一种能降解农业枯枝落叶废弃物的细菌菌株、其筛选方法及应用技术

本发明专利技术提供一种能降解农业枯枝落叶废弃物的细菌菌株、其筛选方法及应用，该菌株MDD 2020属于Ochrobactrumpseudintermeddium（假中间苍白杆菌属），2021年4月19日寄存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO.22199。利用菌株MDD 2020发酵的方法降解农业枯枝落叶废弃物，促进枯枝落叶堆肥的腐熟进程，为枯枝落叶堆肥化的推广利用提供技术支持，达到变废为宝、保护环境，促进农业可持续发展的目的，具有广阔的应用前景。具有广阔的应用前景。具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种能降解农业枯枝落叶废弃物的细菌菌株、其筛选方法及应用


[0001]本专利技术属于菌株生物
，具体涉及一种能降解农业枯枝落叶废弃物的细菌菌株、其筛选方法及应用。

技术介绍

[0002]木质素是构成植物木质部的复杂高分子化合物，是仅次于纤维素的第二大丰富的植物源材料。木质素是植物细胞壁的重要组成部分，约占植物体干质量的15%
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40%。自然界中的木质素的年光合产量约为200
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108吨。由于木质素结构复杂，富含木质素的农业和园林枯枝落叶废弃物不易腐烂降解，造成了堆肥还田的难度，绝大部分都被随意堆放在路边或就地焚烧，造成严重的大气污染，堆放过程会诱发田间的病虫害，同时也造成了宝贵资源的浪费。
[0003]将农业废弃物中的木质素进行固体有机废弃物资源化(堆肥)是解决这一问题简单有效的途径。研究表明，园林废弃物作为堆肥物料的调理剂，对堆肥物料的含水率、孔隙度和碳氮比等有良好的调节作用。而木质素结构复杂，降解难度大。天然条件下的木质素降解菌种类单一，数量较少，限制了木质素降解速率，阻碍了堆肥的腐熟进度。通过接种木质素降解菌菌剂，可以加速堆体升温，加快堆肥底物中木质素的分解，从而缩短堆肥腐熟的周期。通过联合堆肥化实验的结果显示，枯枝落叶堆肥养分丰富全面，病菌数量达到无害化，是一种成熟稳定和富含营养的优质有机肥和土壤改良剂。可见将枯枝落叶进行固体有机废弃物资源化（堆肥）是解决其无害化、再循环问题的有效途径。若能筛选到相应的高效降解功能菌株，并将其用于农业枯枝落叶废弃物堆肥生产，具有良好的应用前景和实用价值。

技术实现思路

[0004]为了克服现有技术中的缺陷，从而提供一株能降解农业枯枝落叶废弃物的细菌菌株及其筛选方法，目的在于筛选一种能够高效分解农业枯枝落叶废弃物中木质素的细菌，通过其对木质素的高效降解效果，达到加速枯枝落叶废弃物堆肥腐熟的目的。从而使农业枯枝落叶废弃物能够通过堆肥化得以大规模的资源化再利用，确保可持续农业的顺利发展。
[0005]为解决上述技术问题，本专利技术提供如下技术方案一种能降解农业枯枝落叶废弃物的细菌菌株，其中，该菌株MDD 2020属于假中间苍白杆菌属，2021年4月19日寄存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO. 22199。
[0006]作为本专利技术的另一方面，本专利技术提供一种MDD 2020细菌菌株的筛选方法，其对木质素降解菌进行30 d连续两代以枯枝落叶粉末为唯一碳源的固态富集和液态富集，在愈创木酚选择培养基上进行分离纯化。
[0007]优选的，所述固态富集和液态富集，其使用的培养基分别为固态富集培养基和液态富集培养基，配方如下，固态富集培养基：枯枝落叶粉末、水，枯枝落叶粉末与水的质量体
积比2g/ml；液态富集培养基：（NH4）2SO
4 0.5g/L，KH2PO
4 1g/L，MgSO4·
7 g/L H2O 0.5 g/L。
[0008]优选的，将菌株MDD 2020接入产酶培养基的中，振荡培养9
‑
21d。
[0009]优选的，产酶培养基的配方为（/L）：葡萄糖 20 g，酒石酸铵 0.2 g，梨树枝条粉 1 g，基础培养基100 mL，0.1 mol / L NaAc
‑
HAc 缓冲液（pH= 4.5） 100 mL，吐温80 1.0 gVB
1 1.0 mg。
[0010]作为本专利技术的另一方面，本专利技术提供一种用于MDD 2020细菌菌株筛选的培养基，其特征在于：包括固态富集培养基和/或液态富集培养基，配方如下，固态富集培养基：枯枝落叶粉末、水，枯枝落叶粉末与水的质量体积比2g/ml；液态富集培养基：（NH4）2SO
4 0.5g/L，KH2PO
4 1g/L，MgSO4·
7H2O 0.5 g/L。
[0011]作为本专利技术的另一方面，本专利技术提供一种MDD 2020细菌菌株的应用。
[0012]本专利技术的有益效果：本专利技术提供一株能降解农业枯枝落叶废弃物的细菌菌株，该菌株MDD 2020属于 Ochrobactrum pseudintermeddium(假中间苍白杆菌属)，2021年4月19日寄存于中国科学院微生物研究所，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，菌种保藏号为CGMCC NO.22199，建议的分类命名为 Ochrobactrum ciceri。其生物学特性为：在LB培养基上，37℃，培养36h，菌落近圆形、呈乳白色、表面湿润、光滑微凸、单菌落直径4mm左右，革兰氏阴性，接触酶、氧化酶阳性。吲哚阴性。利用微生物菌株MDD 2020发酵的方法降解农业枯枝落叶废弃物，促进枯枝落叶堆肥的腐熟进程，为枯枝落叶堆肥化的推广利用提供技术支持，达到变废为宝、保护环境，促进农业可持续发展的目的，具有广阔的应用前景。
附图说明
[0013]图1是本专利技术细菌MDD 2020的退色反应图；图2是本专利技术的细菌MDD 2020基于16S rDNA序列相似性的系统发育树；图3是本专利技术的细菌MDD 2020发酵粗酶液中Lip木质素过氧化物酶的活性图；图4是本专利技术的细菌MDD 2020发酵粗酶液中MnP锰过氧化物酶的活性图。
具体实施方式
[0014]为使本专利技术的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合说明书附图对本专利技术的具体实施方式做详细的说明。
[0015]本专利技术中使用的培养基配方和酶活力、固态降解能力测定方法如下：固态富集培养基：枯枝落叶粉末20 g（桃园土壤上层覆盖的桃树落叶和断枝，蒸馏水洗净，烘干粉碎后过60目筛），蒸馏水 10 ml。
[0016]液态富集培养基（/L）：（NH4）2SO
4 0.5g，KH2PO
4 1g，MgSO4·
7H2O 0.5 g。
[0017]愈创木酚选择培养基（/L）：愈创木酚1 g，KNO
3 2 g，MgSO
4 0.5 g，KH2PO
4 1 g，NaCl 1 g，Na2HPO
4 1 g，琼脂20 g。
[0018]LB
‑
愈创木酚培养基：LB培养基中加入1 g
·
L
‑1愈创木酚。
[0019]LB
‑
愈创木酚培养基：LB培养基中加入1 g
·
L
‑1愈创木酚。
[0020]LB
‑
苯胺蓝培养基：LB培养基加入0.1 g
·
L
‑1苯胺蓝。
[0021]产酶培养基（/L）：葡萄糖 20 g，酒石酸铵 0.2 g，枯枝落叶粉末1 g（桃园土壤上层覆盖的桃树落叶和断枝，蒸馏水洗净，烘干粉碎后过60目筛） 1 g，基础培养基100 mL，0.1 mol / L NaAc
‑
HAc 缓冲液（pH=本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种能降解农业枯枝落叶废弃物的细菌菌株，其特征在于：该菌株MDD 2020属于假中间苍白杆菌属，2021年4月19日寄存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO. 22199。2.权利要求1所述的细菌菌株的筛选方法，其特征在于：对降解菌进行30 d连续两代以枯枝落叶粉末为唯一碳源的固态富集和液态富集，在愈创木酚选择培养基上进行分离纯化。3.如权利要求2所述的筛选方法，其特征在于：所述固态富集和液态富集，其使用的培养基分别为固态富集培养基和液态富集培养基，配方如下，固态富集培养基：枯枝落叶粉末、水，枯枝落叶粉末与水的质量体积比2g/ml；液态富集培养基：（NH4）2SO
4 0.5g/L，KH2PO
4 1g/L，MgSO4·
7 g/L ，H2O 0.5 g/L。4.如权利要求2所述的筛选方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：张乃文，黄兆琴，陈婉，周绪龙，杜宇昂，
申请(专利权)人：江苏开放大学江苏城市职业学院，
类型：发明
国别省市：