须垫部皮肤，压力从低到高，待大鼠作出头部后缩、或逃离、掩藏头部等反应时，仪器所显示数值即为痛阈值，连续三次刺激，两次测量间隔至少1min，取平均值作为其机械痛阈值。
[0035]所述的温度痛阈测量方法为：
[0036]将大鼠须垫部固定于鼠尾光照测痛仪激光发出部位，启动后开始计时，当大鼠头部因温度升高而出现躲闪动作，导致头部离开激光发射位置时，光电控制探头感应刺激光将熄灭，自动停止计时，显示屏上即为热刺激后的潜伏期时间，以此作为温度痛阈的评价值。重复测量3次，两次测量间隔至少1min，取平均值作为其温度痛阈值。
[0037]另一方面，本专利技术提供了前述构建方法在制备偏头痛药物中的应用。
[0038]所述的应用为检测药物药效以进行质检。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种反复性偏头痛动物模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：腹腔注射2％戊巴比妥钠将大鼠麻醉；于大鼠颅中线与冠状缝交叉点旁左1.5mm，后1.5mm颅骨处钻孔；借助玻璃离子水门汀将套管基座固定在颅骨上；在套管周围缝合皮肤；大鼠术后第5
‑
7天，每天于固定时间测量机械痛阈和温度痛阈，于第7天痛阈恢复至基础痛阈水平者纳入研究，剔除导管脱落、体重显著下降、死亡以及痛阈未恢复到基础痛阈的大鼠；术后第8天开始至实验结束，每天于固定时间用微量注射器通过套管向大鼠硬脑膜匀速注射CGRP；在每次经套管给药后2h，进行机械痛阈和温度痛阈测定。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述的2％戊巴比妥钠的注射用量为50mg/kg。3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述的颅骨处钻孔直径为1mm。4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述的CGRP的注射量为6μg。5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述的CGRP的注射体积为20μL。6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述的CGRP的注射时长为5分钟。7.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，所述的CGRP的注射频率为1次/天。8.根据权利要求7所述的构建方法，其特征在于，所述的CGRP的注射天数为7天。9.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，目的检测物的给...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵永烈，王青，刘美斯，卢姿含，
申请(专利权)人：北京中医药大学第三附属医院，
类型：发明
国别省市：