本发明专利技术涉及一种百合愈伤组织培养方法与百合试管苗和百合人工种子的培养方法以及穴盘培养基，属于植物培养技术领域。本发明专利技术提供了一种百合愈伤组织的培养方法，包括如下步骤：(1)将百合珠芽接种于百合启动培养基上，得到百合苗；(2)剪取步骤(1)所述的百合苗的叶片作为外植体，将所述的外植体接种于愈伤组织诱导培养基中，培养30～40d，得到百合愈伤组织。利用该愈伤组织可以制备百合试管苗以及百合人工种子，为百合快速繁育提供了可以依据。为百合快速繁育提供了可以依据。为百合快速繁育提供了可以依据。
【技术实现步骤摘要】
一种百合愈伤组织培养方法与百合试管苗和百合人工种子的培养方法以及穴盘培养基
[0001]本专利技术涉及植物培养
，尤其涉及一种百合愈伤组织培养方法与百合试管苗和百合人工种子的培养方法以及穴盘培养基。
技术介绍
[0002]百合是百合科(Liliaceae)百合属(Lilium)多年生鳞茎草本植物。中国是百合属植物的主要原产地之一，全世界百合属植物大约94个原生种，主要分布于北半球温带和寒带地区，其中亚洲分布的百合属植物约58种，欧洲分布的约12种，北美洲分布的约24种。百合花型硕大、花姿优美，气味芳香，在鲜切花、盆花和园林绿地中广泛应用，除了具有较高的观赏价值外，还具有重要的食用和药用价值，其鳞茎具有消炎、止咳、镇定的功效。百合传统的繁殖方式主要有珠芽繁殖、小子球繁殖和鳞片繁殖3种方式，通过小鳞茎进行分株繁殖，一株百合每年只能得到1～3个小鳞茎，因而繁殖速度极慢。由于百合的常规繁殖率低，易感染病毒，所以对繁殖技术提出了更高的要求，人工繁殖技术对百合具有重要意义。开发一种不仅繁殖速度快，还能保持百合优良性状的培养方法是目前需要解决的问题。
[0003]基于此，提出本专利技术。
技术实现思路
[0004]本专利技术的目的在于提供体系稳定、出苗率高、简单实用的百合愈伤组织培养方法与百合试管苗和百合人工种子的培养方法以及穴盘培养基，为百合繁育提供一种新途径。
[0005]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0006]本专利技术提供了一种百合愈伤组织的培养方法，包括如下步骤：
[0007](1)将百合珠芽接种于百合启动培养基上，得到百合苗；
[0008](2)剪取步骤(1)所述的百合苗的叶片作为外植体，将所述的外植体接种于愈伤组织诱导培养基中，培养30～40d，得到百合愈伤组织。
[0009]作为优选，步骤(1)所述百合珠芽为经过消毒的百合珠芽；
[0010]所述消毒的试剂为酒精和/或氯化汞；
[0011]所述酒精的浓度为70～80vt％；所述酒精消毒的时间为28～32s；
[0012]所述氯化汞的浓度为0.08～0.12wt％；所述氯化汞消毒的时间为5～7min；
[0013]步骤(1)所述百合启动培养基以MS培养基为基础还包括如下浓度的组分：
[0014]6‑
BA 1.5～2.5mg/mL、NAA 0.15～0.25mg/mL、蔗糖60～90g/L、琼脂7.0～7.5g/L；
[0015]所述百合启动培养基的pH为5.8～6.0。
[0016]作为优选，步骤(2)所述外植体的大小为0.4～0.6cm
×
0.4～0.6cm；
[0017]步骤(2)所述愈伤组织诱导培养基以MS培养基为基础还包括如下浓度的组分：
[0018]NAA 0.5～2.0mg/mL、2,4
‑
D 0.5～2.0mg/mL、琼脂7.0～7.5g/L、蔗糖25～30g/L；
[0019]所述愈伤组织诱导培养基的pH为5.8～6.0。
[0020]本专利技术还提供了利用所述的培养方法培育得到的百合愈伤组织培育百合试管苗的方法，包括如下步骤：
[0021](4.1)将百合愈伤组织切成小块，将所述的小块接种于丛生芽诱导培养基中，培养20～30d，得到百合丛生芽；
[0022](4.2)将百合丛生芽分成单芽后，将所述的单芽接种于生根培养基中，培养25～35d，得到百合试管苗。
[0023]作为优选，步骤(4.1)所述小块的大小为0.3～0.5cm
×
0.3～0.5cm
×
0.1～0.3cm；
[0024]步骤(4.1)所述丛生芽诱导培养基以MS培养基为基础还包括如下浓度的组分：
[0025]6‑
BA 1.0～3.0mg/mL、NAA 0～0.2mg/mL、IAA0～0.2mg/mL、琼脂7.0～7.5g/L、蔗糖45～60g/L；
[0026]所述丛生芽诱导培养基的pH为5.8～6.0。
[0027]作为优选，步骤(4.2)所述生根培养基以MS培养基为基础，还包括如下浓度的组分：
[0028]NAA 0.4～0.6mg/mL、琼脂7.0～7.5g/L、蔗糖25～30g/L；
[0029]所述生根培养基的pH为5.8～6.0；
[0030]所述生根培养基中还包括浓度为0.8～1.2g/L的活性炭。
[0031]本专利技术还提供了利用所述的培养方法培育得到的百合愈伤组织培育百合人工种子的方法，包括如下步骤：
[0032](7.1)将百合愈伤组织接种于悬浮培养基中，摇床培养28～32d，得到预培养的百合体细胞；将所述的预培养百合体细胞转接入固体培养基中，继续培养14～21d，得到百合体细胞胚；
[0033](7.2)将步骤(7.1)所述的百合体细胞胚与包埋剂混合，得到繁殖体，将所述的繁殖体与凝固剂反应14～16min，得到百合人工种子。
[0034]作为优选，步骤(7.1)所述悬浮培养基以MS培养基为基础还包括如下浓度的组分：
[0035]6‑
BA 1.0～3.0mg/mL、NAA 0.1～0.3mg/mL、蔗糖25～30g/L；
[0036]所述悬浮培养基的pH为5.8～6.0；
[0037]所述摇床培养为暗培养；
[0038]所述摇床培养的温度为23～27℃；
[0039]所述摇床培养的转速为90～110rpm；
[0040]所述摇床培养时每14～16d更换悬浮培养基1次；
[0041]步骤(7.1)所述固体培养基以MS培养基为基础还包括如下浓度的组分：
[0042]6‑
BA 1.0～3.0mg/mL、NAA 0.1～0.3mg/mL、蔗糖25～30g/L、琼脂7.0～7.5g/L；
[0043]所述固体培养基的pH为5.8～6.0。
[0044]作为优选，所述包埋剂以MS培养基为基础还包括如下浓度的组分：
[0045]6‑
BA 1.5～2.5mg/mL、NAA 0.15～0.25mg/mL、蔗糖25～30g/L；
[0046]所述包埋剂的pH为5.8～6.0；
[0047]所述凝固剂以水为溶剂包括如下浓度的组分：海藻酸钠3～5wt％、氯化钙1.5～2.5wt％。
[0048]本专利技术还提供了一种提高所述的方法得到的百合人工种子萌发率的穴盘基质，包
括如下质量比的组分：蛭石：椰糠：营养土为0.5～1.5:0～1.5:1.5～2.5。
[0049]本专利技术提供了一种百合愈伤组织培养方法与百合试管苗和百合人工种子的培养方法以及穴盘培养基，本专利技术的方法与现有技术的方法的优势在于：
[0050]利用本专利技术的方法可以得到大量的百合愈伤组织。
[0051]利用本专利技术培育百合人工种子的方法得到的百合本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种百合愈伤组织的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将百合珠芽接种于百合启动培养基上，得到百合苗；(2)剪取步骤(1)所述的百合苗的叶片作为外植体，将所述的外植体接种于愈伤组织诱导培养基中，培养30～40d，得到百合愈伤组织。2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，步骤(1)所述百合珠芽为经过消毒的百合珠芽；所述消毒的试剂为酒精和/或氯化汞；所述酒精的浓度为70～80vt％；所述酒精消毒的时间为28～32s；所述氯化汞的浓度为0.08～0.12wt％；所述氯化汞消毒的时间为5～7min；步骤(1)所述百合启动培养基以MS培养基为基础还包括如下浓度的组分：6
‑
BA 1.5～2.5mg/mL、NAA 0.15～0.25mg/mL、蔗糖60～90g/L、琼脂7.0～7.5g/L；所述百合启动培养基的pH为5.8～6.0。3.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，步骤(2)所述外植体的大小为0.4～0.6cm
×
0.4～0.6cm；步骤(2)所述愈伤组织诱导培养基以MS培养基为基础还包括如下浓度的组分：NAA 0.5～2.0mg/mL、2,4
‑
D 0.5～2.0mg/mL、琼脂7.0～7.5g/L、蔗糖25～30g/L；所述愈伤组织诱导培养基的pH为5.8～6.0。4.利用权利要求1～3任意一项所述的培养方法培育得到的百合愈伤组织培育百合试管苗的方法，其特征在于，包括如下步骤：(4.1)将百合愈伤组织切成小块，将所述的小块接种于丛生芽诱导培养基中，培养20～30d，得到百合丛生芽；(4.2)将百合丛生芽分成单芽后，将所述的单芽接种于生根培养基中，培养25～35d，得到百合试管苗。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(4.1)所述小块的大小为0.3～0.5cm
×
0.3～0.5cm
×
0.1～0.3cm；步骤(4.1)所述丛生芽诱导培养基以MS培养基为基础还包括如下浓度的组分：6
‑
BA 1.0～3.0mg/mL、NAA 0～0.2mg/mL、IAA0～0.2mg/mL、琼脂7.0～7.5g/L、蔗糖45～60g/L；所述丛生芽诱导培养...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭兰萍，张成才，康传志，王升，王红阳，周涛，
申请(专利权)人：中国中医科学院中药研究所，
类型：发明
国别省市：
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