从中华雪胆中提取的具有抗肠炎活性的葫芦烷型四环三萜类化合物及其制备方法与应用技术

本发明专利技术涉及从中华雪胆中提取的具有抗肠炎活性的葫芦烷型四环三萜类化合物及其制备方法与应用，可有效解决从中华雪胆中制备新的葫芦烷型四环三萜类化合物，并实现在制备治疗肠炎药物中的应用问题，解决的技术方案是，中华雪胆加乙醇回流提取，提取液减压浓缩成样品溶液，加水分散，用乙酸乙酯萃取，减压浓缩萃取溶液，经硅胶柱色谱，用二氯甲烷

【技术实现步骤摘要】
从中华雪胆中提取的具有抗肠炎活性的葫芦烷型四环三萜类化合物及其制备方法与应用


[0001]本专利技术涉及医药领域，特别是一种从中华雪胆中提取的具有抗肠炎活性的葫芦烷型四环三萜类化合物及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]中华雪胆为葫芦科雪胆属植物雪胆(Hemsleya chinensis)的块茎，现收载于《贵州中药材民族药材质量标准》和《湖北中药材质量标准》。味苦，性寒，具有清热解毒、消肿散结、止痛的功效，用于菌痢、肠炎等。中华雪胆广泛分布于我国西南部山区，如云南、四川、贵州等省，资源丰富且价格低廉。长期以来被作为西南地区的常用民间药物，治疗胃肠道疾病、牛羊等家畜腹泻等疾病。葫芦烷型四环三萜类成分为中华雪胆的主要活性成分。现中华雪胆等雪胆属植物提取物已被开发上市为雪胆素片，其主要成分为雪胆素甲、雪胆素乙等葫芦烷型四环三萜类成分，用于治疗菌痢、肠炎、支气管炎、急性扁桃体炎等疗效确切。遵循传统功效，同时结合对中华雪胆的前期研究，希望从中华雪胆中获得结构新颖、抗炎活性强的新葫芦烷型四环三萜类化合物，有效用于肠炎的治疗。但至今未见有从中华雪胆制备治疗肠炎活性的葫芦烷型四环三萜类化合物1(hemchininC)和化合物2(hemchininD)的公开报导。

技术实现思路

[0003]针对上述情况，为解决现有技术之缺陷，本专利技术之目的就是提供一种从中华雪胆中提取葫芦烷型四环三萜类化合物的制备方法及其应用，可有效解决从中华雪胆中提取葫芦烷型四环三萜类化合物，实现在制备治疗肠炎药物中的应用问题。
[0004]本专利技术解决的技术方案是，一种从中华雪胆中提取的葫芦烷型四环三萜类化合物，包括化合物1(hemchininC)和化合物2(hemchininD)，其分子式均为C
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H
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O6，不饱和度均为8，结构式分别为：
[0005][0006]其制备方法，包括以下步骤：
[0007](1)取干燥的中华雪胆块根15.0kg，每次加70％乙醇溶液80～300L，回流提取1～4次，每次提取1～4h，合并提取液，减压浓缩，得到相当于生药量1.0～3.0g/mL的样品溶液；
[0008](2)在步骤(1)的样品溶液中加5～10L分散成悬浮液，用乙酸乙酯重复萃取3～10
次，每次用量15～30L，充分振摇，静置分层，收集乙酸乙酯层，减压回收溶剂，得到干燥固体组分Fr.EtOAc(142.4～180.7g)；
[0009](3)组分Fr.EtOAc经80～300目硅胶柱色谱，硅胶柱d＝6～10cm、H＝30～50cm，用体积比1:0、50:1、25:1、10:1、5:1、0:1的二氯甲烷
‑
甲醇进行梯度洗脱，每个比例洗脱3～8个柱体积，收集10:1的洗脱液，减压回收溶剂，得到干燥粉末组分Fr.EtOAc
‑
4(12.1～21.6g)；
[0010](4)组分Fr.EtOAc
‑
4经中压FlashMCI柱色谱(220～330g)，用体积比30:70、50:50、70:30、90:10的甲醇
‑
水进行梯度洗脱，流速20～25mL/min，每个比例洗脱3～10个柱体积，收集70:30的洗脱液，减压回收溶剂，得到干燥粉末组分Fr.EtOAc
‑4‑
D(2.5～4.8g)；
[0011](5)组分Fr.EtOAc
‑4‑
D经中压FlashODS柱色谱(80～220g)，用体积比60:40、70:30、80:20的甲醇
‑
水进行梯度洗脱，流速10～20mL/min，每个比例洗脱5～10个柱体积，收集60:40的洗脱液，减压回收溶剂，得到干燥粉末组分Fr.EtOAc
‑4‑
D
‑
2(0.9～1.9g)；
[0012](6)组分Fr.EtOAc
‑4‑
D
‑
2用甲醇溶解成50mg/mL的样品溶液，经C18柱在半制备HPLC上进一步分离，洗脱溶剂为体积比57:43的甲醇
‑
水，3mL/min，分别收集44.36、50.89min的色谱峰，减压回收溶剂，得到干燥粉末状的化合物1(56.7～78.4mg)和化合物2(43.3～69.1mg)。本专利技术所述的化合物1(hemchininC)和化合物2(hemchininD)在制备治疗肠炎药物中的应用。
[0013]本专利技术经鉴定，是两个从中华雪胆提取的新的葫芦烷型四环三萜类化合物hemchininC和hemchininD，其制备方法易操作，导向性强，产品纯度高，该化合物可有效用于制备治疗肠炎的药物，开拓了中华雪胆的药用价值和商业价值，经济和社会效益巨大。
附图说明
[0014]图1为本专利技术化合物1、化合物2的化学结构图。
[0015]图2为本专利技术化合物1、化合物2的关键1H
‑1HCOSY和HMBC相关图。
[0016]图3为本专利技术化合物1、化合物2的关键NOESY相关图。
[0017]图4为本专利技术化合物1、化合物2的实验和计算ECD光谱图。
[0018]图5为本专利技术的工艺流程图。
具体实施方式
[0019]以下结合附图对本专利技术的具体实施方式作进一步详细说明。
[0020]实施例1
[0021]本专利技术在具体实施时，其制备方法如图5所示，包括以下步骤：
[0022](1)取干燥的中华雪胆块根15.0kg，每次加70％乙醇溶液200L，回流提取2次，每次提取2h，合并提取液，减压浓缩，得到相当于生药量2.0g/mL的样品溶液；
[0023](2)在步骤(1)的样品溶液中加10L分散成悬浮液，用乙酸乙酯重复萃取10次，每次用量20L，充分振摇，静置分层，收集乙酸乙酯层，减压回收溶剂，得到干燥固体组分Fr.
EtOAc
(175.7g)；
[0024](3)组分Fr.
EtOAc
经200目硅胶柱色谱，硅胶柱d＝8cm、H＝40cm，用体积比1:0、50:1、25:1、10:1、5:1、0:1的二氯甲烷
‑
甲醇进行梯度洗脱，每个比例洗脱8个柱体积，收集10:1的
洗脱液，减压回收溶剂，得到干燥粉末组分Fr.
EtOAc
‑
4(18.3g)；
[0025](4)组分Fr.
EtOAc
‑
4经中压FlashMCI柱色谱(330g)，用体积比30:70、50:50、70:30、90:10的甲醇
‑
水进行梯度洗脱，流速25mL/min，每个比例洗脱5个柱体积，收集70:30的洗脱液，减压回收溶剂，得到干燥粉末组分Fr.
EtOAc
‑4‑
D(3.8g)；
[0026](5)组分Fr.
EtOAc
‑4‑
D经中压FlashODS柱色谱(本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种从中华雪胆中提取葫芦烷型四环三萜类化合物，其特征在于，包括化合物1和化合物2，其分子式均为C
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H
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O6，不饱和度均为8，结构式分别为：2.权利要求1所述的从中华雪胆中提取葫芦烷型四环三萜类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取干燥的中华雪胆块根15.0kg，每次加70％乙醇溶液80～300L，回流提取1～4次，每次提取1～4h，合并提取液，减压浓缩，得到相当于生药量1.0～3.0g/mL的样品溶液；(2)在步骤(1)的样品溶液中加5～10L分散成悬浮液，用乙酸乙酯重复萃取3～10次，每次用量15～30L，充分振摇，静置分层，收集乙酸乙酯层，减压回收溶剂，得到干燥固体组分Fr.
EtOAc
；(3)组分Fr.
EtOAc
经80～300目硅胶柱色谱，硅胶柱d＝6～10cm、H＝30～50cm，用体积比1:0、50:1、25:1、10:1、5:1、0:1的二氯甲烷
‑
甲醇进行梯度洗脱，每个比例洗脱3～8个柱体积，收集10:1的洗脱液，减压回收溶剂，得到干燥粉末组分Fr.
EtOAc
‑
4；(4)组分Fr.
EtOAc
‑
4经中压FlashMCI柱色谱，用体积比30:70、50:50、70:30、90:10的甲醇
‑
水进行梯度洗脱，流速20～25mL/min，每个比例洗脱3～10个柱体积，收集70:30的洗脱液，减压回收溶剂，得到干燥粉末组分Fr.
EtOAc
‑4‑
D；(5)组分Fr.
EtOAc
‑4‑
D经中压FlashODS柱色谱，用体积比60:40、70:30、80:20的甲醇
‑
水进行梯度洗脱，流速10～20mL/min，每个比例洗脱5～10个柱体积，收集60:40的洗脱液，减压回收溶剂，得到干燥粉末组分Fr.
EtOAc
‑4‑
D
‑
2；(6)组分Fr.
EtOAc
‑4‑
D
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2用甲醇溶解成50mg/mL的样品溶液，经C18柱在半制备HPLC上进一步分离，洗脱溶剂为体积比57:43的甲醇
‑
水，3mL/min，分别收集44.36、50.89min的色谱峰，减压回收溶剂，得到干燥粉末状的化合物1和化合物2。3.根据权利要求2所述的从中华雪胆中提取葫芦烷型四环三萜类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取干燥的中华雪胆块根15.0kg，每次加70％乙醇溶液200L，回流提取2次，每次提取2h，合并提取液，减压浓缩，得到相当于生药量2.0g/mL的样品溶液；(2)在步骤(1)的样品溶液中加10L分散成悬浮液，用乙酸乙酯重复萃取10次，每次用量20L，充分振摇，静置分层，收集乙酸乙酯层，减压回收溶剂，得到干燥固体组分Fr.
EtOAc
；(3)组分Fr.
EtOAc
经200目硅胶柱色谱，硅胶柱d＝8cm、H＝40cm，用体积比1:0、50:1、25:1、10:1、5:1、0:1的二氯甲烷
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甲醇进行梯度洗脱，每个比例洗脱8个柱体积，收集10:1的洗脱液，减压回收溶剂，得到干燥粉末组分Fr.
EtOAc
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4；(4)组分Fr.
EtOAc
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4经中压FlashMCI柱色谱，用体积比30:70、50:50、70:30、90:10的甲
醇
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水进行梯度洗脱，流速25mL/min，每个比例洗脱5个柱体积，收集70:30的洗脱液，减压回收溶剂，得到干燥粉末组分Fr.
EtOAc
‑4‑
D；(5)组分Fr.
EtOAc
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D经中压FlashODS柱色谱，用体积比60:40、70:30、80:20的甲醇
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水进行梯度洗脱，流速20mL/min，每个比例洗脱5个柱体积，收集60:40的洗脱液，减压回收溶剂，得到干燥粉末组分Fr.
EtOAc
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D
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2；(6)组分Fr.
EtOAc
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2用甲醇溶解成50mg/mL的样品溶液，经C18柱在半制备HPLC上进一步分离，洗脱溶剂为体积比57:43的甲醇
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水，3mL/min，分别收集44....

【专利技术属性】
技术研发人员：池军，连飞鹤，代丽萍，朱利利，龚曼，郭辉，李敏，
申请(专利权)人：河南中医药大学，
类型：发明
国别省市：