多核苷酸及医药组合物制造技术

本发明专利技术的课题在于提供在翻译区具有修饰部位的同时还维持翻译活性的多核苷酸。上述课题可通过下述多核苷酸而得到解决，所述多核苷酸包含从起始密码子至终止密码子的翻译区，上述翻译区包含n个密码子，上述n为2以上的正整数，上述n个密码子各自包含第1个、第2个及第3个核苷酸，上述n个密码子中的至少2个密码子中的第1个核苷酸为糖部修饰核苷酸。的第1个核苷酸为糖部修饰核苷酸。的第1个核苷酸为糖部修饰核苷酸。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】多核苷酸及医药组合物


[0001]本专利技术涉及多核苷酸及包含上述多核苷酸的医药组合物。

技术介绍

[0002]细胞中的遗传信息通过下述方式传递:以DNA为模板，利用RNA合成酶来转录信使RNA(以下，有时称为“mRNA”)；核糖体与经转录的单链mRNA结合，通过翻译而合成蛋白质。该传递形式在分子生物学中被称为“中心法则”，是原核生物及真核生物两者共通的基本原理。
[0003]作为遗传信息传递的中间物质的mRNA具有用于被核糖体直接识别且翻译成蛋白质的碱基序列信息和结构。
[0004]近年来，对核酸医药作为下一代医药的期待高涨。作为mRNA的多核苷酸(以下，也称为“人工mRNA”)可以用作基于表达增强或表达亢进的蛋白质补充疗法型核酸医药或者基于肽表达的疫苗疗法型核酸医药。
[0005]然而，已知若将仅由天然碱基构成的人工mRNA从外部导入细胞内，则因与细胞内的Toll样受体(TLR3、TLR7、TLR8、RIG
‑
I等)结合而迅速引起免疫响应，导致炎症反应及蛋白质翻译量的下降(非专利文献1)。为了在细胞内表达蛋白质，需要设法以某种形式降低人工mRNA自身的免疫反应性、并且不使翻译量下降。另外，仅由天然碱基构成的RNA对于核酸分解酶脆弱，因此从赋予稳定性的观点考虑，也需要导入修饰核苷酸(非专利文献2)。修饰核苷酸中，包含2
’‑
O
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甲基化RNA、2
’‑
F化RNA、交联型核酸等糖部修饰核苷酸的多核苷酸显示在降低核酸医药的免疫反应性、赋予对核酸分解酶的耐受性方面均有效(非专利文献3)。
[0006]近年来，正积极进行如下研究：将利用体外转录法(in vitro transcription，以下，称为“IVT”)在试管内人工合成的mRNA用作药品(非专利文献4)。
[0007]也不断报道了一定的成果，例如，非专利文献5中报道在以黑色素瘤患者为对象的人工mRNA癌症疫苗的临床试验中，从开始施予癌症疫苗起转移发病率大幅减少。
[0008]然而，这些临床应用的人工mRNA通过IVT来制作。由IVT制造的人工mRNA存在以下2个问题。第一，出于降低免疫反应性、赋予对核酸分解酶的稳定性的目的而导入的修饰核苷酸的导入位置无法控制。专利文献1中公开了下述事例：就通过IVT而导入有2
’‑
F化修饰RNA的人工mRNA而言，肽翻译能力减弱
·
消失。第二，除了被IVT中使用的RNA合成酶识别为基质的修饰核苷酸以外，无法导入。同样地，专利文献1中公开了包含2
’‑
O
‑
甲基化修饰RNA的人工mRNA难以通过使用了通常RNA聚合酶的IVT反应来制备。
[0009]因此，就通过IVT导入修饰核苷酸而制作的人工mRNA而言，难以说对于修饰核苷酸的位置及种类进行了充分的研究。
[0010]报道了利用将多个RNA化学连结的技术来人工合成mRNA的方法(非专利文献6、7)。使用该方法时，能够将含有糖部修饰的修饰核苷酸导入至包含编码序列(Coding Sequence，以下，有时称为“CDS”)的人工mRNA的任意位置。实际上，非专利文献6及7中公开了制作在mRNA的CDS中的1个部位导入有2
’‑
O
‑
甲基化修饰RNA的人工mRNA，且其肽翻译能力
得到确认。另一方面，公开了根据糖部修饰核苷酸的导入位置不同，肽翻译能力显著减弱，因此，为了作为核酸医药实现充分低的免疫反应性、高的稳定性，与修饰核苷酸的修饰率、位置及种类相关的知识是必要的。
[0011]现有技术文献
[0012]专利文献
[0013]专利文献1：国际公开第2014/093574号
[0014]非专利文献
[0015]非专利文献1：Nature Reviews Drug Discovery、第13卷、759
‑
780页(2014)
[0016]非专利文献2：Nature Biotechnology、第35卷、第3号、238
‑
248页(2017)
[0017]非专利文献3：Drug Discovery Today、第13卷、第19/20号、842
‑
855页(2008)
[0018]非专利文献4：Nature Biotechnology、第35卷、第3号、193
‑
197页(2017)
[0019]非专利文献5：Nature、第547卷、第7662号、222
‑
226页(2017)
[0020]非专利文献6：Nucleic Acids Research、第44卷、第2号、852
‑
862页(2015)
[0021]非专利文献7：Genes、第10卷、第2号、84页(2019)

技术实现思路

[0022]专利技术所要解决的课题
[0023]本专利技术的目的在于提供在翻译区具有修饰部位的同时还维持翻译活性的多核苷酸。
[0024]用于解决课题的手段
[0025]本申请的专利技术人进行了深入研究，结果发现即使对构成翻译区的多个密码子各自包含的第1个、第2个及第3个核苷酸中的第1个核苷酸的糖部进行修饰，也可维持翻译活性。
[0026]本专利技术包括以下的实施方式。
[0027][1]多核苷酸，其包含从起始密码子至终止密码子的翻译区，
[0028]上述翻译区包含n个密码子，上述n为2以上的正整数，
[0029]上述n个密码子各自包含第1个、第2个及第3个核苷酸，
[0030]上述n个密码子中的至少2个密码子中的第1个核苷酸为糖部修饰核苷酸。
[0031][2]如[1]所述的多核苷酸，其中，上述糖部修饰核苷酸包含至少2
’
位被修饰的糖部。
[0032][3]如[2]所述的多核苷酸，其中，上述至少2
’
位被修饰的糖部选自以下的糖部，
[0033][化学式1][0034][0035][4]如[1]～[3]中任一项所述的多核苷酸，其中，上述糖部修饰核苷酸包含与选自由腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶及尿嘧啶组成的组中的碱基对应的碱基部，
[0036]上述碱基的种类为至少2种。
[0037][5]如[1]～[4]中任一项所述的多核苷酸，其中，上述糖部修饰核苷酸的至少一个包含修饰碱基部。
[0038][6]如[1]～[5]中任一项所述的多核苷酸，其中，上述n个密码子的全部中的第1个核苷酸均为糖部修饰核苷酸。
[0039][6
‑
1]如[1]～[5]中任一项所述的多核苷酸，其中，上述n个密码子中的第1个核苷酸为糖部修饰核苷酸的比例为5％以上。
[0040][6
‑
2]如[1]～[5]中任一项所述的多核苷酸，其中，上述n个密码子中本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.多核苷酸，其包含从起始密码子至终止密码子的翻译区，所述翻译区包含n个密码子，所述n为2以上的正整数，所述n个密码子各自包含第1个、第2个及第3个核苷酸，所述n个密码子中的至少2个密码子中的第1个核苷酸为糖部修饰核苷酸。2.如权利要求1所述的多核苷酸，其中，所述糖部修饰核苷酸包含至少2
’
位被修饰的糖部。3.如权利要求2所述的多核苷酸，其中，所述至少2
’
位被修饰的糖部选自以下的糖部，[化学式1]4.如权利要求1～3中任一项所述的多核苷酸，其中，所述糖部修饰核苷酸包含与选自由腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶及尿嘧啶组成的组中的碱基对应的碱基部，所述碱基的种类为至少2种。5.如权利要求1～4中任一项所述的多核苷酸，其中，所述糖部修饰核苷酸的至少一个包含修饰碱基部。6.如权利要求1～5中任一项所述的多核苷酸，其中，所述n个密码子的全部中的第1个核苷酸均为糖部修饰核苷酸。7.如权利要求1～6中任一项所述的多核苷酸，其中，所述终止密码子的第1个、第2个及第3个核苷酸为糖部修饰核苷酸。8.如权利要求1～7中任一项所述的多核苷酸，其中，所述起始密码子的第1个、第2个及第3个核苷酸为糖部修饰核苷酸。9.如权利要求1～8中任一项所述的多核苷酸，其中，所述n个密码子中的至少一个密码子中的第2个核苷酸为糖部修饰核苷酸。10.如权利要求1～9中任一项所述的多核苷酸，其中，所述n个密码子中的至少一个密码子中的第3个核苷酸为糖部修饰核苷酸。11.如权利要求1～10中任一项所述的多核苷酸，其中，所述n为2～2000的整数。12.如权利要求1～11中任一项所述的多核苷酸，其还包含5
’
侧非翻译区。13.如权利要求12所述的多核苷酸，其中，所述5
’
侧非翻译区包含含有以下碱基部的碱基部修饰核苷酸，[化学式2]
式中，R为碳原子数1～6的烷基。14.如权利要求12或13所述的多核苷酸，其中，所述5
’
侧非翻译区的自5
’<...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿部洋，岩井宏徒，本间正一，浅野奏，原田兼司，山本润一郎，筱原史一，本泽庆一，木村康明，中本航介，
申请(专利权)人：协和麒麟株式会社，
类型：发明
国别省市：